【摘要】：目的:建立小鼠腸道菌群失調(diào)模型,研究茶多酚對小鼠腸道菌群、腸道酶活性及腸道短鏈脂肪酸的影響,并探討其體內(nèi)作用機(jī)制。方法:(1)利用鹽酸林可霉素注射液給小鼠灌胃,建立小鼠腸道菌群失調(diào)模型。(2)利用16SrDNA技術(shù)研究茶多酚對小鼠腸道菌群的調(diào)節(jié)作用。(3)采用酶聯(lián)免疫技術(shù)研究茶多酚對小鼠腸道酶活性的影響。(4)利用氣相色譜法測定分析茶多酚對小鼠腸道內(nèi)短鏈脂肪酸含量的影響。結(jié)果:(1)與正常對照組相比,模型小鼠腸道菌群多樣性降低,菌群結(jié)構(gòu)改變,腸道主要菌門擬桿菌和厚壁菌豐度顯著降低(p㩳0.05),有害菌大腸桿菌/志賀菌屬豐度顯著增加(p㩳0.05)。(2)與模型對照組相比,灌胃茶多酚后,小腸內(nèi),菌群的多樣性和豐富度均提高,變形桿菌門相對豐度顯著降低(p㩳0.05),擬桿菌門與厚壁菌門相對豐度均提高,大腸桿菌/志賀菌屬相對豐度顯著降低(p㩳0.05)。盲腸內(nèi),菌群的多樣性和豐富度均降低,擬桿菌門相對豐度顯著增加(p㩳0.05),厚壁菌門相對豐度顯著降低(p㩳0.05),變形桿菌門相對豐度稍增(p㧐0.05)。結(jié)腸和大腸內(nèi),菌群豐富度與多樣性均降低,擬桿菌門相對豐度顯著提高(p㩳0.05),厚壁菌門相對豐度顯著降低(p㩳0.05),變形桿菌門變化無明顯規(guī)律性。(3)與模型對照組相比,灌胃茶多酚后,小鼠腸道內(nèi)源酶變化為:小腸內(nèi)胰蛋白酶活性顯著增高(p0.05),脂肪酶活性升高,且高劑量組脂肪酶顯著增高(p0.05),淀粉酶活性顯著降低(p0.05)。盲腸內(nèi)胰蛋白酶活性顯著提高(p0.05),脂肪酶活性顯著降低(p0.05),淀粉酶活性降低,高、中劑量組中淀粉酶活性降低(p0.05),而低劑量組活性雖然降低卻不顯著(p0.05)。結(jié)腸內(nèi)胰蛋白酶活性提高,其中高劑量組與低劑量茶多酚組胰蛋白酶活性顯著提高(p0.05),淀粉酶、脂肪酶顯著降低(p0.05)。大腸內(nèi)淀粉酶和脂肪酶活性顯著降低(p0.05),胰蛋白酶活性提高,高劑量組和低劑量組中,胰蛋白酶活性顯著提高(p0.05)。而腸道外源酶變化為:小腸內(nèi)纖維素酶活性顯著降低(p0.05),且呈現(xiàn)量效關(guān)系;木聚糖酶活性顯著提高(p0.05),中劑量作用效果最好。盲腸內(nèi)纖維素酶活性顯著降低(p0.05),木聚糖酶活性顯著提高(p0.05)。結(jié)腸內(nèi)纖維素酶活性變化不明顯,木聚糖酶活性提高,且低劑量茶多酚作用顯著(p0.05)。大腸內(nèi)纖維素酶活性顯著降低(p0.05),而木聚糖酶活性顯著提高(p0.05)。(4)與模型對照組相比,灌胃茶多酚后,小腸內(nèi),乙酸、丁酸、異戊酸含量顯著增加(p0.05),中劑量組與高劑量組丙酸的含量顯著提高(p0.05),低劑量組丙酸含量增加(p0.05),異丁酸和戊酸含量提高(p0.05);盲腸內(nèi)乙酸、異丁酸、異戊酸含量顯著增加(p0.05),戊酸含量提高,且中劑量茶多酚可以顯著提高戊酸含量(p0.05),丙酸和丁酸的含量顯著降低(p0.05);結(jié)腸內(nèi)乙酸、異丁酸、戊酸的含量顯著增加(p0.05),異戊酸含量增加,而高劑量組與低劑量組茶多酚對異戊酸的促進(jìn)作用顯著(p0.05),丙酸、丁酸含量顯著降低(p0.05);大腸內(nèi)乙酸、異丁酸、戊酸和異戊酸的含量顯著升高(p0.05),丙酸、丁酸含量顯著降低(p0.05)。結(jié)論:(1)茶多酚可以增加小腸內(nèi)菌群的多樣性,降低盲腸、結(jié)腸以及大腸內(nèi)菌群多樣性,促進(jìn)有益菌的生長,抑制有害菌的生長,調(diào)節(jié)了腸道菌群的組成。(2)茶多酚可以提高腸道內(nèi)胰蛋白酶活性,降低盲腸內(nèi)淀粉酶和脂肪酶活性,提高小腸脂肪酶活性。茶多酚降低小腸、盲腸和大腸內(nèi)纖維素酶活性,提高整個腸道木聚糖酶活性,對結(jié)腸內(nèi)纖維素酶活性無明顯影響。(3)茶多酚可以增加小腸內(nèi)短鏈脂肪酸含量,降低盲腸、結(jié)腸、大腸內(nèi)丙酸和丁酸含量,提高乙酸、丁酸、戊酸、異戊酸含量。實驗結(jié)果表示,茶多酚在體內(nèi)可以通過影響腸道菌群、腸道酶活性和短鏈脂肪酸調(diào)節(jié)機(jī)體,為茶多酚的廣泛使用提供了理論依據(jù)。
【圖文】：

圖 2-1 模型小鼠 圖 2-2 模型組與正常組小鼠盲腸對比圖Fig.2-1 Model mice Fig.2-2 The cecal contrast map betweenthe model group and the normal group2.3.2 小鼠腸道內(nèi)容物 PCR 擴(kuò)增凝膠電泳結(jié)果16SrDNA 指的是基因組中編碼核糖體 16S rRNA 分子對應(yīng)的 DNA 序列，也就是 16S rRNA 的編碼基因。由 9 個可變區(qū)和 10 個保守區(qū)組成（可變區(qū)為 V1 到 V9，保守區(qū)為白色區(qū)段），其中保守區(qū)反映了生物物種間的親緣關(guān)系，而可變區(qū)則表明物種間的差異。采用上述條件對無菌采集各處理組的小腸、盲腸、結(jié)腸、大腸內(nèi)容物，每 3 組同部位混勻后進(jìn)行檢測，由圖 2-3 所示，除了低劑量組小鼠的小腸內(nèi)容物未能檢測到細(xì)菌外，其余均能檢測到目的條帶，且目的條帶大小正確，可以進(jìn)行下一步實驗。

圖 2-1 模型小鼠 圖 2-2 模型組與正常組小鼠盲腸對比圖Fig.2-1 Model mice Fig.2-2 The cecal contrast map betweenthe model group and the normal group2.3.2 小鼠腸道內(nèi)容物 PCR 擴(kuò)增凝膠電泳結(jié)果16SrDNA 指的是基因組中編碼核糖體 16S rRNA 分子對應(yīng)的 DNA 序列，也就是 16S rRNA 的編碼基因。由 9 個可變區(qū)和 10 個保守區(qū)組成（可變區(qū)為 V1 到 V9，保守區(qū)為白色區(qū)段），其中保守區(qū)反映了生物物種間的親緣關(guān)系，，而可變區(qū)則表明物種間的差異。采用上述條件對無菌采集各處理組的小腸、盲腸、結(jié)腸、大腸內(nèi)容物，每 3 組同部位混勻后進(jìn)行檢測，由圖 2-3 所示，除了低劑量組小鼠的小腸內(nèi)容物未能檢測到細(xì)菌外，其余均能檢測到目的條帶，且目的條帶大小正確，可以進(jìn)行下一步實驗。
【學(xué)位授予單位】：山東中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2599752