發(fā)布時間：2020-03-20 04:10

【摘要】：川芎嗪是中藥川芎中的主要有效成分,是一種活性生物堿一四甲基吡嗪,具有改善微循環(huán)、抗血小板聚集以及活血化淤等作用,近年其抗腫瘤作用也備受到關(guān)注,具有抑制腫瘤生長、轉(zhuǎn)移,誘導腫瘤細胞凋亡和自噬等作用。但鹽酸川芎嗪在體內(nèi)半衰期短,生物利用度低,普通制劑需頻繁給藥,血藥濃度波動大,給患者帶來了不便,將其制成緩釋制劑以微顆粒的形式進入體內(nèi),減輕不良反應,降低毒副作用,提高療效。聚乳酸-羥基乙酸共聚物(poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA)是一種可降解的功能高分子有機化合物,最終可分解為二氧化碳和水,對人體不產(chǎn)生危害,具有良好的成膜性能,所以在微球制備中常作為首選載體。殼寡糖是自然界中唯一帶正電荷陽離子堿性氨基低聚糖,具有水溶性好、吸收能力強、生物相容性好等優(yōu)點,同時對人體免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、降血脂、抗氧化等生理活性有著重要作用。用帶有陽離子的基團修飾PLGA,能提高藥物的細胞黏附性和吸收,解決藥物突釋性、半衰期短、在體內(nèi)給藥部位不穩(wěn)定、需頻繁給藥的問題。本文主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:1.鹽酸川芎嗪微球制備及工藝研究采用復乳-溶劑揮發(fā)法制備殼寡糖修飾的鹽酸川芎嗪緩釋微球,形成w/o/w的復乳,磁力攪拌,揮發(fā)有機溶劑,高速離心收集,通過EDC和NHS活化的方法,將PLGA的端羧基與殼寡糖的游離氨基共價連接,最終制得殼寡糖修飾的鹽酸川芎嗪PLGA微球。通過單因素試驗,以包封率為評價指標,考察影響微球質(zhì)量的因素,采用正交試驗進行優(yōu)化,篩選出最佳的處方為PLGA濃度為50g/L,藥物濃度為30g/L,內(nèi)水相/油相比為1:10,外水相油相比為4:1,最佳處方制備的鹽酸川芎嗪微球表面光滑圓整,包封率在60%以上。同時建立了制劑中鹽酸川芎嗪含量測定方法,該方法準確度高,穩(wěn)定性好,儀器精密度良好,可用于鹽酸川芎嗪的含量測定。2.殼寡糖修飾的鹽酸川芎嗪微球的表征通過掃描電鏡觀測鹽酸川芎嗪微球的粒徑大小和形態(tài)。固化的微球通過高速離心收集,用去離子水洗滌3遍,冷凍干燥,置于硅片上,真空下噴金,使用TM3000臺式掃描電鏡觀測微球形態(tài)及大小。鹽酸川芎嗪微球整體分散均勻,大小均一,個體之間無明顯黏連,表面光滑,呈完整圓球形態(tài),包封率和載藥量較高。3.鹽酸川芎嗪微球體外釋放規(guī)律分別精密量取未經(jīng)修飾鹽酸川芎嗪微球混懸液、經(jīng)殼寡糖修飾后微球混懸液及等質(zhì)量的鹽酸川芎嗪注射劑各lOml,置于預先處理好的透析袋中,密封后置于磷酸鹽緩沖溶液(pH7.4)中,于恒溫水浴攪拌,隨著藥物逐漸被釋放出來,每隔一段時間取緩釋液,補液。鹽酸川芎嗪注射劑在釋放介質(zhì)中釋放較快,而未經(jīng)修飾的鹽酸川芎嗪微球在釋放前期存在一定的突釋現(xiàn)象,經(jīng)修飾后的微球突釋效應減小,24h達到平穩(wěn)狀態(tài),累積釋放量78.23%,顯示出一定的緩釋特性。4.體外細胞實驗選用人乳腺癌MCF-7細胞、人肺腺癌A549細胞,用CCK-8法考察鹽酸川芎嗪微球的細胞毒性。通過前期實驗,初步篩選出最佳鹽酸川芎嗪濃度為0.054mg/ml,作用時間為24h。HPLC檢測兩種細胞內(nèi)鹽酸川芎嗪濃度,由高到低依次為MCF-7A549細胞,具體分別為46.77μg/ml、30.38μg/ml。激光共聚焦觀測經(jīng)殼寡糖修飾的微球處理的細胞較未經(jīng)殼寡糖修飾的微球組、川芎嗪對照組有明顯熒光,MCF-7細胞較A549細胞熒光強度更大。結(jié)論:1.采用復乳-溶劑揮發(fā)法制備殼寡糖修飾的鹽酸川芎嗪微球,工藝簡單易行,條件溫和,包封率、載藥量均較高、結(jié)構(gòu)穩(wěn)定,可在室溫下能夠長期保存;2.通過掃描電鏡觀察微球表面形態(tài),光滑圓整、尺寸可控;平均粒徑為180.5μm,載藥量達19.05%,包封率為68.16%。3.通過對微球修飾前后的體外藥物釋放行為進行考察,修飾后的微球由于外層包裹殼寡糖,藥物須經(jīng)殼寡糖緩慢降解后釋放,故突釋效應有所減小;4.由于殼寡糖分子量小,更容易進入細胞,在體外細胞實驗中發(fā)現(xiàn)經(jīng)殼寡糖修飾后的微球?qū)δ[瘤細胞有更強的靶向性,為川芎嗪靶向制劑的開發(fā)及應用提供參考。
【圖文】：

（ａ）未經(jīng)修飾微球邐（ｂ）殼寡糖修飾微球逡逑圖２－２鹽酸川芎嗪微球粒徑分布圖逡逑圖邋２－２邋Ｐａｒｔｉｃｌｅ邋ｓｉｚｅ邋ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｉｎｅ邋ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ邋ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ逡逑２．邋２鹽酸川芎嗪含量測定方法逡逑取微球粉末約２５ｍｇ，精密稱定，加入２ｍｌ乙腈使其充分溶解，再加入適量逡逑甲醇超聲３０ｍｉｎ后以甲醇定容至５０ｍｌ，搖勻，濾過，取續(xù)濾液用ＨＰＬＣ進行測逡逑定。載藥量＝微球中藥物質(zhì)量／微球質(zhì)量Ｘ邋１００％，包封率＝微球中藥物質(zhì)量／逡逑投入的總藥量ＸＩ００％。逡逑２．邋２．邋１色譜條件逡逑色譜柱：ＳｅｐａｘＧＰ－Ｃｉ８邋（４．６ｘ２５０ｍｍ，５ｐｍ）；流動相：Ｖ（水）：Ｖ（甲醇）＝逡逑５２邋：邋４８；檢測波長：２９０ｍｍ；流速為ｌｍｌ／ｍｉｎ；柱溫：３５°Ｃ；進樣量：１００。逡逑１８逡逑

邐５９０逡逑Ｗａｗｓｎｔｒｔ＾Ｔ＊邋（？Ｈｌ＞逡逑圖２－１邋ＰＬＧＡ邋（Ａ），殼寡糖修飾微球（Ｂ），殼寡糖（Ｃ）的紅外光譜圖逡逑圖邋２－１邋Ｔｈｅ邋Ｉｎｆｒａｒｅｄ邋ｓｐｅｃｔｒａ邋ｏｆ邋ＰＬＧＡ邋（Ａ），邋ＣＯ邋Ｓ－ｍｏｄｉｆｉｅｄ邋ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ邋（Ｂ），逡逑ＣＯＳ邋（Ｃ）逡逑２．邋１．２．邋２粒徑分布和Ｚｅｔａ電位檢測逡逑取制備的凍干載藥微球，加純化水分散，，稀釋至適宜濃度，用激光分析儀測逡逑定其粒度分布及Ｚｅｔａ電位。修飾前的平均粒徑為２１５．３４ｎｍ，Ｚｅｔａ電位一１２．８ｍＶ，逡逑修飾后的微球平均粒徑有所增大，由２１５．３啤增大到２６８．５ｐｍ，Ｚｅｔａ電位＋９．２ｍＶ。逡逑也可定性看出殼寡糖成功修飾在ＰＬＧＡ載藥微球表面。逡逑１５邐邐邐邐邐邐邐邋１Ｓ｜邋邐邐ｗ逡逑Ｉｓ邋…：邐ｄ．＼．．邐：１ｓ邋……：邐……：逡逑ａｉ邐１邐？邐１Ｍ邐擺邐＿０邋Ｍ邐，邐，０邐？邐１００６邐１�。浚徨义希幔�，ｉｄＵｒａ）逡逑（ａ）未經(jīng)修飾微球邐（ｂ）殼寡糖修飾微球逡逑圖２－２鹽酸川芎嗪微球粒徑分布圖逡逑圖邋２－２邋Ｐａｒｔｉｃｌｅ邋ｓｉｚｅ邋ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｉｎｅ邋ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ邋ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ逡逑２．邋２鹽酸川芎嗪含量測定方法逡逑取微球粉末約２５ｍｇ
【學位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R283.6

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本文編號：2591222