發(fā)布時(shí)間：2020-03-23 03:06

【摘要】：目的:沒(méi)食子酸(gallic acid,GA)能抵抗心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)損傷,改善心肌肥大和纖維化,并發(fā)揮抗炎作用。然而,沒(méi)食子酸對(duì)心房鈉尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)分泌的影響尚不清楚。因此,本研究的目的是利用離體搏動(dòng)的大鼠心房灌流模型和在體灌注模型觀察沒(méi)食子酸對(duì)ANP分泌和心房機(jī)械活動(dòng)的影響并探討其作用機(jī)制。方法:本實(shí)驗(yàn)采用大鼠離體搏動(dòng)的心房灌流模型和在體實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?利用放射免疫法測(cè)定大鼠心房ANP的含量;采用蛋白免疫印跡(western blot,WB)分析心房肌細(xì)胞蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)亞型蛋白含量表達(dá)的變化。結(jié)果:1.沒(méi)食子酸(0.01,0.05,and 0.1μmol/L)以濃度依賴性方式增加ANP的分泌,同時(shí)發(fā)揮正性肌力作用(與對(duì)照循環(huán)比較,P0.05,n=6),其中0.1μmol/L的沒(méi)食子酸效果最強(qiáng)(與對(duì)照循環(huán)比較,P0.05,n=6)。而且,沒(méi)食子酸(0.1μmol/L)也顯著增加大鼠血漿ANP含量和血流動(dòng)力學(xué)(與對(duì)照組比較,P0.05,n=8)。2.沒(méi)食子酸上調(diào)心房肌組織PKCβ和PKCε蛋白表達(dá)的同時(shí)(與對(duì)照組比較,均P0.05,n=5),明顯促進(jìn)ANP的分泌并對(duì)心房機(jī)械活動(dòng)發(fā)揮正性肌力作用(與對(duì)照循環(huán)比較,均P0.05,n=6)。這些作用可被PKCβ的阻斷劑LY333531(0.5μmol/L)和PKCε的阻斷劑EAVSLKPT(0.3μmol/L)完全阻斷(與GA組比較,均P0.05,n=5)。3.PKCα阻斷劑G(?)6983(0.5μmol/L)明顯的減緩沒(méi)食子酸促進(jìn)ANP分泌的效應(yīng),并可完全翻轉(zhuǎn)沒(méi)食子酸對(duì)心房機(jī)械活動(dòng)的作用(與對(duì)照循環(huán)比較,均P0.05,n=6)。4.PKCδ的阻斷劑Rottlerin(1.0μmol/L)對(duì)沒(méi)食子酸促進(jìn)ANP的分泌和心房肌發(fā)揮正性肌力作用未產(chǎn)生顯著影響(與對(duì)照循環(huán)比較,均P0.05,n=6)。5.PLC的阻斷劑U73122(3.0 μmol/L)不僅完全阻斷沒(méi)食子酸上調(diào)PKCβ和PKCε蛋白表達(dá)的作用(與GA組比較,P0.05,n=6),而且也完全解除沒(méi)食子酸促進(jìn)ANP分泌的效應(yīng),并翻轉(zhuǎn)沒(méi)食子酸對(duì)心房肌的正性肌力作用(與對(duì)照循環(huán)比較,均 P0.05,n=6)。6.Ca~(2+)/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶II的阻斷劑KN62(3.0μmol/L)反而強(qiáng)化沒(méi)食子酸增加ANP分泌的效應(yīng),并翻轉(zhuǎn)沒(méi)食子酸對(duì)心房的正性肌力作用(與對(duì)照循環(huán)比較,均P0.05,n=6)。結(jié)論:沒(méi)食子酸通過(guò)PLC-DAG-PKC和PLC-IP3-Ca2+信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑促進(jìn)大鼠ANP分泌,同時(shí)對(duì)心房肌發(fā)揮正性肌力作用。
【圖文】：

維持心房搏動(dòng)。逡逑心房搏動(dòng)壓的變化（倍數(shù)）＝（給藥后的搏動(dòng)壓水平－基礎(chǔ)搏動(dòng)壓水平）／逡逑基礎(chǔ)搏動(dòng)壓水平。逡逑利用手術(shù)線將心房固定在透明聚乙烯套管的一端后，將套管置于逡逑２．０ｃｍ＞＜４．Ｏｃｍ的玻璃培養(yǎng)皿中，，并且心房組織沒(méi)于培養(yǎng)皿底部體積為３ｍｌ的逡逑ＨＥＰＥＳ緩沖液中，確保心房組織不貼壁后，立即連接恒速蠕動(dòng)栗向心房腔內(nèi)持逡逑續(xù)灌注氧飽和的ＨＥＰＥＳ緩沖液，裝置另一端會(huì)有心房灌流液流出。培養(yǎng)皿與恒逡逑溫水浴箱連接，使大鼠心房的溫度維持在３７°Ｃ左右，與在體所需溫度保持一致。逡逑給予心房３５Ｖ、１．５Ｈｚ的連續(xù)單刺激以維持心房搏動(dòng)。經(jīng)過(guò)６０ｍｉｎ的穩(wěn)定期之后，逡逑方可正式開(kāi)始實(shí)驗(yàn)，每１２ｍｉｎ設(shè)定為一個(gè)循環(huán)，每２ｍｉｎ收集一次心房灌流液以逡逑用于測(cè)定ＡＮＰ含量的變化。逡逑

磁力攪拌器充分混勻。轉(zhuǎn)膜前至少３０ｍｉｎ用預(yù)冷的轉(zhuǎn)膜液浸泡轉(zhuǎn)膜濾紙和，每塊膠使用兩塊海綿、六片薄濾紙或兩片厚濾紙。剪好與膠體大小相同的逡逑ＤＦ膜，轉(zhuǎn)膜前５ｍｉｎ將其浸泡于預(yù)冷過(guò)的甲醇溶液中，使ＰＶＤＦ膜上的電荷逡逑分活化，提高轉(zhuǎn)膜效率。逡逑轉(zhuǎn)膜：由下至上將黑夾板（陰極）、海綿墊、３層濾紙、凝膠、ＰＶＤＦ膜、３逡逑濾紙、海綿墊、白夾板（陽(yáng)極）按順序依次擺好，為了確�！叭髦巍本o密貼合，逡逑膠與ＰＶＤＦ膜必須對(duì)齊。另外，每放一層都應(yīng)排盡氣泡，如果有氣泡，可用光逡逑的試管在表面輕輕滾動(dòng)，以排除氣泡。“三明治”轉(zhuǎn)膜如圖３所示。逡逑按裝置電極正確連接好裝置，接通電源，確保電荷由負(fù)極向正極流動(dòng)，置Ｃ冰箱后，選用低電壓９０Ｖ恒壓轉(zhuǎn)膜大約３０－６０ｍｉｍ轉(zhuǎn)膜時(shí)間需依據(jù)凝膠的厚逡逑和目標(biāo)蛋白的大小而定，目標(biāo)蛋白分子量越大，所需轉(zhuǎn)膜時(shí)間越長(zhǎng)，反之則轉(zhuǎn)逡逑時(shí)間越短。逡逑轉(zhuǎn)膜結(jié)束后，切斷電源，打開(kāi)轉(zhuǎn)膜夾板，小心取出ＰＶＤＦ膜并做好標(biāo)記。逡逑＜邋７邋Ｖ邋７１—（＂邋：■邋（＂＞邋ｆ邋ｙ￣７邋Ｔ邋７１邋Ｃ邋｝邋…廠邋ｙｎ邋ｎ邋廠）灸邐逡逑
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 羅鑫;王雪晶;趙yN武;黃文哲;王振中;蕭偉;;紅景天中紅景天苷、酪醇、大花紅天素及沒(méi)食子酸提取工藝優(yōu)選[J];中國(guó)中藥雜志;2015年18期

2 張浩楠;楊玉梅;鄔國(guó)棟;張慧文;高博文;;蒙藥廣棗抗心律失常作用有效成分的分離[J];包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2013年03期

3 柯發(fā)敏;張開(kāi)蓮;;沒(méi)食子酸的研究進(jìn)展[J];瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年04期

4 謝曉艷;劉洪濤;張吉;李秀英;李文明;于超;;沒(méi)食子酸體外抗氧化作用研究[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2011年03期

5 卜麗梅;關(guān)鳳英;喬萍;于艷華;趙麗紅;石卓;;沒(méi)食子酸對(duì)大鼠缺血再灌注損傷后細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用及機(jī)制研究[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué);2010年11期

6 陳東海,季乃軍,梅益斌,童麗軍,樊必夫,李付遠(yuǎn),考驗(yàn);慢性心房顫動(dòng)患者血清ANP和BNP水平的變化[J];放射免疫學(xué)雜志;2005年04期

7 李秀萍,李春遠(yuǎn),渠桂榮,李彩麗;五倍子的研究概況[J];中醫(yī)藥學(xué)報(bào);2002年03期

本文編號(hào)：2596076