【摘要】：目的:缺血性卒中(Ischemic stroke)是世界范圍內(nèi)死亡和殘疾的主要原因,目前治療手段有限,迫切需要開發(fā)新的中風(fēng)治療方法。中醫(yī)(TCM)是公認(rèn)的藥物發(fā)現(xiàn)來源,中醫(yī)在中國(guó)已有兩千多年的歷史,中藥療法是治療中風(fēng)的一種有希望的方法。炎癥和凋亡在腦缺血發(fā)病機(jī)制中起著重要作用,可能是治療的靶點(diǎn)之一。螻蛄為昆蟲類藥材,具有鎮(zhèn)靜、利尿、降壓、通便、止痛、抗結(jié)核、神經(jīng)保護(hù)等多種作用,以其入藥的組方在多種醫(yī)藥典籍均有記載,在臨床中也有廣泛應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)采用局灶性腦缺血永久性大鼠模型,行pMCAO手術(shù),觀察螻蛄提取物對(duì)大鼠腦缺血后行為學(xué)、梗死體積、小膠質(zhì)細(xì)胞及凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax表達(dá)的影響。方法:96只雄性SD大鼠(250-300g)被隨機(jī)分為假手術(shù)組(Sham)、模型組和螻蛄提取物干預(yù)組(Mole Cricket),每組32只。其中15只鼠(每組5只)于術(shù)后24小時(shí)處死進(jìn)行TTC染色,剩余81只鼠按處死的時(shí)間點(diǎn)分為1天、3天、7天四個(gè)亞組,每亞組各9只。采用線栓法使左側(cè)大腦中動(dòng)脈閉塞以制備局灶性腦缺血永久性模型(pMCAO)。假手術(shù)組僅分離頸部的血管,不進(jìn)行大腦中動(dòng)脈閉塞,其他手術(shù)步驟相同。螻蛄提取物干預(yù)組于術(shù)后2h按照1m L/100g劑量(生藥濃度為1g/m L)灌胃給予螻蛄提取物,此后每天給藥一次,直到各時(shí)間點(diǎn)結(jié)束。在相同時(shí)間點(diǎn),灌胃給予假手術(shù)組和模型組等體積生理鹽水。于各亞組對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)觀察大鼠行為學(xué)表現(xiàn)并進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分,采用TTC染色法測(cè)量大鼠腦梗死體積,采用HE染色法觀察梗死側(cè)腦組織病理學(xué)改變,采用免疫組織化學(xué)技術(shù)(每亞組各9只)測(cè)定大鼠梗死側(cè)紋狀體中Iba-1、Bcl-2、Bax陽性細(xì)胞表達(dá)情況。結(jié)果:1.神經(jīng)功能評(píng)估:假手術(shù)組沒有神經(jīng)功能缺失癥狀,評(píng)分是0分。在各個(gè)時(shí)間點(diǎn),螻蛄提取物干預(yù)組神經(jīng)功能評(píng)分較模型組顯著降低,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。2.梗死體積測(cè)量:造模24小時(shí)后采用TTC染色法測(cè)量梗死體積,假手術(shù)組無梗死灶,螻蛄提取物干預(yù)組梗死體積較模型組減小,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。3.HE染色:采用HE染色評(píng)估缺血側(cè)紋狀體病理學(xué)改變。假手術(shù)組大鼠紋狀體結(jié)構(gòu)未見明顯異常,神經(jīng)元形態(tài)正常,細(xì)胞核染色質(zhì)均勻、核仁清晰,細(xì)胞漿無腫脹、皺縮;模型組大鼠缺血側(cè)紋狀體可見細(xì)胞排列紊亂,神經(jīng)元胞體腫脹,細(xì)胞核固縮;與模型組相比較,螻蛄提取物干預(yù)組細(xì)胞排列較為整齊,神經(jīng)元結(jié)構(gòu)基本正常,胞體腫脹程度減輕。4.免疫組化染色:(1)Iba-1蛋白表達(dá):Iba-1標(biāo)記小膠質(zhì)細(xì)胞,假手術(shù)組可見少量Iba-1陽性小膠質(zhì)細(xì)胞,模型組Iba-1陽性小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量較假手術(shù)組增多(p0.05);螻蛄提取物干預(yù)組Iba-1陽性小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量較模型組減少,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。(2)Bcl-2蛋白表達(dá):Bcl-2是抗凋亡蛋白,表達(dá)于線粒體外膜、細(xì)胞核膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜。假手術(shù)組可見少量表達(dá);模型組Bcl-2的表達(dá)隨著缺血時(shí)間延長(zhǎng)呈下降趨勢(shì);與模型組相比,螻蛄提取物干預(yù)組Bcl-2陽性細(xì)胞數(shù)在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均高于模型組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。(3)Bax蛋白表達(dá):Bax是促凋亡蛋白,表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)和線粒體膜。假手術(shù)組可見少量表達(dá);模型組Bax蛋白表達(dá)在1d開始升高,第3d時(shí)出現(xiàn)大量表達(dá),第7d時(shí)開始下降;與模型組相比,螻蛄提取物干預(yù)組陽性細(xì)胞數(shù)在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均低于模型組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論:腦缺血后,炎癥反應(yīng)和凋亡在腦缺血性損傷中扮演重要角色。小膠質(zhì)細(xì)胞是炎性反應(yīng)最活躍的細(xì)胞之一,可誘發(fā)一系列炎癥反應(yīng)。Bcl-2家族蛋白包括Bcl-2、Bax等在細(xì)胞內(nèi)凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)方面發(fā)揮關(guān)鍵作用。中藥制劑螻蛄提取物不僅可抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的增殖,減輕炎癥反應(yīng)所致?lián)p害,還可以通過調(diào)控內(nèi)源性凋亡途徑,促進(jìn)了抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá),抑制了粗凋亡蛋白Bax的表達(dá),降低梗死區(qū)的細(xì)胞凋亡,促進(jìn)細(xì)胞的存活,降低梗死體積,恢復(fù)神經(jīng)功能,從而對(duì)受損腦組織起到保護(hù)作用。
【圖文】：

神經(jīng)功能障礙癥狀，評(píng)分為 0 分。模型組：神經(jīng)功能障礙評(píng)分隨缺降低趨勢(shì)。藥物干預(yù)組：使用螻蛄提取物干預(yù)后，與模型組相比，分在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)降低顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。結(jié)果提示：，使用螻蛄提取物干預(yù)后，可顯著改善大鼠的神經(jīng)功能障礙程度（見）。表 2-1 各組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分（ ）組別 1d 3d 7d假手術(shù)組 0 0 0模型組 2.53±0.53 2.27±0.61 2.05±0.45螻蛄提取物干預(yù)組1.61±0.5* 1.50±0.50* 1.33±0.56*注：與模型組相比，*p<0.05；x±S模型組

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文染色均勻呈紅色，未見白色梗死灶；模型組和區(qū)染為紅色，梗死區(qū)呈白色，與模型組相比，，小，提示腦梗死體積明顯減小(P<0.05)。（見下
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2597672