發(fā)布時間：2020-03-31 08:35

【摘要】：目的采用四氯化碳誘導的小鼠肝纖維化模型和人源肝星狀細胞系LX-2細胞模型,探討黃連素防治肝纖維化的作用及其分子機制。方法預防性給藥研究中將C57BL/6小鼠分為正常組、肝纖維化組、黃連素預防組,治療性給藥研究中將C57BL/6小鼠分為正常組、肝纖維化組、黃連素治療組。腹腔注射四氯化碳誘導肝纖維化動物模型,黃連素預防組在造模的同時給予黃連素治療6周。黃連素治療組在造模3周后給予黃連素治療。6周后測定丙氨酸轉氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸轉氨酶(aspartate transaminase,AST)活性,HE染色和天狼猩紅染色觀察肝臟病理形態(tài)學改變,測定羥脯氨酸含量,免疫組化法檢測肝臟α平滑肌肌動蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)、骨橋蛋白(osteopontin,OPN)和CD68的表達,同時用Western blot和q-PCR檢測肝臟中α-SMA、I型膠原α1(collagen,type I,alpha 1,Col1α1)和基質金屬蛋白酶組織抑制劑-1(tissue inhibitors of matrix metalloproteinase 1,TIMP-1)、白細胞介素(IL-1β)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的含量。細胞實驗中采用Western blot檢測α-SMA、Col1α1、TGFβ1、p-Smad2、p-p65、NOX4的表達,免疫熒光檢測p65入核情況。結果與肝纖維化模型組相比,黃連素預防組和治療組均能使肝臟損傷和纖維化程度明顯減輕,膠原合成和沉積減少,炎性反應減輕,ALT和AST活性下降,纖維化指標α-SMA、OPN、Col1α1、TIMP-1表達減少,炎性指標CD68、IL-1β和TNF-α表達減少。細胞實驗中檢測黃連素下調α-SMA、Col1α1與TGFβ1的表達,下調p-Smad2、p-p65、NOX4的表達,抑制p65入核。結論黃連素通過抑制炎癥和氧化應激,減少膠原沉積,達到防治小鼠肝纖維化的效應。
【圖文】：

18圖 1 黃連素干預肝纖維化的病理形態(tài)學結果，HE 染色、天狼猩紅染色、免疫組化。*P<0.05**P<0.01，***P<0.001 vs CCl4組。Fig.1. Berberine protects against liver fibrosis in mice and the pathological characteristics，HE staining，，Sirius red staining，and IHC. *P<0.05, **P<0.01 ,***P<0.001 vs CCl4group.

AST 酶活力值均明顯升高；與模型組比較，黃連素預防組的 ALT，AST 酶活力值均明顯降低（P<0.01）。如圖2C 所示，黃連素預防組與模型組比較，肝組織的羥脯氨酸含量，明顯降低（P<0.05）。圖 2 小鼠血清 ALT，AST 指標及肝臟羥脯氨酸含量。 *P<0.05, **P<0.01 vs CCl4組。Fig.2. The levels of ALT, AST and hydroxyproline content in mice. *P<0.05, **P<0.01 vs CCl4group.2.4.1.6 肝組織中 CD68 的表達如圖 3A 和 B 所示，正常組肝組織中 CD68 蛋白免疫組織化學染色陽性表達水平較低，主要分布在肝血竇；模型組的陽性表達升高，除在肝血竇中表達，還有表達在匯管區(qū)和纖維間隔；黃連素預防組的 CD68 陽性表達則明顯降低（P<0.05）。2.4.1.7 肝臟中 IL-1β、TNF-α 炎癥基因表達水平如圖 3C 和 D 所示，與正常組比較，模型組肝臟中 IL-1β、TNF-α 表達明顯上調；黃連素預防組與模型組比較，兩者則明顯下調（P<0.01）。
【學位授予單位】：廣東藥科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 姚琦馥;余波;;我國黃連價格指數(shù)波動分析[J];價格月刊;2016年11期

2 馬衛(wèi)德;趙殿元;唐麗;;肝臟巨噬細胞的研究進展[J];細胞與分子免疫學雜志;2016年02期

3 甄茂川;劉平果;趙一麟;吳紹峰;俞可克;尹震宇;;結締組織生長因子通過ERK1/2和PI3K信號通路促進大鼠肝星狀細胞遷移和基質金屬蛋白酶2表達[J];中華普通外科學文獻(電子版);2014年05期

4 夏海珊;陳少茹;鐘月春;呂思敏;陳麗思;黃志榮;吳鐵;鄒麗宜;;肝纖維化的發(fā)病機制和藥物治療現(xiàn)況[J];中國醫(yī)藥導報;2014年18期

5 馮英巧;楊元生;崔淑蘭;陳墾;王暉;;肝纖維化實驗動物模型造模方法及應用研究進展[J];廣東藥學院學報;2013年05期

6 王美玲;陸倫根;;肝纖維化治療研究進展[J];實用肝臟病雜志;2013年04期

7 李俊峰;鄭素軍;段鐘平;;氧化應激在肝纖維化中的作用及治療對策[J];世界華人消化雜志;2013年17期

8 胡曉霞;王艷;王妮;;p38MAPK、NF-κB與氧化應激在肝纖維化中作用[J];中國公共衛(wèi)生;2013年06期

9 李豐衣;張琳;聶為民;;氧化應激在肝纖維化發(fā)展過程中的作用[J];中華中醫(yī)藥學刊;2012年04期

10 李玉賢;張艷麗;左靜靜;尚遂存;;黃連素治療糖尿病的臨床應用[J];中國醫(yī)藥指南;2012年08期

相關博士學位論文 前3條

1 顏鳳;Nox4型NADPH氧化酶在TGF-β調節(jié)內皮細胞凋亡和表型分化中的作用及機制[D];山東大學;2014年

2 高姍;上海市區(qū)原發(fā)性肝癌的流行病學研究[D];復旦大學;2011年

3 李蕾;肝纖維化中肝星狀細胞遷移及RhoA作用機制的研究[D];復旦大學;2006年

本文編號：2608838