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文冠木化學(xué)成分、含量測定及酪氨酸酶抑制作用研究

發(fā)布時(shí)間:2020-03-30 01:18
【摘要】:目的:文冠木為無患子科文冠果Xanthoceras sorbifolia Bunge的干燥莖干或枝條的木部。多生于海拔52~2260 m的山坡丘陵等處,各地也常栽培種植。我國主產(chǎn)于北部的內(nèi)蒙古、東北部的遼寧等地。文冠木為蒙醫(yī)常用藥材,蒙藥名為西拉·森登。味甘、微苦,性涼,能祛風(fēng)濕,消腫止痛,斂干黃水,主要用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎,風(fēng)濕內(nèi)熱,皮膚風(fēng)熱等癥。文冠木中主要包括三萜類(triterpenoids)、黃酮類(flavone)、酚酸類(phenolic acids)、甾體(sterides)等化學(xué)成分。文冠木具有抗炎、抗腫瘤、抗氧化等諸多藥理活性,并在美白、改善學(xué)習(xí)記憶功能、治療心血管疾病等方面廣泛應(yīng)用。因此,本文擬對(duì)文冠木進(jìn)行系統(tǒng)的植物化學(xué)成分研究,在此基礎(chǔ)上富集含量較高的成分,建立了測定其中6種化學(xué)成分的含量和其總黃酮的含量的方法并考察其提取工藝?疾炱浯继嵛铩⑤腿〔课、10種單體化合物對(duì)酪氨酸酶抑制作用的影響。旨在豐富文冠木化學(xué)成分的類型的同時(shí),為文冠木藥材的質(zhì)量控制和開發(fā)利用提供了有效的科學(xué)依據(jù)。方法:本研究采用常壓硅膠柱色譜、HP-20型大孔吸附樹脂、Sephadex LH-20柱色譜、ODS等色譜技術(shù)從文冠木的70%乙醇提取物中分離得到24個(gè)單體化合物,目前利用現(xiàn)代波譜技術(shù)(UV、IR、MS、NMR及HMBC、HSQC等)和理化方法鑒定了其中17個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)。植化研究表明,文冠木中含有大量的以楊梅素為主的黃酮類成分,本研究建立了以楊梅素(myketin)為對(duì)照品,采用紫外分光光度法測定文冠木總黃酮含量的方法,并單因素優(yōu)選了總黃酮的提取工藝。本研究同時(shí)建立了高效液相色譜法同時(shí)測定文冠木中表沒食子兒茶素、兒茶素、表兒茶素、二氫楊梅素、二氫槲皮素及楊梅素6種主要活性成分的含量測定方法,對(duì)色譜條件和提取工藝進(jìn)行了全面優(yōu)化,并測定了9批文冠木藥材中以上6種成分的含量。采用酶標(biāo)分析儀測定了本研究分離得到的文冠木單體化合物山奈酚、楊梅素、槲皮素、柚皮素、圣草酚、二氫槲皮素、二氫楊梅素、二氫山奈酚、5,7,3',4',5'-五羥基二氫黃酮、七葉內(nèi)酯化學(xué)成分酪氨酸酶活性的抑制率。結(jié)果:本研究對(duì)文冠木醇提取物的乙酸乙酯部位和正丁醇部位分別進(jìn)行分離、純化得到24個(gè)化合物并鑒定了其中17個(gè)化合物,包括:9個(gè)黃酮類化合物為山奈酚(1)、槲皮素(2)、楊梅素(3)、柚皮素(4)、圣草酚(5)、二氫山奈酚(6)、二氫槲皮素(7)、二氫楊梅素(8)、5,7,3',4',5'-五羥基二氫黃酮(9);4個(gè)酚酸類化合物為原兒茶酸(11)、表沒食子兒茶素(13)、兒茶素(14)、(-)-epicatechin-5-O-β-D-glucopyrnaoside(15),1個(gè)直鏈羧酸類化合物為[(9S,10R,11E,13R)-9,10,13-trihydroxyoctadec-11-enoic-acid)](10);1個(gè)香豆素類化合物是七葉內(nèi)酯(12);2個(gè)甾體類化合物:β-谷甾醇(16)、胡蘿卜苷(17)。本實(shí)驗(yàn)測定文冠木總黃酮的含量,結(jié)果表明總黃酮類含量為14.62~39.93 mg·g~(-1),同時(shí)測定了文冠木中6種化學(xué)成分的含量,結(jié)果表明,表沒食子兒茶素的含量為2.01~7.10 mg·g~(-1)、兒茶素的含量為0.11~1.37 mg·g~(-1)、表兒茶素的含量為1.33~4.26mg·g~(-1)、二氫楊梅素的含量為1.06~5.42 mg·g~(-1)、二氫槲皮素的含量為0.03~0.95mg·g~(-1)、楊梅素的含量為0.05~1.40 mg·g~(-1)。本文首次采用酪氨酸酶抑制法考察了文冠木中10種單體化合物的酶活性抑制率,結(jié)果表明除二氫槲皮素、圣草酚,有促進(jìn)酪氨酸酶活性的作用,其余所測成分均有抑制酪氨酸酶活性的作用。結(jié)論:化合物1、4、9、11~12,15均為首次從文冠木中分離得到;衔5~6,10首次從本種本屬分離得到。本實(shí)驗(yàn)測定文冠木總黃酮含量,同時(shí)測定了文冠木中6種化學(xué)成分的HPLC含量。這兩種方法簡單,準(zhǔn)確,重復(fù)性好,可用于文冠木黃酮類化合物的定量研究。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)絕大多數(shù)黃酮類化合物均具有酪氨酸酶抑制作用,為今后進(jìn)一步研究黃酮類化合物的對(duì)酪氨酸酶活性的影響奠定了基礎(chǔ)。
【圖文】:

流程圖,流程圖,提取分離


文冠木提取分離流程圖

HPLC色譜,混合對(duì),藥材,學(xué)位論文


內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文(2019) 29卻至室溫后加甲醇補(bǔ)足減失的重量,濾過,取續(xù)濾液過 0.45 μm 微孔濾膜,即得。2.2 色譜條件色譜柱:Inertsil ODS-SP HPLC Column (Japan)(250 mm ×4.6 mm,,5 μm);流動(dòng)相:乙腈(A)~0.4 %乙酸水(B)(0~20 min,10%~20%A; 20~40 min,20%~30%A);流速:1 mL·min-1;檢測波長:280 nm;柱溫:20℃。此條件下文冠木6 種成分分離情況如下圖 2-1:
【學(xué)位授予單位】:內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2019
【分類號(hào)】:R284

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本文編號(hào):2606806

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