【摘要】：目的:帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是繼阿爾茲海默病(Alzheimer’s disease,AD)之后與衰老相關(guān)的第二大神經(jīng)退行性疾病,多種綜合性因素參與PD的發(fā)生發(fā)展,然而其確切病理機(jī)制尚未完全闡明。目前對于PD尚無理想的治療方法,一線抗PD藥物左旋多巴等只能緩解PD的運(yùn)動癥狀,但無法延緩PD的病理進(jìn)程,且長期應(yīng)用還會引發(fā)一系列的副作用,甚至加重疾病進(jìn)程。因此,闡明PD病理機(jī)制并尋找有效緩解PD病程的治療藥物對PD的治療顯得尤為重要。黃芪甲苷(Astragaloside IV,AS)被證實(shí)具有明顯的抗炎、抗氧化等多種藥理學(xué)作用。最近的研究表明,NLRP3炎性小體和Nrf2在PD的發(fā)病過程中扮演著重要的角色,且研究證實(shí),Nrf2可負(fù)向調(diào)節(jié)NLRP3的水平。本研究中,我們以NLRP3炎性小體介導(dǎo)的神經(jīng)炎癥和Nrf2為切入點(diǎn),首先在動物模型上了探索黃芪甲苷對MPTP誘導(dǎo)的PD動物模型的神經(jīng)保護(hù)作用,進(jìn)一步在LPS誘導(dǎo)的BV2細(xì)胞模型上探討了發(fā)揮作用的可能機(jī)制,以期為對PD的治療提供理論支持。方法:應(yīng)用C57BL/6小鼠腹腔注射MPTP(1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶),18mg/kg,i.p,4次/天,間隔2 h/次,建立小鼠急性MPTP損傷模型。造模前1周,分別給予治療組不同劑量的AS(10 mg/kg、40 mg/kg)口服灌胃治療。造模結(jié)束后第1,3,5天采用轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn),第6天采用Y迷宮實(shí)驗(yàn)檢測小鼠的運(yùn)動協(xié)調(diào)和平衡能力。行為實(shí)驗(yàn)進(jìn)行期間繼續(xù)給予灌胃治療。行為學(xué)結(jié)束后,分離小鼠的中腦和紋狀體,進(jìn)行后期的生化指標(biāo)檢測。采用尼氏染色法觀察黑質(zhì)致密部多巴胺神經(jīng)元的基本形態(tài)與神經(jīng)元變性;免疫組織熒光染色法觀察黑質(zhì)致密部TH陽性細(xì)胞的表達(dá)、Iba1/CD68標(biāo)記小膠質(zhì)細(xì)胞的增殖與激活狀態(tài);Western blotting法檢測中腦區(qū)域TH蛋白、NLRP3炎性小體相關(guān)蛋白(NLRP3、Caspase-1、ASC、pro-IL-1β、IL-1β)及Nrf2的蛋白表達(dá)水平。試劑盒檢測血清SOD、GSH、GSHpx抗氧化相關(guān)酶活力的水平。體外實(shí)驗(yàn)采用LPS聯(lián)合ATP誘導(dǎo)的BV2小膠質(zhì)細(xì)胞模擬小膠質(zhì)細(xì)胞激活狀態(tài),分別給予10μmol/L和40μmol/L的AS進(jìn)行藥物干預(yù)。Western blotting法檢測細(xì)胞中NLRP3炎性小體相關(guān)蛋白(NLRP3、Caspase-1、pro-IL-1β、IL-1β)及Nrf2的蛋白表達(dá)水平。免疫組織熒光染色法觀察Nrf2的表達(dá)。結(jié)果:1.AS可明顯改善MPTP模型小鼠的活動功能障礙,減輕MPTP誘導(dǎo)的黑質(zhì)致密部多巴胺能神經(jīng)元受損;2.AS可明顯抑制MPTP誘導(dǎo)的黑質(zhì)致密部小膠質(zhì)細(xì)胞的過度激活;3.AS可明顯抑制MPTP模型小鼠中腦及LPS+ATP誘導(dǎo)的BV2小膠質(zhì)細(xì)胞NLRP3炎性小體的激活,下調(diào)體內(nèi)外模型中升高的NF-κB水平;4.AS可明顯增加MPTP模型小鼠抗氧化能力,并可增加MPTP模型小鼠中腦和LPS+ATP損傷的BV2小膠質(zhì)細(xì)胞Nrf2水平。結(jié)論:AS對MPTP誘導(dǎo)的PD動物模型多巴胺神經(jīng)元受損有明顯的保護(hù)作用,其作用機(jī)制可能與其抑制NLRP3炎性小體介導(dǎo)的神經(jīng)炎癥,增加Nrf2的抗氧化作用有關(guān)。
【圖文】：

AstragalosideIV分子結(jié)構(gòu)圖

對MPTP模型小鼠轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)在棒上停留時(shí)間的影響
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 趙劍;劉廣輝;梁亮;李盟;趙冉然;張蓮香;王效軍;秦毅;;黃芪甲苷對大鼠腦出血后腦水腫及水通道蛋白4表達(dá)的影響[J];寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2015年08期

2 郭雪紅;;黃芪注射液的藥理作用及臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J];中國藥房;2015年21期

3 韋春英;韓敏;;帕金森病治療進(jìn)展[J];內(nèi)科;2014年03期

4 張麗敏;賀永貴;伊紅麗;李海波;;黃芪甲苷藥理作用研究進(jìn)展[J];河北聯(lián)合大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2014年02期

5 朱寶霞;;中西醫(yī)結(jié)合治療帕金森病74例[J];中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育;2013年22期

6 黃小平;鄧常清;邱詠園;王蓓;唐映紅;曾嶸;;黃芪甲苷和三七的三種有效成分配伍對小鼠腦缺血/再灌注后氧化應(yīng)激和Nrf2/HO-1途徑的影響[J];中國藥理學(xué)通報(bào);2013年11期

7 張慶云;董曉東;郝媛;陳玉敏;;帕金森病發(fā)病機(jī)制研究[J];醫(yī)學(xué)研究與教育;2013年03期

8 劉金濤;金燕;陳葉;黃海燕;何建成;;中醫(yī)藥治療帕金森病研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志;2013年18期

9 張霞;高維娟;錢濤;劉莎莎;;黃芪注射液對腦缺血/再灌注大鼠海馬神經(jīng)元Caspase-3表達(dá)的影響[J];中國藥理學(xué)通報(bào);2012年06期

10 王煒為;李如奎;;李如奎辨治帕金森病的經(jīng)驗(yàn)[J];江蘇中醫(yī)藥;2012年04期

相關(guān)會議論文 前1條

1 陳欣;劉艷霞;;黃芪苷Ⅳ防治大鼠腦皮層缺血-再灌注損傷的作用和對APE／Ref-1表達(dá)的研究[A];藥物相關(guān)蛋白質(zhì)組學(xué)專題研討會論文集[C];2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 李珍一;黃芪水提取物拮抗高血壓及其所致心肌纖維化的作用研究[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2016年

2 喬晨;NLRP3-Caspase-1炎癥小體在帕金森病發(fā)生中的作用及其機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2016年

3 潘楊;NLRP3炎癥小體在帕金森病神經(jīng)炎癥中的作用及治療學(xué)意義研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2016年

4 郭云霞;楊明會教授治療帕金森病學(xué)術(shù)經(jīng)驗(yàn)研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 劉峻崎;三種中藥有效成分調(diào)控中風(fēng)后星形膠質(zhì)細(xì)胞的作用及其機(jī)制[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

2 劉海洋;黃芪注射液和黃芪甲苷對大鼠腦出血后出血灶周圍凋亡神經(jīng)元的作用研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2012年

，

本文編號：2607374