【摘要】：目的采用四氯化碳誘導(dǎo)的小鼠肝纖維化模型和人源肝星狀細(xì)胞系LX-2細(xì)胞模型,探討黃連素防治肝纖維化的作用及其分子機(jī)制。方法預(yù)防性給藥研究中將C57BL/6小鼠分為正常組、肝纖維化組、黃連素預(yù)防組,治療性給藥研究中將C57BL/6小鼠分為正常組、肝纖維化組、黃連素治療組。腹腔注射四氯化碳誘導(dǎo)肝纖維化動(dòng)物模型,黃連素預(yù)防組在造模的同時(shí)給予黃連素治療6周。黃連素治療組在造模3周后給予黃連素治療。6周后測(cè)定丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(aspartate transaminase,AST)活性,HE染色和天狼猩紅染色觀察肝臟病理形態(tài)學(xué)改變,測(cè)定羥脯氨酸含量,免疫組化法檢測(cè)肝臟α平滑肌肌動(dòng)蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)、骨橋蛋白(osteopontin,OPN)和CD68的表達(dá),同時(shí)用Western blot和q-PCR檢測(cè)肝臟中α-SMA、I型膠原α1(collagen,type I,alpha 1,Col1α1)和基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑-1(tissue inhibitors of matrix metalloproteinase 1,TIMP-1)、白細(xì)胞介素(IL-1β)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的含量。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中采用Western blot檢測(cè)α-SMA、Col1α1、TGFβ1、p-Smad2、p-p65、NOX4的表達(dá),免疫熒光檢測(cè)p65入核情況。結(jié)果與肝纖維化模型組相比,黃連素預(yù)防組和治療組均能使肝臟損傷和纖維化程度明顯減輕,膠原合成和沉積減少,炎性反應(yīng)減輕,ALT和AST活性下降,纖維化指標(biāo)α-SMA、OPN、Col1α1、TIMP-1表達(dá)減少,炎性指標(biāo)CD68、IL-1β和TNF-α表達(dá)減少。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)黃連素下調(diào)α-SMA、Col1α1與TGFβ1的表達(dá),下調(diào)p-Smad2、p-p65、NOX4的表達(dá),抑制p65入核。結(jié)論黃連素通過(guò)抑制炎癥和氧化應(yīng)激,減少膠原沉積,達(dá)到防治小鼠肝纖維化的效應(yīng)。
【圖文】：

18圖 1 黃連素干預(yù)肝纖維化的病理形態(tài)學(xué)結(jié)果，HE 染色、天狼猩紅染色、免疫組化。*P<0.05**P<0.01，***P<0.001 vs CCl4組。Fig.1. Berberine protects against liver fibrosis in mice and the pathological characteristics，HE staining，，Sirius red staining，and IHC. *P<0.05, **P<0.01 ,***P<0.001 vs CCl4group.

AST 酶活力值均明顯升高；與模型組比較，黃連素預(yù)防組的 ALT，AST 酶活力值均明顯降低（P<0.01）。如圖2C 所示，黃連素預(yù)防組與模型組比較，肝組織的羥脯氨酸含量，明顯降低（P<0.05）。圖 2 小鼠血清 ALT，AST 指標(biāo)及肝臟羥脯氨酸含量。 *P<0.05, **P<0.01 vs CCl4組。Fig.2. The levels of ALT, AST and hydroxyproline content in mice. *P<0.05, **P<0.01 vs CCl4group.2.4.1.6 肝組織中 CD68 的表達(dá)如圖 3A 和 B 所示，正常組肝組織中 CD68 蛋白免疫組織化學(xué)染色陽(yáng)性表達(dá)水平較低，主要分布在肝血竇；模型組的陽(yáng)性表達(dá)升高，除在肝血竇中表達(dá)，還有表達(dá)在匯管區(qū)和纖維間隔；黃連素預(yù)防組的 CD68 陽(yáng)性表達(dá)則明顯降低（P<0.05）。2.4.1.7 肝臟中 IL-1β、TNF-α 炎癥基因表達(dá)水平如圖 3C 和 D 所示，與正常組比較，模型組肝臟中 IL-1β、TNF-α 表達(dá)明顯上調(diào)；黃連素預(yù)防組與模型組比較，兩者則明顯下調(diào)（P<0.01）。
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2608838