【摘要】：目的:本實(shí)驗(yàn)通過當(dāng)歸、黃芪的主要代表成分阿魏酸和黃芪甲苷不同比例配伍對大鼠胸主動(dòng)脈張力的影響,探討不同狀態(tài)下、不同激動(dòng)劑及拮抗劑作用下阿魏酸(Ferulic acid,FA)和黃芪甲苷(AstragalosideⅣ,AS Ⅳ)配伍舒張胸主動(dòng)脈血管環(huán)的機(jī)制。方法:采用離體組織灌流系統(tǒng)與PoWerLab數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)采集等距胸主動(dòng)脈環(huán)張力的變化,通過累積加藥觀察和對比不同濃度下阿魏酸、黃芪甲苷以及阿魏酸和黃芪甲苷不同比例配伍對大鼠胸主動(dòng)脈張力的影響,選擇代表性配比進(jìn)行機(jī)制的研究,在靜息狀態(tài)下,觀察阿魏酸和黃芪甲苷配比對大鼠血管環(huán)張力的影響,比較其與對照組的差異性;在高鉀或PHE收縮狀態(tài)下,觀察阿魏酸和黃芪甲苷配比對不同激動(dòng)劑所致的胸主動(dòng)脈環(huán)的舒張作用;觀察不同鉀通道阻滯劑TEA、4-AP、Gly、BaCl_2及NOS抑制劑L-NAME、COX抑制劑Indo等抑制劑預(yù)孵血管環(huán)對阿魏酸和黃芪甲苷配比舒張血管作用的影響。結(jié)果:1.在靜息狀態(tài)下,FA、AS Ⅳ分別對大鼠胸主動(dòng)脈張力的影響實(shí)驗(yàn)顯示,累積加入1×10~(-4)-3×10~(-1.5)g/L濃度的FA、AS Ⅳ對基礎(chǔ)狀態(tài)下對大鼠胸主動(dòng)脈無顯著作用,與溶劑對照組比較無明顯差異(p0.05)2.高鉀狀態(tài)下,FA、AS Ⅳ分別對大鼠胸主動(dòng)脈張力的影響結(jié)果顯示,KCl預(yù)收縮基礎(chǔ)上累積加入阿魏酸、黃芪甲苷(1×10~(-4)-3×10~(-1.5)g/L)能濃度依賴性的舒張胸主動(dòng)脈,FA對血管環(huán)的最大舒張力為73.24%±7.69%,AS Ⅳ對血管環(huán)的最大舒張力為58.36%±4.41%,與溶劑對照組舒張率23.16%±2.35%比較有顯著差異(P0.001)。3.高鉀狀態(tài)下,FA和AS Ⅳ不同配比對胸主動(dòng)脈張力的影響結(jié)果顯示,在KCl預(yù)收縮血管環(huán)的基礎(chǔ)上,累積加入FA+AS Ⅳ(1:1;1:5;1:10;5:1;10:1)(1×10~(-4)-3×10~(-1.5)g/L)不同配比能濃度依賴性的舒張大鼠胸主動(dòng)脈血管環(huán),其各配比最大舒張率分別為96.63%±4.68%、67.59%±4.85%、46.27%±5.14%、90.35%±4.74%、78.51%±5.37%。不同比例與FA、AS Ⅳ單體對比,FA單體73.24%±7.69%與1:1組,1:10組,5:1組對比差異有顯著性,最大舒張率分別96.63%±4.68%、46.27%±5.14%、90.35%±4.74%;AS Ⅳ單體58.36%±4.41%與1:1組,5:1組,10:1組對比差異有顯著性,最大舒張率分別為96.63%±4.68%、90.35%±4.74%、78.51%±5.37%。我們發(fā)現(xiàn)配比使用的作用多優(yōu)于單體。因?yàn)楫?dāng)歸補(bǔ)血湯中當(dāng)歸、黃芪的經(jīng)典配伍1:5,我們以1:5 Emax為67.59%±4.85%為基準(zhǔn)與不同配伍之間的對比,發(fā)現(xiàn)與1:1組,5:1組,1:10組相比差異有顯著性,舒張率分別為96.63%±4.68%、90.35%±4.74%、78.51%±5.37%,結(jié)果顯示這三個(gè)配比作用明顯優(yōu)于經(jīng)典配比,但以1:1配比的舒張率最明顯,所以我們進(jìn)一步以1:1為代表進(jìn)行機(jī)制的研究。4.基礎(chǔ)狀態(tài)下,FA+AS Ⅳ1:1對大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)張力的影響實(shí)驗(yàn)顯示,累積加入阿魏酸和黃芪甲苷配比1:1(1×10~(-4)-3×10~(-1.5)g/L)對基礎(chǔ)狀態(tài)下對大鼠胸主動(dòng)脈無顯著作用,與對照組比較無明顯差異(P0.05)5.PHE收縮狀態(tài)下,FA+AS Ⅳ1:1對大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)血管張力的影響結(jié)果顯示,FA+AS Ⅳ1:1(1×10~(-4)-3×10~(-1.5)g/L)時(shí)對PHE(1μmol/L)預(yù)收縮大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)的最大舒張率(Emax)為85.51%±6.24%,EC_(50)為2.654±0.28;對KCl(60 mmol/L)預(yù)收縮動(dòng)脈環(huán)最大舒張率(Emax)為67.43%±5.07%,EC_(50)為2.198±0.33(P0.01)。結(jié)果提示阿魏酸和黃芪甲苷配比1:1舒張血管依賴于受體操作性Ca~(2+)通道(ROC)和電壓依賴性Ca~(2+)通道(VDC)發(fā)揮作用。6.K~+通道阻滯劑TEA、4-AP、Gly、BaCl_2狀態(tài)下,FA+AS Ⅳ1:1對大鼠胸主動(dòng)脈血管環(huán)張力的影響結(jié)果顯示,在KCl收縮胸主動(dòng)脈環(huán)基礎(chǔ)上,Ca~(2+)依賴K~+通道阻滯劑TEA能明顯抑制FA+AS Ⅳ1:1(1×10~(-4)-3×10~(-1.5)g/L)濃度依賴性血管舒張作用,其對大鼠胸主動(dòng)脈血管環(huán)E_(max)為31.7%±3.91%,與對照組相比下降了35.73%±2.08%(P0.001);電壓依賴性K~+通道阻滯劑4-AP能明顯減弱阿魏酸和黃芪甲苷1:1(1×10~(-4)-3×10~(-1.5)g/L)濃度依賴性胸主動(dòng)脈血管的舒張作用,對大鼠胸主動(dòng)脈的E_(max)為41.39%±7.41%,與對照組相比降低了25.64%±1.44%(P0.001);ATP敏感K~+通道阻滯劑Gly能抑制高鉀誘導(dǎo)收縮的胸主動(dòng)脈環(huán)作用,其E_(max)為54.92%±6.95%,與對照組相比降低了12.51%±1.25%(P0.01),其中EC_(50)為1.648±0.05;內(nèi)向整流K~+通道阻滯劑BaCl_2能抑制阿魏酸和黃芪甲苷配比1:1(1×10~(-4)-3×10~(-1.5)g/L)的舒張血管E_(max)為50.25%±10.52%,與對照組相比降低了15.19%±4.55%(P0.001);其中EC_(50)為1.713±0.28。以上結(jié)果表明,FA+AS Ⅳ1:1的舒血管作用可能與K_V、K_(Ca)、K_(IR)、K_(ATP)通道開放有關(guān)。7.阻滯劑L-NAME、Indo狀態(tài)下,FA+AS Ⅳ1:1對大鼠胸主動(dòng)脈血管環(huán)張力的影響結(jié)果顯示,在PHE(1μmol/L)預(yù)收縮的胸主動(dòng)脈血管環(huán)基礎(chǔ)上,一氧化氮合酶NOS抑制劑L-NAME和環(huán)氧合酶抑制劑Indo能夠抑制黃芪甲苷和阿魏酸配比1:1對大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)的舒張作用,其Emax分別為51.86±12.07%,55.11%±6.95%,與對照組相比分別降低了29.65%±7.79%,30.4%±2.43%(P0.001),其EC_(50)分別為1.708±0.31,1.693±0.29。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明NO,PGI_2參與了FA+AS Ⅳ1:1的舒血管作用。結(jié)論:1.當(dāng)歸補(bǔ)血湯方的主要代表成分阿魏酸、黃芪甲苷及其不同配伍比例對血管環(huán)有不同程度的舒張作用。當(dāng)配伍比例發(fā)生變化時(shí),血管環(huán)的舒張率也在變化,即當(dāng)配伍中阿魏酸或黃芪甲苷的比例逐漸增加時(shí),血管環(huán)的舒張率反而呈現(xiàn)下降的趨勢,說明不同的比例具有不同的舒張?zhí)攸c(diǎn)。通過與不同比例和單體的比較發(fā)現(xiàn),阿魏酸和黃芪甲苷配比1:1舒張率最具代表性其舒張率最大。單體與不同配伍對比的研究中發(fā)現(xiàn),不同比例配伍的血管張力多大于單體,且配伍使用具有協(xié)同增效作用。2.在阿魏酸與黃芪甲苷1:1機(jī)制的研究中,阿魏酸和黃芪甲苷1:1配比對胸主動(dòng)脈血管環(huán)的舒張作用與內(nèi)皮依賴性途徑和非內(nèi)皮依賴途徑有關(guān),NOS抑制劑L-NAME能夠明顯抑制阿魏酸和黃芪甲苷1:1配比的舒張胸主動(dòng)脈環(huán)的作用,說明阿魏酸和黃芪甲苷1:1配比的舒血管作用與NO的參與有關(guān)。COX抑制劑Indo也能抑制阿魏酸和黃芪甲苷1:1配比的舒血管作用,說明PGI_2也參與了主動(dòng)脈環(huán)的舒張作用,K~+通道阻滯劑TEA、4-AP、GLy、BaCL_2預(yù)孵后,大鼠胸主動(dòng)脈的舒張作用均被抑制,但不同阻滯劑抑制程度不同,TEA、4-AP能明顯抑制胸主動(dòng)脈的舒血管作用,GLy、BaCL_2的抑制作用次之。說明阿魏酸和黃芪甲苷1:1配比的舒血管作用可能與K_V、K_(Ca)、K_(IR)、K_(ATP)通道有關(guān)。其細(xì)胞機(jī)制可能與通過阻斷VDC和ROC減少外Ca~(2+)內(nèi)流、抑制內(nèi)Ca~(2+)釋放有關(guān)。
【圖文】：

如圖 1.基礎(chǔ)狀態(tài)下，，阿魏酸和黃芪甲苷 1:1（1×10-4-3×10-1.5g/L）對大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)的舒作用的濃度-效應(yīng)曲線，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示與對照組對比(P<0.01),n=8..9.2 高鉀狀態(tài)下，F(xiàn)A、AS IV 分別對大鼠胸主動(dòng)脈張力的影響結(jié)果顯示，Kcl預(yù)收縮基礎(chǔ)上，累積加入阿魏酸、黃芪甲苷（1×10-4-3×10-1.5g/L）能濃度依賴性的舒張胸主動(dòng)脈，F(xiàn)A對血管環(huán)的最大舒張力為73.24%±7.69%，AS IV對血管環(huán)的最大舒張力為58.36%±4.41%，與溶劑對照組舒張率23.16%±2.35%比較有顯著差異（P<0.001）（如圖2）

如圖 1.基礎(chǔ)狀態(tài)下，阿魏酸和黃芪甲苷 1:1（1×10-4-3×10-1.5g/L）對大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)的舒作用的濃度-效應(yīng)曲線，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示與對照組對比(P<0.01),n=8..9.2 高鉀狀態(tài)下，F(xiàn)A、AS IV 分別對大鼠胸主動(dòng)脈張力的影響結(jié)果顯示，Kcl預(yù)收縮基礎(chǔ)上，累積加入阿魏酸、黃芪甲苷（1×10-4-3×10-1.5g/L）能濃度依賴性的舒張胸主動(dòng)脈，F(xiàn)A對血管環(huán)的最大舒張力為73.24%±7.69%，AS IV對血管環(huán)的最大舒張力為58.36%±4.41%，與溶劑對照組舒張率23.16%±2.35%比較有顯著差異（P<0.001）（如圖2）
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2606661