【摘要】：目的:人參被稱(chēng)為“草藥之王”,具有悠久的藥用歷史。人參含有多種藥理活性成分如:人參皂苷、多糖、氨基酸、蛋白質(zhì)等。其中,人參皂苷是主要的藥理活性成分,是最被廣泛使用的。本文利用HPLC-MS技術(shù)中的多反映檢測(cè)模式(MRM)對(duì)其進(jìn)行檢測(cè),分析多孔碳材料對(duì)人參粗提物中人參皂苷的提取效率。已知人參產(chǎn)地繁多,不同產(chǎn)地的人參質(zhì)量不一,質(zhì)量參差不齊,目前沒(méi)有較優(yōu)良的評(píng)價(jià)手段,本文通過(guò)已知建立的HPLC-MS方法,利用HPLC-MS方法的多反映檢測(cè)模式(MRM)結(jié)合多元統(tǒng)計(jì)方法篩選皂苷,并以皂苷含量、種類(lèi)差異為標(biāo)準(zhǔn),區(qū)分人參生長(zhǎng)區(qū)域及生長(zhǎng)年限進(jìn)而來(lái)評(píng)價(jià)人參質(zhì)量的優(yōu)劣。方法:取25 mg MWCNTs加入到體積為5 ml濃度為200 mg/mL的人參粗提物水溶液中,輕輕振搖2s并以8000 rpm離心2分鐘后,MWCNT沉淀用以解吸人參皂苷。將上清液通過(guò)0.22μm水過(guò)濾器,過(guò)濾后的上清液用去離子水補(bǔ)足至10mL容量瓶中。將補(bǔ)足10ml之后的上清液用HPLC-QqQ/MS進(jìn)行檢測(cè),檢測(cè)8種人參皂苷分別為Re、Rg1、Rb1、Rb2、Rc、Rd、Rf、Ro。MWCNT沉淀加入脫附溶劑,輕輕離心5秒鐘,以8000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘,重復(fù)3次,合并上清液。將上清液用0.22μm的濾膜過(guò)濾,并如前一步驟測(cè)量8種人參皂苷的含量。并同時(shí)利用苯酚硫酸法測(cè)定MWCNT提取皂苷前后的人參粗提物中多糖的含量,從而確定多壁碳納米管提取人參皂苷的效率。人參經(jīng)洗滌后干燥至恒重,將干燥至恒重的人參進(jìn)行粉碎,將粉末過(guò)40目藥典規(guī)定的分樣篩,于4℃干燥環(huán)境下保存。取1g制備的人參粉和50ml乙醚,加入索氏提取器中于40℃下回流2 h,目的是為了去除人參粉末中溶于乙醚的脂溶性成分;棄去乙醚溶液,然后加入50ml甲醇并在60℃下回流2小時(shí)。回流結(jié)束后冷卻至室溫,將提取液于40℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干后,用10ml水溶解提取物,再用30ml水飽和的正丁醇溶液連續(xù)萃取3次,以除去強(qiáng)極性成分如糖;合并提取物,將合并的提取物在40℃下渦旋干燥,溶于甲醇并稀釋至10ml;過(guò)0.22μm石英纖維濾膜后,進(jìn)行HPLC-MS分析。將獲得的數(shù)據(jù)與多變量統(tǒng)計(jì)分析方法結(jié)合以篩選皂苷并通過(guò)分析人參皂苷的含量及種類(lèi)來(lái)確定人參的產(chǎn)地來(lái)源。結(jié)果:MWCNTs可以吸附人參粗提物中大部分種類(lèi)的人參皂苷,對(duì)糖的吸附作用不明顯,表明MWCNTs可以從人參粗提物中分離糖和人參皂苷。MWCNTs對(duì)8種主要人參皂苷都有良好的吸附容量,并可以短時(shí)間內(nèi)達(dá)到吸附和脫附平衡,其中原人參三醇類(lèi)和齊墩果酸皂苷Ro的吸附容量略高于原始人參二醇型皂苷。水飽和正丁醇溶液可以快速的洗脫MWCNTs吸附的人參皂苷并且人參皂苷回收率隨著洗脫溶劑體積的增加而增加當(dāng)洗脫溶劑體積在20 mL以上時(shí),8種人參皂苷的回收率均高于85%。五種不同產(chǎn)地的人參中人參皂苷類(lèi)型存在差異,相似產(chǎn)區(qū)人參皂苷的種類(lèi)和含量相似。通過(guò)三重四級(jí)桿質(zhì)譜中的多級(jí)串聯(lián)模式,鑒定了41種人參皂苷,并且與已知標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)比,比較人參皂苷的極性差異。利用多變量統(tǒng)計(jì)分析技術(shù)和人參皂苷提取物通過(guò)HPLC-MS檢測(cè)的全掃描數(shù)據(jù),建立了可以區(qū)分綏化市,遜克縣,虎林市,長(zhǎng)白縣和汪清縣共五個(gè)產(chǎn)區(qū)的人參模型。并篩選出生產(chǎn)區(qū)域與生產(chǎn)年限之間的差異特征組件。結(jié)論:使用多孔碳材料從人參粗提物中快速提取和分離人參皂苷,與傳統(tǒng)幾種方法相比可節(jié)省溶劑,節(jié)約時(shí)間,操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn),與大孔樹(shù)脂分離方法相比,MWCNTs具有相同的分離效果和更快的分離速度。5個(gè)相似及不同地區(qū)的人參中人參皂苷的種類(lèi)和含量各不相同,由此判斷人參質(zhì)量具有差異性,其中產(chǎn)地對(duì)其質(zhì)量的影響較大,生長(zhǎng)年限對(duì)其也有一定影響,但影響力不大。
【圖文】：

圖 1 原人參二醇及三醇型皂苷結(jié)構(gòu)式人參皂苷的改性主要是通過(guò)去糖基化反應(yīng)和形成雙鍵（δ20（21）或δ20（22）即在C20位進(jìn)行脫羥基反應(yīng)。圖（1）所示分別為原人參二醇、三醇型皂苷的化學(xué)結(jié)

粗提物是由 70%甲醇水溶液超聲提取的，該人參提取物中。從圖 7(A)中可以看出，可以被 HPLC-MS 檢測(cè)的極性較強(qiáng)n 以內(nèi)顯示出峰，表示糖在 2min 鐘內(nèi)從 C18 色譜柱中流出性較弱，在 2 min 之后依次從色譜柱中被洗脫。當(dāng) MWCN
【學(xué)位授予單位】：長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：TQ464.3;R284

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張偉云;劉發(fā)貴;鄭毅男;;黑參加工過(guò)程中3種稀有人參皂苷的含量變化[J];時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥;2019年02期

2 劉博;俞婷;陳乃宏;;人參皂苷抗炎分子機(jī)制的研究進(jìn)展[J];神經(jīng)藥理學(xué)報(bào);2018年06期

3 吳曉民;趙丹;朱艷萍;王艷紅;;人參皂苷分析測(cè)定方法的研究進(jìn)展[J];上海中醫(yī)藥雜志;2018年05期

4 鄧碧華;朱俊;馬鶴毓;徐海;盧宇;;高效液相色譜法測(cè)定人參皂苷復(fù)乳中人參皂苷含量[J];中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志;2018年03期

5 方偉;;人參皂苷干預(yù)糖尿病微血管并發(fā)癥研究進(jìn)展[J];人參研究;2018年03期

6 李泰平;人參皂苷藥理活性的研究進(jìn)展[J];生物學(xué)教學(xué);2003年04期

7 崔杰;何正有;李維;劉婧;聶敏奎;;人參皂苷粉、銀杏葉提取物對(duì)雞胚絨毛尿囊膜血管新生的作用[J];成都大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2016年04期

8 魯文慧;楊辛欣;劉會(huì);曹麗珠;張嘯環(huán);;不同蒸制時(shí)間對(duì)紅參中人參皂苷及農(nóng)藥殘留的影響[J];人參研究;2016年04期

9 郭楓;劉煥煥;邱智東;王偉楠;;稀有人參皂苷的酶轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)進(jìn)展;2017年04期

10 丁苗苗;楊凱倫;王東亮;汝文文;黃瑞;劉志東;李楠;張兵;;超微粉碎對(duì)西洋參中人參皂苷體外溶出的影響研究[J];天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2016年05期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 趙雪淞;王姣;宋王芳;;毀滅柱孢菌對(duì)人參皂苷的酶促降解與其致病性的關(guān)系[A];中國(guó)第八屆植物化感作用學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2017年

2 嚴(yán)欽;周偉;李幸慰;馮美卿;周s，

本文編號(hào)：2589171