【摘要】：目的:采用UHPLC-LTQ-Orbitrap MS~n法對(duì)龍膽酒制前后飲片中化學(xué)成分進(jìn)行定性研究,確定生龍膽和酒龍膽成分組成的差異;采用HPLC法對(duì)龍膽酒制前后進(jìn)行環(huán)烯醚萜類成分的含量測(cè)定,明確二者的異同;采用HPLC法對(duì)龍膽酒制前后在大鼠體內(nèi)龍膽苦苷的藥代動(dòng)力學(xué)和組織分布進(jìn)行含量的對(duì)比。通過以上的研究,從化學(xué)成分的角度闡明龍膽酒制的機(jī)理,進(jìn)而為龍膽酒制工藝的優(yōu)化、酒制飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立,以及臨床用藥提供參考。材料與方法:1.采用UHPLC-LTQ-Orbitrap MS~n法對(duì)生龍膽和酒龍膽中化學(xué)成分進(jìn)行定性分析,并結(jié)合主成分分析(PCA)和偏最小二乘判別分析(PLS-DA),明確炮制對(duì)其成分組成的影響。2.以液質(zhì)聯(lián)用數(shù)據(jù)中VIP值(閾值)和總離子流圖峰面積較大的3個(gè)成分為含量測(cè)定指標(biāo),即龍膽苦苷、獐牙菜苦苷和獐牙菜苷(3個(gè)化合物均為環(huán)烯醚萜類),采用HPLC法對(duì)22個(gè)地區(qū)生龍膽和相應(yīng)自制酒龍膽進(jìn)行含量測(cè)定,考察酒制前后龍膽中環(huán)烯醚萜類成分的含量差異。3.以SPF級(jí)別的SD大鼠為實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象,將大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、生龍膽組、酒龍膽組。給藥組分別灌胃給予一定劑量的生龍膽和酒龍膽提取液,對(duì)照組給予等量生理鹽水。在給藥后0.083,0.016,0.25,0.5,1,1.5,2,3,4,6,8,10,12 h時(shí),進(jìn)行大鼠眼眶取血,樣品處理后,采用HPLC法測(cè)定龍膽苦苷的血藥濃度,經(jīng)DAS 3.0程序處理數(shù)據(jù),比較龍膽苦苷藥動(dòng)學(xué)參數(shù),繪制藥-時(shí)曲線,闡明酒制是否能促進(jìn)指標(biāo)成分(龍膽苦苷)的吸收,提高其生物利用度。4.將SD大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、生龍膽組、酒龍膽組。生龍膽組和酒龍膽組灌胃給予一定劑量的生龍膽和酒龍膽的提取液,采用HPLC法測(cè)定龍膽苦苷在不同時(shí)間、不同組織(心、肝、脾、肺、腎、胃、大腸、小腸)中入血的濃度,計(jì)算不同時(shí)間點(diǎn)的分布經(jīng)時(shí)變化,獲得生龍膽和酒龍膽作用靶器官的信息。結(jié)果:1.實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,在生龍膽中確定出44個(gè)化學(xué)成分,在酒龍膽中確定出42個(gè)化學(xué)成分,其中存在34個(gè)共有化學(xué)成分,但有10個(gè)成分只存在于生龍膽,有8個(gè)成分只存在于酒龍膽。由于生龍膽和酒龍膽取樣量相同,通過比較其共有化學(xué)成分的峰面積,可知龍膽酒制后含量變化情況。生龍膽峰面積與酒龍膽峰面積比值(生/酒)小于0.8時(shí),表明酒制后使其含量增加,而峰面積比值大于1.2時(shí),則表明酒制后使其含量降低。龍膽經(jīng)過酒制后,7個(gè)化學(xué)成分峰面積顯著增加,4個(gè)化學(xué)成分顯著降低。在實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)篩選出20種有顯著差異的成分(VIP值5),其中正離子模式下發(fā)現(xiàn)6種,分別是depressoside、獐牙菜苦苷、龍膽苷、primeverosyl-1-decussatin、6′-O-β-D-葡萄糖基龍膽苦苷和齊墩果酸;在負(fù)離子模式下發(fā)現(xiàn)17種,分別是龍膽苦苷、depressoside、rindoside、8-O-glucosyl bellidifolin、獐牙菜苦苷、isoscoparine、6′-O-β-D-葡萄糖基龍膽苦苷、馬錢苷酸、1,3,4-三羥基-8-β-D-葡萄糖苷-5,6,7,8-四氫酮、eustomoside、glucosyl-8-swertianin、2′′-O-β-D-葡萄糖基異牡荊素、isoscoparine-7-O-β-D-glucosyle、獐牙菜苷、芒果苷、1-O-D-glucopyransylampexine、1-羥基-2,3,4,7-四甲氧基酮。通過對(duì)這些差異化合物的分析發(fā)現(xiàn),可知酒制可使龍膽的化學(xué)成分發(fā)生改變。2.通過測(cè)定22個(gè)不同地區(qū)龍膽酒制前后龍膽苦苷、獐牙菜苦苷和獐牙菜苷的含量,發(fā)現(xiàn)酒制導(dǎo)致龍膽苦苷的含量有所增加,使獐牙菜苷和獐牙菜苦苷的含量發(fā)生不一致的變化。3.通過對(duì)龍膽飲片酒制前后藥代動(dòng)力學(xué)研究,可以看出,酒制后龍膽苦苷達(dá)峰時(shí)間提前,達(dá)峰濃度下降。4.通過對(duì)龍膽飲片酒制前后組織分布研究,由數(shù)據(jù)可知,酒制后龍膽苦苷在上焦臟器(心、肝、肺)中分布增加。結(jié)論:1.明確了生龍膽和酒龍膽的差異性成分。2.明確了龍膽經(jīng)過酒制后,可使龍膽苦苷升高,為酒龍膽的炮制機(jī)理研究奠定基礎(chǔ)。3.明確了龍膽經(jīng)過酒制后,可促進(jìn)龍膽苦苷的作用速度。4.明確了龍膽經(jīng)過酒制后,可使龍膽苦苷在上焦臟器(心、肝、肺)分布增加,推測(cè)其為龍膽酒制升提的原因之一。
【圖文】：

- 13 -B3圖 1-1. 對(duì)照品、生龍膽和酒龍膽總離子流圖A：正離子模式；B：負(fù)離子模式；1：對(duì)照品；2：生龍膽；3：酒龍膽2 數(shù)據(jù)分析2.1 化學(xué)物的分析與鑒定將所得數(shù)據(jù)中精確的分子量，，在可能的元素組成范圍內(nèi)推斷其分子式。先查閱文獻(xiàn)

生龍膽和酒龍膽飲片中化合物的結(jié)構(gòu)
【學(xué)位授予單位】：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R283

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5 詹雅Z

本文編號(hào)：2591188