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知母多糖的分離純化與結(jié)構(gòu)分析

發(fā)布時(shí)間:2020-03-25 05:36
【摘要】:知母(Anemarrhena asphodeloides Bge.)是百合科知母屬中藥,具有清熱泄火,滋陰潤(rùn)燥的功效。多糖是知母的主要活性成分之一,具有降血糖、抗炎、增強(qiáng)免疫等功能。目前對(duì)知母多糖的研究主要集中在藥理活性方面,對(duì)其結(jié)構(gòu)特征的研究報(bào)道較少。為了更好地研究知母多糖的構(gòu)效關(guān)系,有必要深入分析其組成與結(jié)構(gòu)。因此,我們?cè)O(shè)計(jì)了本論文的研究?jī)?nèi)容,具體的研究結(jié)果如下:利用熱水煮提、乙醇醇沉等方法得到知母多糖WABP,得率為8.2%。WABP的糖含量為55.2%,糖醛酸含量為19.2%,蛋白質(zhì)含量為0.8%,經(jīng)完全酸水解及HPLC分析可知WABP的主要單糖組成及其所占的摩爾比為Man:GalA:Glc:Ara:Gal=32.3:23.6:14.1:14.1:11.2。將WABP利用DEAE-纖維素離子交換柱層析分級(jí),分別用蒸餾水及0.5 M NaCl水溶液洗脫,得到中性糖級(jí)分WABP-N和酸性糖級(jí)分WABP-A,得率分別為54.3%和21.7%。進(jìn)一步將WABP-A利用離子交換柱層析分級(jí),采用不同濃度的鹽溶液洗脫,得到WABPAH、WABP-A2、WABP-A3和WABP-A5四個(gè)級(jí)分,其中WABP-A2和WABP-A3為主要級(jí)分,得率分別為56.6%和30.3%。WABP-A2經(jīng)Sepharose CL-6B凝膠柱層析分級(jí)得到WABP-A2a,WABP-A2b和WABP-A2c三個(gè)均一級(jí)分,WABP-A3經(jīng)Sepharose CL-6B凝膠柱層析分級(jí)得到WABP-A3a和WABP-A3b兩個(gè)均一級(jí)分。對(duì)均一級(jí)分WABP-A2a、WABP-A2b和WABP-A3a進(jìn)行單糖組成測(cè)定、紅外光譜、甲基化以及核磁共振分析,結(jié)果表明這三個(gè)級(jí)分均為I型聚鼠李半乳糖醛酸(RG-I)果膠結(jié)構(gòu)域,以α-1,4-GalpA和α-1,2-Rhap連接構(gòu)成主鏈,側(cè)鏈連有高度分支的阿拉伯聚糖和I型阿拉伯半乳聚糖(AG-I),此外WABP-A2b的側(cè)鏈中還含有少量的II型阿拉伯半乳聚糖(AG-II)。對(duì)另外兩種均一級(jí)分WABP-A2c和WABP-A3b進(jìn)行單糖組成測(cè)定,結(jié)果顯示二者主要由GalA構(gòu)成,含量分別為79.2%和72.7%。紅外光譜及核磁共振分析結(jié)果表明,WABP-A2c和WABP-A3b主要為α-1,4-GalpA連接構(gòu)成的聚半乳糖醛酸(HG)結(jié)構(gòu)域,部分GalA發(fā)生甲酯化和乙;揎。果膠酶酶解實(shí)驗(yàn)表明WABP-A2c和WABP-A3b中除HG結(jié)構(gòu)域外,還含有少量RG-I和II型聚鼠李半乳糖醛酸(RG-II)結(jié)構(gòu)域,不同的結(jié)構(gòu)域可能通過(guò)共價(jià)鍵連接。本論文對(duì)知母多糖的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了詳細(xì)研究,知母酸性糖中含有HG型、RG-I型、RG-II型和AG型果膠,AG型果膠作為RG-I型果膠側(cè)鏈存在,各種類(lèi)型果膠共價(jià)連接為果膠大分子,研究結(jié)果為知母多糖的藥理活性及構(gòu)效研究提供了結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。
【圖文】:

示意圖,果膠結(jié)構(gòu),示意圖


圖 1-2 RG-I 型果膠結(jié)構(gòu)示意圖[4]果膠通常存在于植物壁中,由至少 8 個(gè) 1,4-連接的 α-D式和類(lèi)型均不同的糖殘基組成側(cè)鏈(A-D),結(jié)構(gòu)示意圖如鑒定了 RG-II 型果膠的不同結(jié)構(gòu)亞基,但是主鏈上連接支點(diǎn)以及它們的空間取向仍然是科學(xué)家應(yīng)對(duì)的巨大挑戰(zhàn)不僅是最復(fù)雜的而且是最保守的細(xì)胞壁多糖,對(duì)正常的

示意圖,果膠結(jié)構(gòu),示意圖


圖 1-2 RG-I 型果膠結(jié)構(gòu)示意圖[4](2)RG-II 型果膠通常存在于植物壁中,由至少 8 個(gè) 1,4-連接的 α-D-GalpA 殘基組架,由連接方式和類(lèi)型均不同的糖殘基組成側(cè)鏈(A-D),結(jié)構(gòu)示意圖如圖 1-3 所示,F(xiàn)在幾乎完全鑒定了 RG-II 型果膠的不同結(jié)構(gòu)亞基,但是主鏈上連接的 A 和 C 側(cè)相對(duì)位置和分支點(diǎn)以及它們的空間取向仍然是科學(xué)家應(yīng)對(duì)的巨大挑戰(zhàn)[5]。目前研究 RG-II 型果膠不僅是最復(fù)雜的而且是最保守的細(xì)胞壁多糖,對(duì)正常的植物生長(zhǎng)和發(fā)關(guān)重要。
【學(xué)位授予單位】:東北師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2019
【分類(lèi)號(hào)】:R284

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本文編號(hào):2599478

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