【摘要】：苦丁茶是我國民間傳統(tǒng)的藥食兩用植物,異綠原酸是其主要活性成分之一,研究表明苦丁茶中異綠原酸類化合物具有良好的抗炎功效,但對其抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的研究較少,本課題將對苦丁茶中異綠原酸的提取純化工藝及抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的作用進(jìn)行研究。為測定苦丁茶中異綠原酸的含量,采用高效液相色譜法進(jìn)行檢測,色譜條件為:流速1.0 m L/min;柱溫40℃;進(jìn)樣量10μL;檢測波長為325 nm。結(jié)果表明:苦丁茶中三種異綠原酸的進(jìn)樣量在0.02μg~2.00μg范圍內(nèi)均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,穩(wěn)定性、精密度、重復(fù)性和加樣回收率結(jié)果良好,符合定量分析的要求。本試驗(yàn)所建立的含量測定方法準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性好,為苦丁茶中異綠原酸的進(jìn)一步研究應(yīng)用提供了依據(jù)。為充分提取苦丁茶中的異綠原酸成分,選用水提取的方法,并運(yùn)用L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對苦丁茶中異綠原酸水提工藝條件進(jìn)行優(yōu)化,以總異綠原酸含量為指標(biāo),采用高效液相色譜法測定含量。結(jié)果表明,第1次補(bǔ)足1.83倍吸水量后加10倍量水,浸泡2 h,其余每次加10倍量水,共提取3次,每次煎煮1 h,為苦丁茶中異綠原酸的最佳水提工藝。為純化、富集苦丁茶中的異綠原酸成分,優(yōu)化苦丁茶中異綠原酸純化、富集工藝參數(shù),運(yùn)用柱層析的方法,通過靜態(tài)吸附和解吸附試驗(yàn)篩選出最佳樹脂為MCI-GEL HP50SS,并通過吸附和解吸附試驗(yàn)對純化工藝參數(shù)進(jìn)行了考察,結(jié)果為:采用濕法上樣,上樣柱溫30℃,上樣流速為3 BV/h,上樣液濃度為4.32 mg/m L,上樣液量為10 m L,洗脫流速為3 BV/h,先用5 BV水洗脫除雜,再用30%乙醇溶液洗脫10 BV,可較好地純化富集苦丁茶中異綠原酸,經(jīng)樹脂純化后的干燥品中總異綠原酸的純度為82.30%,純化倍數(shù)為9.53,總異綠原酸的純化保留率為73.40%。為研究苦丁茶中異綠原酸抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎作用,采用足趾注入完全弗氏佐劑的方法制備小鼠類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型,尾靜脈注射給予高、中、低劑量異綠原酸溶液和陽性對照藥醋酸地塞米松溶液,通過比較各組小鼠的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎檢測指標(biāo)來評價(jià)苦丁茶中異綠原酸抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的作用。結(jié)果如下:小鼠足趾腫脹抑制率結(jié)果顯示,正常對照組小鼠在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中未出現(xiàn)關(guān)節(jié)炎癥狀,其他各組則有不同程度的關(guān)節(jié)腫脹癥狀表現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,陽性對照組和異綠原酸中、高劑量組均對小鼠足腫脹有明顯的抑制作用,與模型組對比具有極顯著差異(P0.01),其對小鼠足腫脹抑制率依次為:77.33%、57.11%、79.51%;苦丁茶中異綠原酸低劑量組對小鼠足腫脹有抑制作用,與模型組對比具有顯著性差異(P0.05),其對小鼠足腫脹抑制率為9.85%。組織病理學(xué)檢查結(jié)果顯示,正常對照組小鼠組織切片骨結(jié)構(gòu)完整,未見任何組織腫脹和病變。與正常對照組比較,模型組小鼠皮下組織彌漫性炎癥,伴大量炎性細(xì)胞浸潤。與模型組比較,異綠原酸各給藥劑量組和陽性對照組均能不同程度減輕佐劑性關(guān)節(jié)炎小鼠炎癥癥狀,減少炎性細(xì)胞浸潤。異綠原酸高劑量組的療效相對于陽性對照組更為顯著,徹底遏制了佐劑性關(guān)節(jié)炎小鼠足部組織病理改變,這一結(jié)果表明,異綠原酸對佐劑誘導(dǎo)的AA具有確切的治療作用,能有效抑制炎性細(xì)胞浸潤,從而減輕炎癥反應(yīng),對關(guān)節(jié)組織的破壞、損傷產(chǎn)生積極的改善和保護(hù)作用。血清生化指標(biāo)測定結(jié)果顯示,陽性對照組和異綠原酸中、高劑量組小鼠血清中NO水平均顯著降低,與模型組相比差異顯著(P0.05);陽性對照組和異綠原酸中、高劑量組小鼠血清中PGE2水平均顯著降低,與模型組比較差異顯著(P0.05)。本試驗(yàn)通過對苦丁茶中異綠原酸的提取純化工藝研究,得到了純度較高的苦丁茶異綠原酸,通過對佐劑性關(guān)節(jié)炎小鼠動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究,發(fā)現(xiàn)苦丁茶異綠原酸具有良好的抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎藥理作用,為苦丁茶異綠原酸的進(jìn)一步研究奠定了良好的基礎(chǔ),提供了一定的科學(xué)依據(jù)。
【圖文】：

高效液相色譜圖

圖 3-1 不同溫度對樹脂吸附量的影響Fig 3-1 Effect of different temperature on adsorption capacity of re3.3 吸附動(dòng)力學(xué)測定結(jié)果以吸附時(shí)間為橫坐標(biāo)，，吸附量為縱坐標(biāo)，分別繪制異綠原酸 異綠原酸 B 和異綠原酸 C 的吸附動(dòng)力學(xué)曲線，結(jié)果見圖 3-2，由圖知，在 6 h 內(nèi)樹脂對三種異綠原酸的吸附量逐漸增加，隨后在 6 h基本達(dá)到吸附平衡，因此，最佳的吸附時(shí)間為 6 h。
【學(xué)位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R284;R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2609383