【摘要】：目的:研究雙白術(shù)內(nèi)酯對(duì)谷氨酸(Glu)誘導(dǎo)損傷SH-SY5Y細(xì)胞和PC12細(xì)胞的保護(hù)作用,研究探討其作用機(jī)制,為進(jìn)一步開發(fā)雙白術(shù)內(nèi)酯成為中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病藥物提供新的理論依據(jù)。方法:用不同濃度的Glu處理體外培養(yǎng)的SH-SY5Y和PC12兩種細(xì)胞,分別建立谷氨酸誘導(dǎo)損傷SH-SY5Y細(xì)胞和PC12細(xì)胞模型。模型建立成功后,實(shí)驗(yàn)分空白對(duì)照組、Glu損傷模型組、藥物對(duì)照組(低,中,高)三組。待細(xì)胞培養(yǎng)至70%時(shí),用無血清處理細(xì)胞12小時(shí),在分別用7.5mmol/L谷氨酸和10mmol/L谷氨酸孵育PC12細(xì)胞和SH-SY5Y細(xì)胞24h前提前30min加入不同濃度雙白術(shù)內(nèi)酯。接著用MTT法檢測SH-SY5Y細(xì)胞和PC12細(xì)胞生長和增殖活性;用分光光度法測定其培養(yǎng)液上清中乳酸脫氫酶(LDH)的活性、用試劑盒檢測其ROS活性、羅丹明123檢測細(xì)胞線粒體電位變化、Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測試劑盒檢測細(xì)胞凋亡率、吖啶橙(AO)/溴乙錠(EB)雙染色熒光染色法檢測細(xì)胞的凋亡形態(tài)變化,最后用western blot檢測相關(guān)蛋白Akt,P-Akt,GSK3β的變化。結(jié)果:當(dāng)分別用模型濃度Glu孵育PC12細(xì)胞和SH-SY5Y細(xì)胞24h,細(xì)胞增殖活性明顯下降,生長情況受到影響,說明模型制造成功。用雙白術(shù)內(nèi)酯預(yù)先保護(hù)后可見:細(xì)胞增殖活性得到提高,損傷形態(tài)明顯有所改善,LDH釋放減少,細(xì)胞凋亡率降低,ROS釋放活性降低,線粒體電位升高,并且呈濃度依賴性。WB結(jié)果表明P-Akt蛋白表達(dá)水平升高,GSK3β蛋白表達(dá)水平降低。結(jié)論:雙白術(shù)內(nèi)酯對(duì)Glu誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞和PC12細(xì)胞損傷呈濃度依賴性保護(hù)作用,其作用機(jī)制可能是通過抑制PI3k-Akt-GSK3β通路發(fā)揮保護(hù)作用。
【圖文】：

圖1-2雙白術(shù)內(nèi)酯抗AD作用機(jī)制

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，，7.5mmol/L Glu 對(duì) PC12 細(xì)胞的增殖制率達(dá)到 48.2±1.5%（P<0.001）（見圖 4-1），然而 155Y 細(xì)胞的增殖有明顯的抑制作用，抑制率達(dá)到 39.1±2.1
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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1 方學(xué)敏;曹崗;蔡銀燕;;白術(shù)化學(xué)成分的制備研究[J];中華中醫(yī)藥學(xué)刊;2013年05期

2 侯永春;嚴(yán)孜;;葛根素對(duì)慢性腦缺血大鼠海馬CA1區(qū)NGF表達(dá)的影響[J];中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志;2012年03期

3 姚新梅;晏芳;田雪梅;;白藜蘆醇對(duì)D-半乳糖誘導(dǎo)的亞急性衰老小鼠海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用[J];中國臨床解剖學(xué)雜志;2011年06期

4 楊麗娟;董軍;陸大祥;唐紅梅;;姜黃素對(duì)LPS激活小膠質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)損傷的海馬神經(jīng)元保護(hù)作用及機(jī)制[J];中國病理生理雜志;2010年04期

5 馮星;王正濂;林永成;周源;劉英姿;楊華中;;雙白術(shù)內(nèi)酯對(duì)Aβ_(1-40)致癡呆模型大鼠的作用[J];中國藥理學(xué)通報(bào);2009年07期

6 周暢;鮑美華;劉衛(wèi)平;;雙白術(shù)內(nèi)酯對(duì)三氯化鋁致癡呆模型小鼠的作用研究[J];長沙醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2008年01期

7 李偉;文紅梅;崔小兵;張發(fā)成;董潔;;白術(shù)的化學(xué)成分研究[J];中草藥;2007年10期

8 顧明,周慧芳,薛冰,牛東濱,何其華,王曉民;雷公藤單體T_(10)對(duì)Aβ1-42所致PC12細(xì)胞凋亡的抑制作用[J];生理學(xué)報(bào);2004年01期

9 王建枝,劉世杰;神經(jīng)退行性疾病神經(jīng)細(xì)胞死亡機(jī)理[J];國外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊(cè));2003年01期

10 蒲含林,王正濂,黃巧娟,許實(shí)波,林永成,吳雄宇;雙白術(shù)內(nèi)酯對(duì)豚鼠離體心房肌的作用[J];中國藥理學(xué)通報(bào);2000年01期

本文編號(hào)：2596503