【摘要】：山豆根是豆科植物越南槐Sophora tonkinensis Gapnep.的干燥根及根莖,具有清熱解毒,消腫利咽之功效,可用于治療咽喉牙齦腫痛、急性扁桃體炎、支氣管炎、肺炎、慢性活動(dòng)性肝炎、腫瘤及心律失常等疾病的治療。山豆根屬于有毒中藥,主要含有生物堿類、黃酮類、三萜皂苷類等化學(xué)成分,其中生物堿類成分,既是其有效成分,也是其毒性成分。山豆根的毒副作用及不良反應(yīng)的報(bào)道較多,這極大的限制了山豆根的臨床應(yīng)用。配伍是中藥的一大特色,山豆根是否可以通過配伍來達(dá)到減毒增效(存效)的效果,值得我們關(guān)注和研究。本研究以山豆根單煎湯劑及其與射干、升麻配合使用的合煎湯劑為研究對(duì)象,從化學(xué)組成、主要化學(xué)成分的含量、總生物堿及總酚的含量等方面研究山豆根配伍前后的化學(xué)成分及其含量的變化,同時(shí),對(duì)山豆根單煎、合煎湯劑的急性毒性及抗炎活性進(jìn)行比較研究,試圖揭示化學(xué)成分-毒性-藥理活性效應(yīng)的相關(guān)性,為山豆根臨床用藥的安全、有效提供科學(xué)依據(jù)。本論文主要分為以下幾部分(一)采用臨床常用的煎煮方法,制備了山豆根的單煎湯劑及其與射干、升麻配伍使用的合煎湯劑;然后采用UPLC-QTOF技術(shù),對(duì)山豆根單煎、合煎湯劑的化學(xué)組成進(jìn)行了定性比較。從山豆根單煎、合煎湯劑中共計(jì)發(fā)現(xiàn)了 35個(gè)生物堿類化合物,其中,單煎劑23個(gè),合煎劑28個(gè);單煎劑獨(dú)有7個(gè),合煎劑獨(dú)有12個(gè),二者共有16個(gè)。PCA分析發(fā)現(xiàn),山豆根單煎、合煎湯劑的兩組樣品組內(nèi)聚集,組間分離良好,表明山豆根單煎、合煎湯劑所含生物堿類成分具有顯著性差異;此外,從PCA分析中的成分分布散點(diǎn)圖,找出了氧化苦參堿、苦參堿、槐醇等10種生物堿類成分作為山豆根單煎、合煎湯劑的差異性成分。采用大孔吸附樹脂-聚酰胺樹脂聯(lián)用法,制備了山豆根單煎湯劑的生物堿部位和非生物堿部位并對(duì)其化學(xué)組成進(jìn)行了 UPLC-QTOF定性鑒別。研究發(fā)現(xiàn),山豆根生物堿部位所含生物堿類成分的種類與山豆根單煎湯劑中所含生物堿類成分的種類基本相同;從山豆根非生物堿部位定性鑒定了 35個(gè)化合物,其中黃酮類19個(gè),皂苷類14個(gè)。由此表明,山豆根非生物堿部位主要由黃酮類和皂苷類成分組成。(二)采用HPLC-DAD法建立了同步測定金雀花堿、氧化苦參堿、氧化槐果堿、N-甲基金雀花堿、槐醇、苦參堿和槐果堿等7種生物堿類成分和高麗槐素,三葉豆紫檀苷,芒柄花素等3種黃酮類成分的含量方法。方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果顯示,10種成分的分離度良好,且在各自濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系,r≥0.999 7,平均回收率在98.6%～102.6%,RSD為0.68%～3.66%(n=6),該方法簡便、準(zhǔn)確,重復(fù)性良好。運(yùn)用該法,對(duì)山豆根飲片、單煎及合煎湯劑中的10種主要成分的含量進(jìn)行了測定。不同批次的山豆根飲片的含量測定結(jié)果表明,山豆根的內(nèi)在質(zhì)量存在較大差異。3批次的山豆根在煎煮過程中,10種成分的總轉(zhuǎn)移率分別為53%、64%和55%,其中,氧化苦參堿、氧化槐果堿、金雀花堿、N-甲基金雀花堿、芒柄花素、馬卡因和三葉豆紫檀苷含量降低,而苦參堿、槐醇、槐果堿含量增加,表明山豆根在煎煮前后化學(xué)成分的含量變化,不僅與其煎煮中的成分轉(zhuǎn)移率有關(guān),而且與煎煮過程中發(fā)生的化學(xué)反應(yīng)有關(guān)。此外,與山豆根單煎湯劑相比,山豆根合煎湯劑中的6種生物堿類成分的含量均有所降低,其中,以氧化苦參堿的含量降低幅度最大,苦參堿的含量降低幅度最小。由此表明,山豆根與射干、升麻合煎,可以促進(jìn)山豆根中的生物堿類成分發(fā)生轉(zhuǎn)變,山豆根單煎、合煎湯劑的主要生物堿類成分具有一定的差異。(三)分別采用酸性染料法和三氯化鐵-鐵氰化鉀法對(duì)山豆根飲片及山豆根單煎、合煎湯劑的總生物堿和總酚含量進(jìn)行了測定。研究結(jié)果表明,山豆根單煎過程中,總生物堿的轉(zhuǎn)移率明顯高于總酚;山豆根合煎湯劑中的總生物堿的含量明顯低于單煎湯劑中的含量,亦具有一定差異,進(jìn)一步驗(yàn)證了山豆根在與射干、升麻合煎過程中,生物堿類成分可以通過成分間的相互作用,發(fā)生分解和轉(zhuǎn)化。山豆根合煎湯劑中的總酚含量明顯高于山豆根單煎湯劑,這與射干和升麻中亦含有酚類成分有關(guān)。(四)為了比較山豆根配伍前后的毒性效應(yīng),對(duì)山豆根單煎、合煎湯劑及陰性對(duì)照湯劑(射干+升麻)進(jìn)行了小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn),研究結(jié)果表明,山豆根單煎湯劑組的各個(gè)劑量組的小鼠死亡率均高于山豆根合煎湯劑組,陰性對(duì)照湯劑組無小鼠死亡記錄。以山豆根的生藥量計(jì),山豆根單煎湯劑的LD50為19.6 g/kg,山豆根合煎湯劑的LD50為31.7 g/kg。山豆根配伍射干升麻后,具有降低山豆根毒性的作用。(五)為了比較山豆根配伍前后的藥理活性,采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹急性炎癥模型,對(duì)山豆根單煎、合煎湯劑及陰性對(duì)照湯劑進(jìn)行了抗炎活性研究。研究結(jié)果表明,與模型對(duì)照組比較,山豆根單煎、合煎湯劑及陰性對(duì)照湯劑均具有明顯的抗炎活性;陰性對(duì)照湯劑與山豆根單煎、合煎湯劑的抗炎活性相當(dāng),無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);山豆根單煎湯劑與山豆根合煎湯劑的抗炎活性相當(dāng),也并無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。因此表明,山豆根配伍射干和升麻使用后,對(duì)抗炎活性具有存效作用。綜上所述,本研究從化學(xué)成分、急性毒性和抗炎活性等方面,對(duì)山豆根單煎湯劑及其與射干、升麻配伍使用的合煎湯劑進(jìn)行了比較研究,為揭示化學(xué)成分-毒性-藥理活性效應(yīng)的相關(guān)性及闡述配伍減毒增效(存效)的內(nèi)因提供科學(xué)依據(jù)。
【圖文】：

同時(shí)結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道及混合對(duì)照品溶液的質(zhì)譜信息，對(duì)山豆根單煎、合煎湯劑逡逑中所含生物堿類成分進(jìn)行推導(dǎo)和指認(rèn)，其結(jié)果見表１－２。山豆根單煎湯劑、合煎逡逑湯劑及陰性（射干＋升麻）對(duì)照湯劑的代表性總離子流圖分別見圖１－１、圖１－２和逡逑圖１－３�；旌蠈�(duì)照品的總離子流圖見圖１－４和圖１－５。主要生物堿類成分的結(jié)構(gòu)式逡逑見圖１－６。逡逑由表１－２可知，從山豆根單煎湯劑中，獲得了邋２３個(gè)生物堿成分，其中鑒定逡逑出１４個(gè)，未知９個(gè)；從山豆根合煎湯劑中，獲得了邋２８個(gè)生物堿成分，其中鑒定逡逑出１３個(gè)，未知１５個(gè)。從山豆根單煎湯劑及合煎湯劑中共計(jì)發(fā)現(xiàn)了邋３５種生物堿逡逑類化合物，其中單煎湯劑獨(dú)有的生物堿７種，合煎湯劑獨(dú)有的生物堿１２種，二逡逑者共有生物堿１６種。直觀比較圖１－１和圖１－２可知，與單煎湯劑相比，合煎湯逡逑劑中２３，邋２６，，邋２８和３０等生物堿成分的峰高明顯降低，２７和３３等生物堿成分的逡逑峰高明顯增加。以上結(jié)果表明，山豆根單煎、合煎湯劑的生物堿類成分的種類與逡逑含量發(fā)生了變化

化合物１６的分子離子峰［Ｍ＋Ｈ］＋邋ｍ／ｚ＝１９１，化合物２２的分子離子峰［Ｍ＋Ｈ］４逡逑ｍ／ｚ＝２１９，化合物２９的分子離子峰［Ｍ＋Ｈ］＋ｍ／ｚ＝２０５，其一、二級(jí)質(zhì)譜圖以及紫外逡逑圖見
【學(xué)位授予單位】：中國中醫(yī)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R284.1;R285.1

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 蘭艷素;李長江;潘樂;;大孔樹脂純化廣豆根總黃酮工藝的優(yōu)化[J];中成藥;2016年07期

2 張艷;胡文忠;陳效忠;彭玉勃;宋麗艷;石玉生;;山豆根中具有生物活性的喹諾里西啶類生物堿研究[J];中國中藥雜志;2016年12期

3 陸小鴻;;“治咽要藥”山豆根[J];廣西林業(yè);2016年04期

4 王燕;李曉波;李俊杰;熊海燕;彭崇勝;;5,6,7,4′-四羥基黃酮和5,6,7,4′-四甲氧基黃酮高分辨電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜裂解規(guī)律對(duì)比研究[J];質(zhì)譜學(xué)報(bào);2016年05期

5 張晗羚;華碧春;;111例山豆根及其制劑致不良反應(yīng)文獻(xiàn)分析[J];中國藥物警戒;2015年02期

6 陳曉斌;周琴妹;劉順;管敏;程革;;D101型大孔樹脂純化山豆根總生物堿的工藝優(yōu)選[J];中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志;2015年03期

7 黃寶優(yōu);農(nóng)東新;黃雪彥;彭玉德;李瑩;林楊;藍(lán)祖栽;呂惠珍;謝月英;曾成;余麗瑩;;中藥材山豆根資源調(diào)查報(bào)告[J];中國現(xiàn)代中藥;2014年09期

8 鄒恒偉;;山豆根的研究進(jìn)展與趨向[J];廣西農(nóng)學(xué)報(bào);2014年03期

9 李會(huì)銀;;中藥不良反應(yīng)的現(xiàn)代研究進(jìn)展[J];湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2013年10期

10 李克;王曙東;吳龍琴;湯m

本文編號(hào)：2600483