【摘要】：川芎嗪是中藥川芎中的主要有效成分,是一種活性生物堿一四甲基吡嗪,具有改善微循環(huán)、抗血小板聚集以及活血化淤等作用,近年其抗腫瘤作用也備受到關(guān)注,具有抑制腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移,誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡和自噬等作用。但鹽酸川芎嗪在體內(nèi)半衰期短,生物利用度低,普通制劑需頻繁給藥,血藥濃度波動(dòng)大,給患者帶來(lái)了不便,將其制成緩釋制劑以微顆粒的形式進(jìn)入體內(nèi),減輕不良反應(yīng),降低毒副作用,提高療效。聚乳酸-羥基乙酸共聚物(poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA)是一種可降解的功能高分子有機(jī)化合物,最終可分解為二氧化碳和水,對(duì)人體不產(chǎn)生危害,具有良好的成膜性能,所以在微球制備中常作為首選載體。殼寡糖是自然界中唯一帶正電荷陽(yáng)離子堿性氨基低聚糖,具有水溶性好、吸收能力強(qiáng)、生物相容性好等優(yōu)點(diǎn),同時(shí)對(duì)人體免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、降血脂、抗氧化等生理活性有著重要作用。用帶有陽(yáng)離子的基團(tuán)修飾PLGA,能提高藥物的細(xì)胞黏附性和吸收,解決藥物突釋性、半衰期短、在體內(nèi)給藥部位不穩(wěn)定、需頻繁給藥的問(wèn)題。本文主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:1.鹽酸川芎嗪微球制備及工藝研究采用復(fù)乳-溶劑揮發(fā)法制備殼寡糖修飾的鹽酸川芎嗪緩釋微球,形成w/o/w的復(fù)乳,磁力攪拌,揮發(fā)有機(jī)溶劑,高速離心收集,通過(guò)EDC和NHS活化的方法,將PLGA的端羧基與殼寡糖的游離氨基共價(jià)連接,最終制得殼寡糖修飾的鹽酸川芎嗪PLGA微球。通過(guò)單因素試驗(yàn),以包封率為評(píng)價(jià)指標(biāo),考察影響微球質(zhì)量的因素,采用正交試驗(yàn)進(jìn)行優(yōu)化,篩選出最佳的處方為PLGA濃度為50g/L,藥物濃度為30g/L,內(nèi)水相/油相比為1:10,外水相油相比為4:1,最佳處方制備的鹽酸川芎嗪微球表面光滑圓整,包封率在60%以上。同時(shí)建立了制劑中鹽酸川芎嗪含量測(cè)定方法,該方法準(zhǔn)確度高,穩(wěn)定性好,儀器精密度良好,可用于鹽酸川芎嗪的含量測(cè)定。2.殼寡糖修飾的鹽酸川芎嗪微球的表征通過(guò)掃描電鏡觀測(cè)鹽酸川芎嗪微球的粒徑大小和形態(tài)。固化的微球通過(guò)高速離心收集,用去離子水洗滌3遍,冷凍干燥,置于硅片上,真空下噴金,使用TM3000臺(tái)式掃描電鏡觀測(cè)微球形態(tài)及大小。鹽酸川芎嗪微球整體分散均勻,大小均一,個(gè)體之間無(wú)明顯黏連,表面光滑,呈完整圓球形態(tài),包封率和載藥量較高。3.鹽酸川芎嗪微球體外釋放規(guī)律分別精密量取未經(jīng)修飾鹽酸川芎嗪微球混懸液、經(jīng)殼寡糖修飾后微球混懸液及等質(zhì)量的鹽酸川芎嗪注射劑各lOml,置于預(yù)先處理好的透析袋中,密封后置于磷酸鹽緩沖溶液(pH7.4)中,于恒溫水浴攪拌,隨著藥物逐漸被釋放出來(lái),每隔一段時(shí)間取緩釋液,補(bǔ)液。鹽酸川芎嗪注射劑在釋放介質(zhì)中釋放較快,而未經(jīng)修飾的鹽酸川芎嗪微球在釋放前期存在一定的突釋現(xiàn)象,經(jīng)修飾后的微球突釋效應(yīng)減小,24h達(dá)到平穩(wěn)狀態(tài),累積釋放量78.23%,顯示出一定的緩釋特性。4.體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)選用人乳腺癌MCF-7細(xì)胞、人肺腺癌A549細(xì)胞,用CCK-8法考察鹽酸川芎嗪微球的細(xì)胞毒性。通過(guò)前期實(shí)驗(yàn),初步篩選出最佳鹽酸川芎嗪濃度為0.054mg/ml,作用時(shí)間為24h。HPLC檢測(cè)兩種細(xì)胞內(nèi)鹽酸川芎嗪濃度,由高到低依次為MCF-7A549細(xì)胞,具體分別為46.77μg/ml、30.38μg/ml。激光共聚焦觀測(cè)經(jīng)殼寡糖修飾的微球處理的細(xì)胞較未經(jīng)殼寡糖修飾的微球組、川芎嗪對(duì)照組有明顯熒光,MCF-7細(xì)胞較A549細(xì)胞熒光強(qiáng)度更大。結(jié)論:1.采用復(fù)乳-溶劑揮發(fā)法制備殼寡糖修飾的鹽酸川芎嗪微球,工藝簡(jiǎn)單易行,條件溫和,包封率、載藥量均較高、結(jié)構(gòu)穩(wěn)定,可在室溫下能夠長(zhǎng)期保存;2.通過(guò)掃描電鏡觀察微球表面形態(tài),光滑圓整、尺寸可控;平均粒徑為180.5μm,載藥量達(dá)19.05%,包封率為68.16%。3.通過(guò)對(duì)微球修飾前后的體外藥物釋放行為進(jìn)行考察,修飾后的微球由于外層包裹殼寡糖,藥物須經(jīng)殼寡糖緩慢降解后釋放,故突釋效應(yīng)有所減小;4.由于殼寡糖分子量小,更容易進(jìn)入細(xì)胞,在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)經(jīng)殼寡糖修飾后的微球?qū)δ[瘤細(xì)胞有更強(qiáng)的靶向性,為川芎嗪靶向制劑的開發(fā)及應(yīng)用提供參考。
【圖文】：

（ａ）未經(jīng)修飾微球邐（ｂ）殼寡糖修飾微球逡逑圖２－２鹽酸川芎嗪微球粒徑分布圖逡逑圖邋２－２邋Ｐａｒｔｉｃｌｅ邋ｓｉｚｅ邋ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｉｎｅ邋ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ邋ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ逡逑２．邋２鹽酸川芎嗪含量測(cè)定方法逡逑取微球粉末約２５ｍｇ，精密稱定，加入２ｍｌ乙腈使其充分溶解，再加入適量逡逑甲醇超聲３０ｍｉｎ后以甲醇定容至５０ｍｌ，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液用ＨＰＬＣ進(jìn)行測(cè)逡逑定。載藥量＝微球中藥物質(zhì)量／微球質(zhì)量Ｘ邋１００％，包封率＝微球中藥物質(zhì)量／逡逑投入的總藥量ＸＩ００％。逡逑２．邋２．邋１色譜條件逡逑色譜柱：ＳｅｐａｘＧＰ－Ｃｉ８邋（４．６ｘ２５０ｍｍ，５ｐｍ）；流動(dòng)相：Ｖ（水）：Ｖ（甲醇）＝逡逑５２邋：邋４８；檢測(cè)波長(zhǎng)：２９０ｍｍ；流速為ｌｍｌ／ｍｉｎ；柱溫：３５°Ｃ；進(jìn)樣量：１００。逡逑１８逡逑

邐５９０逡逑Ｗａｗｓｎｔｒｔ＾Ｔ＊邋（？Ｈｌ＞逡逑圖２－１邋ＰＬＧＡ邋（Ａ），殼寡糖修飾微球（Ｂ），殼寡糖（Ｃ）的紅外光譜圖逡逑圖邋２－１邋Ｔｈｅ邋Ｉｎｆｒａｒｅｄ邋ｓｐｅｃｔｒａ邋ｏｆ邋ＰＬＧＡ邋（Ａ），邋ＣＯ邋Ｓ－ｍｏｄｉｆｉｅｄ邋ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ邋（Ｂ），逡逑ＣＯＳ邋（Ｃ）逡逑２．邋１．２．邋２粒徑分布和Ｚｅｔａ電位檢測(cè)逡逑取制備的凍干載藥微球，加純化水分散，，稀釋至適宜濃度，用激光分析儀測(cè)逡逑定其粒度分布及Ｚｅｔａ電位。修飾前的平均粒徑為２１５．３４ｎｍ，Ｚｅｔａ電位一１２．８ｍＶ，逡逑修飾后的微球平均粒徑有所增大，由２１５．３啤增大到２６８．５ｐｍ，Ｚｅｔａ電位＋９．２ｍＶ。逡逑也可定性看出殼寡糖成功修飾在ＰＬＧＡ載藥微球表面。逡逑１５邐邐邐邐邐邐邐邋１Ｓ｜邋邐邐ｗ逡逑Ｉｓ邋…：邐ｄ．＼．．邐：１ｓ邋……：邐……：逡逑ａｉ邐１邐？邐１Ｍ邐擺邐＿０邋Ｍ邐，邐，０邐？邐１００６邐１��？ａ逡逑ａｉ，ｉｄＵｒａ）逡逑（ａ）未經(jīng)修飾微球邐（ｂ）殼寡糖修飾微球逡逑圖２－２鹽酸川芎嗪微球粒徑分布圖逡逑圖邋２－２邋Ｐａｒｔｉｃｌｅ邋ｓｉｚｅ邋ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｉｎｅ邋ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ邋ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ逡逑２．邋２鹽酸川芎嗪含量測(cè)定方法逡逑取微球粉末約２５ｍｇ
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R283.6

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 周苗苗;張霞;李治芳;王文蘋;;不同混合溶劑對(duì)丹參酮Ⅱ_A-PLGA微球的影響[J];中成藥;2019年01期

2 譚紅香;葉建東;董浩;;可緩釋藥物的明膠/磷酸鈣骨水泥復(fù)合組織工程支架材料[J];復(fù)合材料學(xué)報(bào);2008年06期

3 華蘇;許向陽(yáng);周建平;;復(fù)乳法制備蛋白質(zhì)藥物PLGA微球的影響因素[J];藥學(xué)進(jìn)展;2009年10期

4 高銘蔚;田園園;盧邁新;孫成飛;董浚鍵;黎宗強(qiáng);葉星;;羅非魚無(wú)乳鏈球菌PLGA微球口服疫苗免疫效果的研究[J];免疫學(xué)雜志;2015年02期

5 蔣朝軍;楊清敏;胡筱菲;王麗靜;王晶翼;;新型利培酮PLGA微球的制備及體外釋放研究[J];中國(guó)藥學(xué)雜志;2011年02期

6 孫佳麗;林瑩;蔣國(guó)強(qiáng);昝佳;丁富新;;載有溶菌酶微球的凝膠埋植劑的釋藥特性[J];清華大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2008年03期

7 李乾兵,王國(guó)平,顏輝,周書林,陳文魁;粉塵螨(抗原)PLGA微球?qū)χ旅粜∈蠓尾孔儜?yīng)性炎癥的影響[J];皖南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2004年03期

8 趙昊;任甜甜;陳唯娟;洪曉蕓;袁偉恩;;包裹于PLGA微球中用于蛋白控釋的多糖納米顆粒[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2010年01期

9 顏輝,陳玲,陳文魁;粉塵螨(浸液)抗原PLGA微球的制備及其性質(zhì)的研究[J];皖南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2003年02期

10 孫佳麗;林瑩;蔣國(guó)強(qiáng);昝佳;丁富新;;載有溶菌酶微球的凝膠埋植劑的釋藥特性[J];清華大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)網(wǎng)絡(luò).預(yù)覽;2008年03期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 謝明;紫杉醇PLGA微球瘤內(nèi)注射治療喉癌裸鼠移植瘤的實(shí)驗(yàn)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

2 鄭宇豪;可局部注射的梯度降解的微球/水凝膠復(fù)合體系在骨肉瘤聯(lián)合化療中的應(yīng)用[D];吉林大學(xué);2017年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 吳鑠s

本文編號(hào)：2591222