【摘要】：目的:觀察溫陽活血利水法對氨基核苷嘌呤霉素?fù)p傷的小鼠永生性足細(xì)胞發(fā)動蛋白(Dynamin)表達(dá)的影響,探討溫陽活血利水方降低尿蛋白的作用機制。方法:1.制備溫陽活血利水方的中藥含藥血清。2.細(xì)胞培養(yǎng)、傳代和誘導(dǎo)分化成熟的足細(xì)胞,用濃度為45mg/L的嘌呤霉素?fù)p傷足細(xì)胞,并用溫陽活血利水方中藥血清進行干預(yù),以糖皮質(zhì)激素地塞米松干預(yù)作為陽性對照,并設(shè)正常對照和中藥空白對照,分組如下:A:正常對照組、B:嘌呤霉素(45mg/L)組/模型組、C:地塞米松(1μmol/L)組、D:10%的中藥血清組、E:20%的中藥血清組、F:中藥血清空白對照組。3.實時定量PCR檢測各組足細(xì)胞組織蛋白酶(Cat L)m RNA和足細(xì)胞發(fā)動蛋白(dynamin)m RNA的相對表達(dá)量。4.Western blot檢測各組足細(xì)胞組織蛋白酶(Cat L)和足細(xì)胞發(fā)動蛋白(dynamin)的蛋白表達(dá)。5.免疫熒光染色結(jié)合激光共聚焦技術(shù)觀察溫陽活血利水中藥方對嘌呤霉素造成的足細(xì)胞損傷模型中足細(xì)胞細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)微絲(microfilaments)、微管(microtubule)的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化以及足細(xì)胞組織蛋白酶(Cat L)和足細(xì)胞發(fā)動蛋白(dynamin)的表達(dá)變化。結(jié)果:1.RT-PCR實驗顯示:模型組的CatL m RNA表達(dá)含量比正常組高(P0.01);與模型組比較,中藥組與地塞米松組Cat L m RNA表達(dá)含量降低(均P0.01);10%與20%中藥組與地塞米松組相比,Cat L m RNA無差異(P0.01);10%中藥組Cat L m RNA表達(dá)較20%中藥組高(P0.01);實驗中6個分組足細(xì)胞Dynamin m RNA相對表達(dá)量無組間差異(P0.01)。2.免疫熒光顯示:與正常組比較,模型組的Cat L熒光強度增強,Dynamin熒光強度減弱;與模型組比較,中藥血清組和地塞米松組Cat L蛋白熒光減弱,而Dynamin熒光增強。3.Western blot顯示:與正常組比較,模型組的Cat L表達(dá)升高,Dynamin表達(dá)降低(均P0.01);與模型組比較,中藥組和地塞米松組Cat L表達(dá)降低,Dynamin表達(dá)升高(均P0.01);與地塞米松組比較,兩中藥組Cat L表達(dá)無差異(P0.01),而10%中藥組Dynamin表達(dá)較低,20%中藥組Dynamin表達(dá)較高(均P0.01);兩中藥組之間比較,10%中藥組Cat L表達(dá)較高,Dynamin表達(dá)較低(均P0.01);中藥血清空白對照組與正常組比較,Cat L與Dynamin均無差異(P0.01)。4.微絲、微管的免疫熒光結(jié)果:與正常組比較,模型組細(xì)胞胞體縮小、偽足回縮,細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)微絲形成的張力纖維出現(xiàn)了由協(xié)調(diào)有序的平行排列模式重組變成了紊亂無序的放射網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)、微絲數(shù)量減少,并且趨于邊緣化形成核外環(huán),與此同時細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)微管出現(xiàn)了數(shù)量減少、解聚、排列紊亂,但在足細(xì)胞初級突起處分布數(shù)量有所增加;在中藥血清組和地塞米松組均可以觀察到足細(xì)胞形態(tài)、骨架蛋白結(jié)構(gòu)有所改善。結(jié)論:溫陽活血利水方中藥血清會使嘌呤霉素誘導(dǎo)的小鼠永生化足細(xì)胞損傷模型中足細(xì)胞組織蛋白酶Cat L表達(dá)減少,足細(xì)胞發(fā)動蛋白Dynamin含量增加,但Dynamin基因的相對表達(dá)量無明顯改變,并糾正細(xì)胞肌動蛋白的骨架重構(gòu)和微管的排列紊亂。溫陽活血利水法可能是通過下調(diào)足細(xì)胞Cat L的表達(dá)而減少Cat L對足細(xì)胞Dynamin的裂解,從而穩(wěn)定細(xì)胞骨架中的微絲、微管等結(jié)構(gòu),維持足細(xì)胞的形態(tài),減少足突融合以使蛋白尿得以改善。
【圖文】：

. 氨基核苷嘌呤霉素對足細(xì)胞微絲、微管的作用以及溫陽活血利響腎小球足細(xì)胞高度分化，是腎臟濾過裝置的重要組成部分。細(xì)胞骨架是其保持動態(tài)細(xì)胞結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)，在適當(dāng)?shù)淖慵?xì)胞功能中要作用。細(xì)胞骨架主要有三種結(jié)構(gòu)，微絲、微管和中間絲，它們、彼此依賴，共同構(gòu)成細(xì)胞的支架結(jié)構(gòu)，對細(xì)胞內(nèi)外的各種細(xì)胞胞分裂、細(xì)胞遷移、細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)運輸、細(xì)胞粘附等）調(diào)控均有重足細(xì)胞中這三種結(jié)構(gòu)的分布是：細(xì)胞胞體和初級突起內(nèi)的骨架結(jié)(microtubule)和中間絲(intermediate filaments)為主，次級濾過膜的組成結(jié)構(gòu)之一，習(xí)慣直接稱之為足突）的骨架結(jié)構(gòu)則icrofilament)為主[34]。

圖 2：微管、中間絲、微絲之間聯(lián)系腎小球的足細(xì)胞暴露于血液濾過壓力之中，其與基底膜的有效連接對維持濾過功能至關(guān)重要，粘著斑是足細(xì)胞與基底膜連接和細(xì)胞外環(huán)境作用的必要結(jié)構(gòu)之一。對胃癌細(xì)胞的新近研究表明，粘著斑激酶與細(xì)胞的微管、微絲分布有關(guān)，可見微絲、微管與粘著斑存在某種關(guān)聯(lián)[43]。另外，一項對足細(xì)胞發(fā)動蛋白 Dynamin 的研究顯示，Dynamin 與微管存在某種關(guān)聯(lián)，Dynamin 的缺失會導(dǎo)致微管蛋白乙�；郊眲≡黾覽23]。結(jié)合本次實驗中溫陽活血利水方對損傷足細(xì)胞微管的修復(fù)以及對 Dynamin 的保護作用，我們推測該中藥方可以通過降低損傷足細(xì)胞中 CatL 的表達(dá)，，減少 CatL 對Dynamin 的裂解，減少因 dynamin 缺失造成的微管蛋白的破壞，從而保護dynamin 與微絲結(jié)構(gòu)的良性互動，修復(fù)損傷足細(xì)胞中微絲、微管結(jié)構(gòu)，保護粘著斑結(jié)構(gòu)功能的完整，從而使足細(xì)胞穩(wěn)定地附著于基底膜，維持腎小
【學(xué)位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王少清;賴瑋婧;匡祀海;肖建平;呂亞萍;毛楠;汪力;;健康體檢人群中慢性腎臟病的流行病學(xué)調(diào)查[J];保健醫(yī)學(xué)研究與實踐;2016年03期

2 郭海強;劉同陽;賈舒婷;羅瑛;;癌蛋白YAP1的研究進展[J];生物化學(xué)與生物物理進展;2015年03期

3 肖川;劉學(xué)光;;Rho GTPases對腎小球足細(xì)胞特異性裂孔膜骨架蛋白的調(diào)控作用[J];臨床與病理雜志;2014年06期

4 呂佩佳;魏連波;陳磊;王明;王艷靖;耿振波;馮濤;李成杰;;中西醫(yī)結(jié)合治療原發(fā)性難治性腎病綜合征的meta分析[J];數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志;2012年03期

5 柳林;李照玉;紀(jì)偉;;Dynamin在胞吞中的研究進展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展;2012年01期

6 謝朝暉;陳蘭英;;細(xì)胞骨架研究進展[J];癌變·畸變·突變;2011年04期

7 袁軍;魯艷芳;黃瓊霞;李卉;陳陶后;;溫陽活血利水方對阿霉素腎病大鼠腎小球足細(xì)胞podocin表達(dá)的影響[J];中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2010年06期

8 劉淑芳;丁潔;范青鋒;張涵;;嘌呤霉素致足細(xì)胞損傷細(xì)胞模型的建立[J];北京大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2008年06期

9 康郁林;朱光華;何威遜;吳瀅;;足細(xì)胞骨架穩(wěn)定性的調(diào)控[J];國際泌尿系統(tǒng)雜志;2008年04期

10 趙霞;劉全宏;王筱冰;米娜;;細(xì)胞骨架纖維間的相互聯(lián)系[J];細(xì)胞生物學(xué)雜志;2008年02期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 徐維瑋;糖原合成酶激酶3β調(diào)節(jié)足細(xì)胞骨架在足細(xì)胞損傷機制及治療中的作用[D];南京大學(xué);2014年

2 劉海梅;地塞米松改善足細(xì)胞細(xì)胞骨架損傷的分子機制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前4條

1 楊柳;溫陽活血利水方對足細(xì)胞組織蛋白酶L表達(dá)的影響[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2015年

2 黃金鈴;兒童難治性腎病綜合征中醫(yī)證型分布及溫陽活血利水法則的療效評價[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2014年

3 溫躍強;地塞米松對嘌呤霉素?fù)p傷小鼠腎小球足細(xì)胞系保護作用的分子機制研究[D];廣州醫(yī)學(xué)院;2009年

4 聶婭;溫陽活血行水法治療脾腎陽虛型原發(fā)性腎病綜合征的臨床療效研究[D];湖南中醫(yī)學(xué)院;2001年

本文編號：2592523