【摘要】：現(xiàn)行版《中國藥典》收載的葛根類藥材包括葛根和粉葛,前者為豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi的干燥根,后者為同屬植物甘葛藤Pueraria thomsonii Benth的干燥根。四川葛根類藥材資源豐富,除上述藥典收載品種外,尚有以野生或栽培的峨眉葛Pueraria omeiensis Wang et Tang做粉葛使用,并有商品藥材,其在四川分布的資源量?jī)H次于野葛和粉葛。本文在文獻(xiàn)研究、藥材產(chǎn)地及市場(chǎng)調(diào)研的基礎(chǔ)上,運(yùn)用經(jīng)典的分類及鑒別方法,結(jié)合現(xiàn)代儀器分析技術(shù)等,通過對(duì)川產(chǎn)葛根類藥材的系統(tǒng)品質(zhì)評(píng)價(jià)研究,弄清其主流品種及質(zhì)量狀況。研究結(jié)果如下:1采用常規(guī)生藥鑒定方法,結(jié)合顯微化學(xué)鑒別法,對(duì)葛根、粉葛、峨眉葛進(jìn)行了較為系統(tǒng)的形態(tài)組織學(xué)對(duì)比研究,找出了三個(gè)不同品種在其原植物、藥材性狀及顯微上的主要區(qū)別,明確了多糖類、黃酮類成分在組織中的分布。為其品種鑒定提供了參考依據(jù)。1.1原植物形態(tài)上,主要從葉子分裂情況,被毛情況,花序長(zhǎng)度和花冠顏色及花萼顏色上存在差異等方面進(jìn)行鑒別。1.2藥材性狀上,主要從表面顏色、藥材粉性的強(qiáng)弱、斷面環(huán)狀紋理以及氣味等方面進(jìn)行鑒別。1.3顯微特征上,根橫切面主要通過晶鞘纖維束數(shù)量,導(dǎo)管的大小及分布情況,纖維束數(shù)量,石細(xì)胞數(shù)量等方面進(jìn)行鑒別;粉末特征主要通過石細(xì)胞、分泌組織和晶纖維數(shù)量,淀粉粒的單粒和復(fù)粒情況等方面進(jìn)行鑒別。1.4顯微化學(xué),不同品種藥材中多糖類和黃酮類成分在皮層、韌皮部、木質(zhì)部均均有不同程度的著色,品種及野生、栽培的不同,其藥材中所含多糖類和黃酮類成分存在差異。2在現(xiàn)行版《中國藥典》葛根和粉葛薄層色譜鑒別方法的基礎(chǔ)上,增加了大豆苷和大豆苷元作為對(duì)照品,改善了葛根類藥材的薄層色譜鑒別方法,并進(jìn)行了不同葛根類藥材的薄層色譜對(duì)比分析,找出了之間的異同。為品種鑒別及化學(xué)成分分析提供了參考依據(jù)。不同品種樣品在三個(gè)對(duì)照品斑點(diǎn)位置都有對(duì)應(yīng)斑點(diǎn)出現(xiàn),斑點(diǎn)大小和熒光強(qiáng)度存在差異,表明不同品種中該三種成分含量存在差異;同一品種不同產(chǎn)地的樣品其色譜斑點(diǎn)斑點(diǎn)大小和熒光強(qiáng)度存在差異,表明不同產(chǎn)地樣品在成分含量上有差異。3建立了葛根類藥材近紅外光譜分析方法及UPLC指紋圖譜分析方法,并進(jìn)行了不同產(chǎn)地、不同品種葛根類藥材的對(duì)比分析。為三個(gè)品種的鑒別提供了參考依據(jù),并為葛根類藥材的質(zhì)量研究奠定了基礎(chǔ)。3.1不同品種、不同產(chǎn)地樣品在峰的強(qiáng)弱上存在差異。粉葛和峨眉葛近紅外原始圖譜、一階導(dǎo)數(shù)圖譜在850~950 nm波長(zhǎng)段吸收峰,葛根無吸收峰出現(xiàn),峨眉葛與粉葛近紅外原始圖譜波形一致;葛根一階導(dǎo)數(shù)圖譜在1000~1162nm波長(zhǎng)段吸收峰形與粉葛和峨眉葛不同,粉葛與峨眉葛沒有差異;葛根二階數(shù)處理圖譜在1180~1210nm、1695~1775nm、2095~2195nm波長(zhǎng)段峰形與粉葛、峨眉葛存在差異,粉葛與峨眉葛峰形沒有明顯差異。3.3確定了葛根UPLC指紋圖譜29個(gè)共有峰,粉葛UPLC指紋圖譜18個(gè)共有峰,峨眉葛UPLC指紋圖譜16個(gè)共有峰,并指認(rèn)了葛根7個(gè)峰,粉葛和峨眉葛6個(gè)峰。葛根、粉葛、峨眉葛三個(gè)品種相似度高,差異較小,可通過色譜中13、14、16、23、25、26、29號(hào)峰將葛根與粉葛和峨眉葛進(jìn)行鑒別;通過色譜中9和19號(hào)峰將粉葛與峨眉葛進(jìn)行鑒別。4參照現(xiàn)行版《中國藥典》檢查項(xiàng)要求,進(jìn)行了樣品水分、總灰分、酸不溶灰分及二氧化硫殘留量檢查,并進(jìn)行了重金屬及有害元素和農(nóng)藥殘留檢測(cè)。為弄清四川不同品種葛根類藥材的質(zhì)量狀況提供了參考依據(jù)。4.1各樣品水分和總灰分均符合2015年版《中國藥典》規(guī)定。不同品種樣品的酸不溶性灰分存在差異。4.2二氧化硫殘留量測(cè)定結(jié)果表明,幾種樣品中,無論是自采藥材還是商品藥材,未熏硫者的二氧化硫殘留量多在50 mg·kg~(-1)以內(nèi),但熏硫樣品的二氧化硫殘留量差異較大,有4批超過現(xiàn)行版藥典規(guī)定,占熏硫樣品的36%。4.3樣品中鉛、鎘、砷、銅、汞的殘留量檢測(cè)結(jié)果表明,部分樣品不符合標(biāo)準(zhǔn)。4.4農(nóng)藥殘留量測(cè)定結(jié)果表明,所測(cè)樣品全部符合標(biāo)準(zhǔn),均未檢出六六六(BHC)、滴滴涕(DDT)、五氯硝基苯(PCNB)殘留。5根據(jù)現(xiàn)行版《中國藥典》葛根、粉葛項(xiàng)下相關(guān)規(guī)定,以稀乙醇為溶劑,熱浸法測(cè)定了葛根樣品醇溶性浸出物;以70%乙醇為溶劑,熱浸法測(cè)定了粉葛和峨眉葛樣品醇溶性浸出物,對(duì)比分析不同品種、不同產(chǎn)地之間醇溶性浸出物含量的差異。為進(jìn)一步研究不同品種葛根類藥材質(zhì)量奠定了基礎(chǔ)。測(cè)定結(jié)果表明,不同品種、不同產(chǎn)地樣品醇溶性浸出物含量存在差異。樣品5、6、49、52含量小于10.0%,其余樣品均符合現(xiàn)行版藥典標(biāo)準(zhǔn)。6建立了葛根類藥材中總黃酮、多糖含量的紫外分光光度法(UV)測(cè)定方法,并進(jìn)行了樣品的測(cè)定,分析了不同品種、不同產(chǎn)地葛根類藥材在總黃酮及多糖類成分上的差異。為進(jìn)一步研究不同品種葛根類藥材質(zhì)量提供了參考依據(jù)。結(jié)果表明,不同產(chǎn)地、不同來源的葛根、粉葛藥材總黃酮和多糖含量存在差異。野生峨眉葛總黃酮含量比栽培峨眉葛高,栽培峨眉葛多糖高于野生峨眉葛,栽培峨眉葛總黃酮和多糖含量與粉葛接近。葛根總黃酮含量比粉葛和峨眉葛高,相差近20倍,而粉葛、峨眉葛多糖含量均比葛根高,相差近3倍。7建立了葛根類藥材中多成分含量的UPLC-DAD波長(zhǎng)切換測(cè)定方法,進(jìn)行了不同葛根類藥材樣品的含量測(cè)定,分析了不同品種、不同產(chǎn)地葛根類藥材的差異及各成分之間的相關(guān)性。為進(jìn)一步研究不同品種葛根類藥材質(zhì)量提供了參考依據(jù)。7.1測(cè)定結(jié)果表明,樣品中各成分含量差異較大。以現(xiàn)行版《中國藥典》中葛根、粉葛葛根素含量標(biāo)準(zhǔn),所測(cè)樣品中,粉葛樣品不同產(chǎn)地粉葛以1、2、4、8、9、10、13樣品含量較高,符合藥典規(guī)定,分別產(chǎn)自蒼溪、旺蒼、渠縣、江油、簡(jiǎn)陽、綿陽、射洪,其余自采產(chǎn)地粉葛不符合標(biāo)準(zhǔn),商品粉葛樣品45、47、50、51、55、58、61符合標(biāo)準(zhǔn),其中以樣品50、55、57、58含量較高,其余粉葛樣品含量不符合規(guī)定,熏硫粉葛與未熏硫粉葛含量沒有明顯差異;野生峨眉葛樣品21~27含量較高,高于0.3%,種植峨眉葛19、20、29、30、31樣品及商品峨眉葛49、52中葛根素含量與粉葛相近,樣品52含量高于0.3%,其余樣品含量低于0.3%;葛根樣品除38、39、70樣品含量低于2.4%外,其余葛根樣品含量均符合藥典要求,以32~37樣品葛根素含量較高,分別產(chǎn)自平武、青川、北川地區(qū),商品葛根以樣品65、67、68、69含量較高。7.2 DPS處理分析軟件分析3′-羥基葛根素、葛根素、大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素之間相關(guān)性結(jié)果表明,各成分之間在含量上存在明顯的相關(guān)性,在成分含量上相互影響。8首次采用TLC-自顯影技術(shù)和DPPH抗氧化活性清除率IC_(50)作為指標(biāo),進(jìn)行了不同葛根類藥材樣品抗氧化活性評(píng)測(cè),并分析了樣品IC_(50)與各成分含量之間的相關(guān)性。為進(jìn)一步研究和評(píng)價(jià)葛根類藥材質(zhì)量提供了參考依據(jù)。8.1 TLC-自顯影結(jié)果顯示,3′-羥基葛根素、葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木苷、染料木素六個(gè)成分斑點(diǎn)及斑點(diǎn)對(duì)應(yīng)的Rf值位置供試品斑點(diǎn)都具有DPPH清除活性,且其他的斑點(diǎn)位置也有微弱的DPPH清除活性。8.2抗氧化活性測(cè)定結(jié)果顯示,葛根以50%乙醇提溶液的抗氧化活性最強(qiáng),粉葛以70%乙醇溶液物抗氧化活性最強(qiáng)。各成分的抗氧化活性強(qiáng)弱順序?yàn)?3′-羥基葛根素染料木苷大豆苷染料木素大豆苷葛根素。8.3測(cè)定了71不同葛根類藥材樣品抗氧化。結(jié)果顯示,隨著3′-羥基葛根素、葛根素、大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素六個(gè)成分含量越高的樣品,IC_(50)越小,樣品抗氧化能力越強(qiáng),各個(gè)成分含量對(duì)樣品抗氧化能力的影響程度存在差異,葛根素和3′-羥基葛根素對(duì)樣品抗氧化能力的影響較為明顯。8.4應(yīng)用DPS處理分析軟件分析成分含量與IC_(50)之間的相關(guān)性。結(jié)果表明,六個(gè)成分含量與IC_(50)呈現(xiàn)出顯著的負(fù)相關(guān),葛根素與IC_(50)的相關(guān)性對(duì)最顯著,其次為3′-羥基葛根素。成分含量越高,抗氧化能力就越強(qiáng)。9采用綜合加權(quán)評(píng)分法和灰色關(guān)聯(lián)度分析法評(píng)價(jià)方法,并結(jié)合聚類分析方法,以樣品中總黃酮、多糖、3′-羥基葛根素、葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木苷、染料木素含量及IC_(50)0 9個(gè)指標(biāo)進(jìn)行了其質(zhì)量的綜合評(píng)價(jià)分析,客觀地反映了樣品質(zhì)量情況。為葛根類藥材的進(jìn)一步研究和質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了參考方法。結(jié)果表明,三種方法綜合分析結(jié)果基本一致。粉葛以8、9、50、51號(hào)樣品的質(zhì)量較好,8、9號(hào)樣品分別產(chǎn)自江油、簡(jiǎn)陽;峨眉葛以21~27號(hào)樣品的質(zhì)量較好,分別為產(chǎn)自蒼溪、旺蒼、峨眉山、雷波、金陽地區(qū)的野生峨眉葛;葛根以32~37、40(分別產(chǎn)自平武、青川、北川和蒼溪地區(qū))、65、67、68、69號(hào)樣品的質(zhì)量較好,41、42號(hào)樣品的質(zhì)量次之,分別產(chǎn)自旺蒼、青白江。
【圖文】：

葛根根橫切面簡(jiǎn)圖

粉葛根橫切面簡(jiǎn)圖
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R284.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2587503