本文關(guān)鍵詞：回轉(zhuǎn)模擬失重對(duì)靜脈內(nèi)皮細(xì)胞血管生成能力的影響及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制研究

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【摘要】：空間飛行可致人體多系統(tǒng)生理調(diào)節(jié)功能改變，產(chǎn)生一系列生理、病理方面的再適應(yīng)性變化。對(duì)心血管系統(tǒng)而言，航天失重早期最顯著的生理變化就是體液頭向分布和體循環(huán)流體靜壓差消失。血管內(nèi)皮細(xì)胞作為血管壁的襯里，具有活躍的分泌、代謝功能，并且對(duì)重力變化極為敏感，其功能紊亂與微重力下心血管去適應(yīng)性反應(yīng)密切相關(guān)。 隨著空間生物醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展，人們對(duì)微重力下血管內(nèi)皮細(xì)胞變化的研究也日趨深入。既往研究發(fā)現(xiàn)，模擬微重力可誘導(dǎo)血管內(nèi)皮的形態(tài)、超微結(jié)構(gòu)和細(xì)胞骨架等發(fā)生改變，對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)、凋亡和內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）/一氧化氮（NO）信號(hào)通路產(chǎn)生顯著影響，然而，有關(guān)失重/模擬失重對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞血管生成能力的影響始終未被系統(tǒng)探究。本研究利用2-D回轉(zhuǎn)器在地面模擬失重效應(yīng)，對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC-C）進(jìn)行體外培養(yǎng)，觀察其血管生成能力和遷移能力的變化情況，并分析探討可能涉及的分子調(diào)控機(jī)制，主要結(jié)果與發(fā)現(xiàn)如下： 1.24h模擬失重對(duì)HUVEC-C血管生成和遷移能力的影響與eNOS有關(guān)模擬失重24h，可以導(dǎo)致HUVEC-C血管生成能力和遷移能力增強(qiáng)；表現(xiàn)為：模擬失重組細(xì)胞在Matrigel膠上形成的類血管樣結(jié)構(gòu)較正常對(duì)照組結(jié)構(gòu)更完整，數(shù)目更多；“劃痕實(shí)驗(yàn)”所體現(xiàn)的細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力以及向劃痕區(qū)遷移能力在模擬失重組更強(qiáng)；而且模擬失重對(duì)HUVEC-C這兩種細(xì)胞功能的增強(qiáng)作用，可以被L-NAME所抑制，說明它們的發(fā)生機(jī)制與eNOS的表達(dá)和活化有關(guān)。 2.24h模擬失重促進(jìn)HUVEC-C中eNOS表達(dá)和活化模擬失重24h，HUVEC-C中eNOS mRNA和蛋白的表達(dá)量均增加；細(xì)胞免疫熒光觀察發(fā)現(xiàn)，，eNOS在HUVEC-C中的原位表達(dá)和分布增多；透射電鏡下檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，經(jīng)24h模擬失重作用，HUVEC-C胞膜上caveolae結(jié)構(gòu)的完整性遭到破壞，小窩數(shù)目和分布密度也明顯降低；說明24h模擬失重刺激確實(shí)導(dǎo)致HUVEC-C中eNOS的表達(dá)和活性增強(qiáng)。 3.24h模擬失重通過PI3K-Akt信號(hào)通路致HUVEC-C eNOS表達(dá)和活性改變模擬失重24h，HUVEC-C中eNOS、p-eNOS（Ser1177）的蛋白表達(dá)量與對(duì)照組相比均顯著增加，且這種增加可以被PI3K的特異性抑制劑LY294002所抑制，說明模擬失重可以使eNOS的磷酸化水平增高，從而使其酶的活性增強(qiáng)。另外，24h模擬失重后HUVEC-C中p-Akt蛋白的表達(dá)較對(duì)照組顯著增多，總Akt的表達(dá)量無明顯改變，并且p-Akt的表達(dá)上調(diào)也可以被LY294002所抑制，說明模擬失重能夠增強(qiáng)eNOS的上游信號(hào)分子Akt的磷酸化水平以及酶的活性。綜合分析提示：模擬失重所致HUVEC-C eNOS表達(dá)和活性增強(qiáng)的上游分子調(diào)控機(jī)制是PI3K-Akt途徑；那么進(jìn)一步結(jié)合細(xì)胞功能水平的研究，可以推論出，模擬失重誘導(dǎo)的HUVEC-C血管生成和遷移能力增強(qiáng)與PI3K-Akt-eNOS信號(hào)級(jí)聯(lián)有關(guān)。 總之，本研究發(fā)現(xiàn)24h模擬失重可以使HUVEC-C的血管生成能力和遷移能力增強(qiáng)，并且這種增強(qiáng)作用與模擬失重后HUVEC-C中eNOS的增量表達(dá)和活性升高密切相關(guān)。闡明了模擬失重下HUVEC-C這些功能變化發(fā)生的分子調(diào)控機(jī)制與PI3K-Akt-eNOS級(jí)聯(lián)通路活化相關(guān)。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果將有助于完善對(duì)失重致血管內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂的認(rèn)識(shí)，可能為失重/模擬失重所引起的血管重塑提供補(bǔ)充性解釋，為航天返回后立位耐力不良的防護(hù)提供新的研究思路和理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：模擬失重 內(nèi)皮細(xì)胞 血管生成 eNOS Akt 質(zhì)膜小窩
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R85
【目錄】：

• 縮略語表5-9
• 中文摘要9-12
• Abstract12-16
• 前言16-18
• 文獻(xiàn)回顧18-47
• 正文47-100
• 實(shí)驗(yàn)一 回轉(zhuǎn)模擬失重對(duì)靜脈內(nèi)皮細(xì)胞血管生成和遷移能力的影響47-66
• 1 引言47-48
• 2 材料48-51
• 3 方法51-58
• 4 結(jié)果58-61
• 5 討論61-66
• 實(shí)驗(yàn)二 回轉(zhuǎn)模擬失重對(duì)靜脈內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)皮型 NOS 表達(dá)的影響66-84
• 1 引言66-68
• 2 材料68-70
• 3 方法70-75
• 4 結(jié)果75-79
• 5 討論79-84
• 實(shí)驗(yàn)三 回轉(zhuǎn)模擬失重致靜脈內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)皮型 NOS 異常表達(dá)的調(diào)控機(jī)制研究84-100
• 1 引言84-85
• 2 材料85-87
• 3 方法87-92
• 4 結(jié)果92-97
• 5 討論97-100
• 小結(jié)100-102
• 參考文獻(xiàn)102-119
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果119-120
• 致謝120

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號(hào)：805408