發(fā)布時間：2020-03-26 08:09

【摘要】：目的:通過皮下注射D-半乳糖(D-Galactose,D-gal)建立大鼠衰老模型,采用頭頂一顆珠(Trillium tschonoskii Maxim,TTM)的提取物進行處理,觀察BDNF-Trkb通路相關(guān)蛋白的改變,探討頭頂一顆珠對衰老大鼠認知能力的影響及可能的機制。方法:60只雄性SD大鼠隨機分為5組:對照組(Control)、模型組(D-gal)、TTM低劑量組(D-gal+50 mg/kg TTM)、TTM中劑量組(D-gal+100 mg/kg TTM)、TTM高劑量組(D-gal+200 mg/kg TTM)。除對照組外,其余各組大鼠每天頸背部皮下注射100 mg/kg的D-gal,對照組大鼠每天頸背部皮下注射相同劑量生理鹽水;TTM各劑量組大鼠每天同時用對應濃度TTM提取物灌胃,連續(xù)42天。第6周開始用Morris水迷宮檢測大鼠學習和空間記憶能力;灌流取材后用HE染色檢測海馬組織的形態(tài);用免疫熒光分析海馬組織內(nèi)8-羥基脫氧鳥苷(8-hydroxy-2-deoxyguanosine,8-OHDG)的表達;用免疫印跡(Western Blot)檢測腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、酪氨酸激酶B(Tyrosine kinase B,Trkb)及P-Trkb表達的情況;用硫代巴比妥酸法測定MDA含量,用黃嘌呤氧化酶法測定SOD活性。結(jié)果:1大鼠空間學習記憶能力檢測(1)水迷宮定位航行實驗結(jié)果提示:與對照組相比,模型組大鼠逃避潛伏期時間明顯延長(P0.01),且行動路線雜亂無章,趨向性差;與模型組相比,TTM各干預組逃避潛伏期時間顯著縮短(P0.05或P0.01)。(2)水迷宮空間探索實驗提示:與對照組相比,模型組大鼠目標象限停留時間明顯縮短(P0.01),穿越平臺次數(shù)明顯減少(P0.01);與模型組相比,TTM各干預組大鼠平臺象限逗留時間都明顯增長(P0.05或P0.01),穿越平臺次數(shù)顯著增加(P0.05或P0.01)。2大鼠海馬組織鏡下觀察(1)HE染色結(jié)果顯示:對照組海馬神經(jīng)元細胞數(shù)量較多、排列整齊緊密且形態(tài)完整,胞漿豐富,胞核飽滿;模型組的神經(jīng)元細胞排列散亂、疏松,較多細胞核丟失,胞核形態(tài)破裂、腫脹空泡化現(xiàn)象較多,而且細胞數(shù)目較正常組明顯較少;與模型組相比,TTM各干預組神經(jīng)細胞明顯增多,神經(jīng)細胞排列輕度紊亂,細胞損傷性的改變明顯減輕。(2)免疫熒光結(jié)果顯示:與對照組相比,模型組海馬組織內(nèi)8-OHDG陽性細胞數(shù)量明顯增多;與模型組相比,TTM各干預組8-OHDG陽性神經(jīng)元的數(shù)量均顯著減少,中劑量差異性最大。3大鼠海馬組織中BDNF及其受體表達情況Western Blot結(jié)果顯示:與對照組相比,模型組大鼠海馬組織內(nèi)BDNF、Trkb及P-Trkb蛋白含量明顯降低(P0.01),差異有統(tǒng)計學意義;與模型組相比,TTM低劑量干預組BDNF、Trkb及P-Trkb蛋白表達含量均明顯增高(P0.05),差異有統(tǒng)計學意義;與模型組相比,TTM中劑量干預組的BDNF、Trkb表達含量顯著增高(P0.05),P-Trkb蛋白表達含量也顯著增高(P0.01),差異有統(tǒng)計學意義;與模型組相比,TTM高劑量干預組的BDNF、Trkb差異沒有統(tǒng)計學意義,而P-Trkb蛋白表達含量顯著增高(P0.05),差異有統(tǒng)計學意義。4大鼠海馬組織SOD、MDA檢測與對照組相比,模型組海馬組織中SOD活性明顯降低(P0.001),MDA含量明顯升高(P0.001);與模型組相比,TTM低劑量組海馬組織中SOD活性降低,MDA含量升高,但差異沒有統(tǒng)計學意義;與模型組相比,TTM中劑量組海馬組織中SOD活性明顯升高(P0.01),MDA含量明顯降低(P0.01),差異有統(tǒng)計學意義;與模型組相比,TTM高劑量組海馬組織中SOD活性明顯升高(P0.05),MDA含量明顯降低(P0.05),差異有統(tǒng)計學意義。結(jié)論:1 TTM可以改善衰老大鼠空間學習及記憶能力。2 TTM可以提高衰老大鼠海馬組織抗氧化能力。3 TTM可以減少衰老大鼠海馬神經(jīng)元的變性以及DNA的損傷。4 TTM可以提高衰老大鼠海馬中BDNF、Trkb、P-Trkb含量的表達。
【圖文】：

圖 2-1：每組大鼠定位航行實驗中運動軌跡及統(tǒng)計分析：Motion trail of each group of rats in positioning navigation experiment and analysis of results*號表示與對照組相比較，* P<0.05；** P<0.01#號表示與模型組相比較，# P<0.05；## P<0.01空間探索實驗去平臺后，與正常對照組相比，模型組大鼠第三象限停留的時間明.01），穿越平臺次數(shù)明顯減少（P<0.01），差異有統(tǒng)計學意義；與TTM 各干預組大鼠平臺象限逗留時間都明顯增長（P<0.05 或 P<0臺次數(shù)顯著增加（P<0.05 或 P<0.01），差異有統(tǒng)計學意義。（見

圖 2-1：每組大鼠定位航行實驗中運動軌跡及統(tǒng)計分析Fig 2-1：Motion trail of each group of rats in positioning navigation experiment and Statisticalanalysis of results注：*號表示與對照組相比較，* P<0.05；** P<0.01#號表示與模型組相比較，# P<0.05；## P<0.013.1.2 空間探索實驗撤去平臺后，與正常對照組相比，模型組大鼠第三象限停留的時間明顯縮短（P<0.01），穿越平臺次數(shù)明顯減少（P<0.01），差異有統(tǒng)計學意義；與模型組相比，TTM 各干預組大鼠平臺象限逗留時間都明顯增長（P<0.05 或 P<0.01），穿越平臺次數(shù)顯著增加（P<0.05 或 P<0.01），差異有統(tǒng)計學意義。（見圖 2-2）
【學位授予單位】：湖北民族大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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