發(fā)布時(shí)間：2020-03-17 13:17

【摘要】：目的:通過(guò)HPLC檢測(cè)葛根不同煎煮時(shí)間對(duì)升麻葛根湯中葛根素含量的影響;通過(guò)致熱法、致急性炎癥法、致痛法、致咳法復(fù)制感冒相關(guān)動(dòng)物模型,觀察葛根不同煎煮時(shí)間對(duì)升麻葛根湯解熱作用、抗炎作用、鎮(zhèn)痛作用、止咳作用、免疫功能的影響。探討葛根在升麻葛根湯中最佳煎煮時(shí)間,為葛根特殊煎煮方法的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:采用HPLC檢測(cè)葛根不同煎煮時(shí)間對(duì)升麻葛根湯中葛根素含量的影響,色譜條件:Agilent 5 TC-C_(18)液相色譜柱(250×4.6 mm,5μm),流動(dòng)相:甲醇-水(25:75),柱溫30℃,流速1 mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)250 nm,進(jìn)樣量10μL。采用15%酵母混懸液致熱法、蛋清致急性炎癥法、熱板致痛法、25%氨水致咳法復(fù)制感冒相關(guān)動(dòng)物模型,觀察感冒相關(guān)模型動(dòng)物體溫、足趾腫脹率、痛閾值、咳嗽潛伏期、咳嗽次數(shù)、脾臟系數(shù)、胸腺系數(shù)和免疫因子(IL-6)含量。結(jié)果:HPLC檢測(cè),葛根素在0.02~0.12mg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系(r~2=0.9996);1號(hào)湯劑供試品溶液中葛根素含量是30.0 mg/g;2號(hào)湯劑供試品溶液中葛根素含量是34.8 mg/g;3號(hào)湯劑供試品溶液中葛根素含量是38.4 mg/g;4號(hào)湯劑供試品溶液中葛根素含量是43.6mg/g;5號(hào)湯劑供試品溶液中葛根素含量是42.4mg/g;6號(hào)湯劑供試品溶液中葛根素含量是41.2mg/g;7號(hào)湯劑的供試品溶液中葛根素的含量是39.6mg/g;8號(hào)湯劑的供試品溶液中葛根素的含量是36.4 mg/g;9號(hào)湯劑的供試品溶液中葛根素的含量是36.0mg/g。體溫檢測(cè),與空白組比較,模型組注射15%酵母混懸液后1h、2.5h、3-8h時(shí),體溫明顯升高(P0.05或P0.01);與模型組比較,陽(yáng)性對(duì)照組1、陽(yáng)性對(duì)照組2在給藥后1h、2.5h、3-8h時(shí),體溫明顯降低(P0.01);葛根煎煮30min、35min、40min組在給藥后2.5h、3-8h時(shí),體溫明顯降低(P0.05或P0.01);葛根煎煮25min組在給藥后4-7h時(shí),體溫明顯降低(P0.05)。足趾腫脹率檢測(cè),與空白組比較,模型組在注射蛋清液后0.5h、1-4h時(shí),足趾腫脹率明顯升高(P0.01);與模型組比較,陽(yáng)性對(duì)照組1、陽(yáng)性對(duì)照組2、葛根煎煮30min、35min、40min、45min、50min、55min、60min組在給藥后0.5h、1-3h時(shí),足趾腫脹率明顯降低(P0.05或P0.01或P0.01);葛根煎煮20min、25min組在給藥后0.5h、1-2h時(shí),足趾腫脹率明顯降低(P0.05)。痛閾值檢測(cè),與空白組比較,陽(yáng)性對(duì)照組1、陽(yáng)性對(duì)照組2、葛根煎煮30min、35min、40min組痛閾值明顯升高(P0.05)�？人詽摲�、咳嗽次數(shù)檢測(cè),與空白組比較,陽(yáng)性對(duì)照組1、陽(yáng)性對(duì)照組2、葛根煎煮30min、35min、40min、45min組咳嗽潛伏期明顯升高(P0.05或P0.01);陽(yáng)性對(duì)照組1、陽(yáng)性對(duì)照組2、葛根煎煮35min、40min組咳嗽次數(shù)明顯降低(P0.05)。脾臟、胸腺指數(shù)檢測(cè),與空白組比較,陽(yáng)性對(duì)照組1、陽(yáng)性對(duì)照組2、葛根煎煮30min、35min、40min、45min、50min、55min組脾臟系數(shù)明顯升高(P0.05或P0.01);陽(yáng)性對(duì)照組1、陽(yáng)性對(duì)照組2、葛根煎煮30min、35min、40min、45min、50min組胸腺系數(shù)明顯升高(P0.05或P0.01)。酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測(cè),與空白組比較,陽(yáng)性對(duì)照組1、陽(yáng)性對(duì)照組2、葛根煎煮25min、30min、35min、40min、45min組IL-6含量明顯升高(P0.05或P0.01或P0.001)。結(jié)論:煎煮過(guò)程中,當(dāng)葛根煎煮35min時(shí)升麻葛根湯中葛根素含量相對(duì)最高,對(duì)感冒相關(guān)模型動(dòng)物體溫、足趾腫脹率、痛閾值、咳嗽潛伏期、咳嗽次數(shù)、免疫功能均能產(chǎn)生明顯改善作用。葛根在升麻葛根湯中使用“先煎”的特殊煎煮方法,可能起到提高臨床療效的作用。
【圖文】：

線性關(guān)系圖

葛根不同煎煮時(shí)間對(duì)升麻葛根湯免疫功能的影響方法：在“2.2.2.5”項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)結(jié)束 2h 后，將各組小鼠取血后處死，分及胸腺，酶聯(lián)免疫法（ELISA）檢測(cè)血清中免疫因子（IL-6）含量、胸腺系數(shù)。方法 SPSS 19.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x±s ）表較采用單因素方差分析。以 P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。果不同煎煮時(shí)間對(duì)升麻葛根湯中葛根素含量的影響結(jié)果定色譜條件實(shí)驗(yàn)結(jié)果定的色譜條件下，葛根素色譜峰與相鄰色譜峰的分離度、理論塔板要求，分離度大于 1.5，理論塔板數(shù)大于 3000。見圖 2-3。
【學(xué)位授予單位】：長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5;R284

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本文編號(hào)：2587534