本文關(guān)鍵詞：睡眠剝奪對大鼠心臟的影響及其機制研究

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【摘要】： 背景睡眠剝奪(Sleep Deprivation,SD)是部隊在緊急情況下,特別是戰(zhàn)爭、自然災(zāi)害、事故救援,甚至非典等特殊事件發(fā)生時的常見現(xiàn)象,是導(dǎo)致軍事人員疲勞衰竭、發(fā)生非戰(zhàn)斗減員的重要因素之一。在未來的高技術(shù)戰(zhàn)爭條件下,睡眠剝奪問題可能會更加突出。 目的觀察睡眠剝奪大鼠的一般狀態(tài)、應(yīng)激水平、心電圖變化、心肌炎癥反應(yīng),探索睡眠剝奪導(dǎo)致心律失常的機制,為進一步研究睡眠剝奪致心肌損傷藥物的分子機制和建立防治策略提供思路。 方法以雄性Sprague-Dawley大鼠為研究對象,隨機分成6組:正�；\養(yǎng)組,大平臺實驗組,睡眠剝奪1天組、3天組、5天組和7天組,用改良多平臺水環(huán)境睡眠剝奪法建立睡眠剝奪模型。 1.觀察睡眠剝奪大鼠的精神狀態(tài)、行為及反應(yīng)能力等一般狀況。 2.麻醉狀態(tài)下描記各組大鼠標準肢體Ⅱ?qū)?lián)心電圖。 3.監(jiān)測大鼠血清ACTH、TSH及CORT含量及心肌組織氧化應(yīng)激指標(GSH、GSH-Px、MDA、SOD)隨睡眠剝奪時間變化情況 4.用免疫組織化學(xué)法檢測致炎因子CRP、ICAM-1、VCAM-1、IL-1β、IL-6隨睡眠剝奪時間變化在大鼠心肌組織中的表達情況。 5.用熒光定量PCR法和Western-Blot蛋白免疫印跡法,從基因和蛋白兩個層面,同步監(jiān)測心律失常相關(guān)的電壓依賴性鉀離子通道K_v1.5、K_v2.1、K_v4.3隨睡眠剝奪時間變化在大鼠心肌組織中的表達情況。 結(jié)果 1.睡眠剝奪后,大鼠呈先興奮,后激惹,最后衰竭的變化規(guī)律。 2.睡眠剝奪后,大鼠的心電圖改變以心律失常為主。 3.睡眠剝奪后,ACTH、TSH及CORT水平隨睡眠剝奪時間的延長發(fā)生波動性變化,其含量先呈升高趨勢,并分別在剝奪睡眠的第3天、第5天、第5天時達到峰值,然后逐漸降低。 4.睡眠剝奪后,大鼠心肌組織的氧化應(yīng)激指標隨睡眠剝奪時間的延長,表現(xiàn)為GSH含量降低、GSH-Px活性減低,MDA含量增高,SOD活性降低。 5.炎癥反應(yīng)因子CRP、ICAM-1、VCAM-1、IL-6、IL-1β在正常時幾乎沒有表達,隨著睡眠剝奪時間的延長,其在大鼠心肌組織內(nèi)表達均呈上調(diào)趨勢。 6.隨著睡眠剝奪時間的延長,心律失常相關(guān)電壓依賴性鉀離子通道K_v1.5、K_v2.1、K_v4.3水平均呈整體上調(diào)趨勢。 結(jié)論 1.睡眠剝奪可致大鼠全身衰竭并發(fā)生心律失常,且隨睡眠剝奪時間的延長而加重。 2.睡眠剝奪可致心肌應(yīng)激性損傷,睡眠剝奪時間越長,其抗氧化能力越弱。 3.睡眠剝奪可致心肌發(fā)生炎癥反應(yīng),且隨睡眠剝奪時間的延長而加重。 4.睡眠剝奪后心肌組織電壓依賴性鉀離子通道K_v1.5、K_v2.1、K_v4.3水平下調(diào)可能是睡眠剝奪致心律失常發(fā)生的機制之一。
【關(guān)鍵詞】：睡眠剝奪 應(yīng)激 炎癥反應(yīng) 心律失常 電壓依賴性鉀離子通道
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍醫(yī)進修學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R82
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-14
• 第一部分 睡眠剝奪對大鼠心臟及其應(yīng)激水平的影響14-32
• 1.材料14-15
• 1.1 實驗動物14
• 1.2 主要試劑14
• 1.3 主要實驗儀器14-15
• 2.方法15-21
• 2.1 實驗分組15
• 2.2 睡眠剝奪模型的建立15-16
• 2.3 睡眠剝奪后大鼠心電圖監(jiān)測16
• 2.4 睡眠剝奪后大鼠血清學(xué)指標ACTH、TSH及CORT含量測定16
• 2.5 睡眠剝奪后大鼠心肌組織氧化應(yīng)激指標的測定16-21
• 2.5.1 標本的制備16
• 2.5.2 大鼠心肌組織GSH含量測定16-17
• 2.5.3 大鼠心肌組織中GSH-Px活力的測定17-18
• 2.5.4 大鼠心肌組織MDA含量測定18-19
• 2.5.5 大鼠心肌組織SOD活性的測定19-21
• 2.6 統(tǒng)計學(xué)方法21
• 3.結(jié)果21-27
• 3.1 睡眠剝奪后大鼠一般狀態(tài)21-22
• 3.2 睡眠剝奪后大鼠標準肢體Ⅱ?qū)?lián)心電圖監(jiān)測結(jié)果22-23
• 3.3 睡眠剝奪后大鼠血清學(xué)指標ACTH、TSH及CORT含量測定結(jié)果23-24
• 3.3.1 ACTH含量測定結(jié)果23
• 3.3.2 TSH含量測定結(jié)果23-24
• 3.3.3 CORT含量測定結(jié)果24
• 3.4 睡眠剝奪后大鼠心肌組織氧化應(yīng)激指標的測定結(jié)果24-27
• 3.4.1 GSH含量測定結(jié)果24-25
• 3.4.2 GSH-Px活性測定結(jié)果25
• 3.4.3 MDA含量測定結(jié)果25-26
• 3.4.4 SOD活性測定結(jié)果26-27
• 4.討論27-31
• 5.結(jié)論31-32
• 第二部分 睡眠剝奪與大鼠心臟炎癥反應(yīng)的關(guān)系32-50
• 1.材料32
• 1.1 實驗動物32
• 1.2 主要實驗試劑32
• 1.3 主要實驗儀器32
• 2.方法32-36
• 2.1 實驗分組32
• 2.2 睡眠剝奪模型的建立32
• 2.3 免疫組織化學(xué)方法觀察睡眠剝奪后大鼠心肌組織CRP、ICAM-1、VCAM-1、IL-1β、IL-6的蛋白表達情況32-36
• 2.3.1 免疫組織化學(xué)法的概念及基本原理32-33
• 2.3.2 標本的制備33
• 2.3.3 主要試劑配制33-35
• 2.3.4 免疫組化操作流程35-36
• 2.4 統(tǒng)計學(xué)方法36
• 3.結(jié)果36-43
• 3.1 結(jié)果分析方法36
• 3.2 睡眠剝奪后大鼠心肌組織CRP表達結(jié)果36-38
• 3.3 睡眠剝奪后大鼠心肌組織ICAM-1表達結(jié)果38-39
• 3.4 睡眠剝奪后大鼠心肌組織VCAM-1表達結(jié)果39-40
• 3.5 睡眠剝奪后大鼠心肌組織IL-6表達結(jié)果40-41
• 3.6 睡眠剝奪后大鼠心肌組織IL-1β表達結(jié)果41-43
• 4.討論43-48
• 4.1 睡眠剝奪對大鼠心肌組織CRP的影響43-44
• 4.2 睡眠剝奪對大鼠心肌組織ICAM-1、VCAM-1的影響44-46
• 4.3 睡眠剝奪對大鼠心肌組織IL-6、IL-1β的影響46-48
• 5 結(jié)論48-50
• 第三部分 睡眠剝奪致大鼠心律失常機制研究50-74
• 1.材料50
• 1.1 實驗動物50
• 1.2 主要試劑50
• 1.3 主要儀器設(shè)備50
• 2.方法50-60
• 2.1 實驗分組50
• 2.2 睡眠剝奪模型的建立50
• 2.3 熒光定量PCR法測定睡眠剝奪后大鼠心肌組織K_v1.5、K_v2.1、K_v4.3鉀離子通道基因mRNA表達50-54
• 2.3.1 標本的制備50-51
• 2.3.2 Real-time PCR基本原理51-52
• 2.3.3 熒光定量PCR相關(guān)參數(shù)的基本概念52
• 2.3.4 總RNA提取:52-53
• 2.3.5 cDNA合成:53
• 2.3.6 引物設(shè)計53-54
• 2.3.7 熒光定量PCR54
• 2.4 Western Blot蛋白免疫印跡法分析睡眠剝奪后大鼠心肌組織K_v1.5、K_v2.1、K_v4.3鉀離子通道蛋白的表達情況54-60
• 2.4.1 標本的制備54
• 2.4.2 Western Blot基本原理54-55
• 2.4.3 Western Blot主要溶液配制55-58
• 2.4.4 Western Blot主要操作步驟58-60
• 2.5 統(tǒng)計學(xué)方法60
• 3.結(jié)果60-67
• 3.1 熒光定量PCR法測定睡眠剝奪后大鼠心肌組織電壓依賴性鉀離子通道K_v1.5、K_v2.1、K_v4.3基因mRNA的表達結(jié)果60-64
• 3.1.1 大鼠心肌組織K_v1.5、K_v2.1、K_v4.3離子通道基因擴增結(jié)果60-61
• 3.1.2 熒光定量PCR結(jié)果計算公式61-62
• 3.1.3 大鼠心肌組織K_v1.5鉀離子通道基因mRNA的表達情況62
• 3.1.4 大鼠心肌組織K_v2.1鉀離子通道基因mRNA的表達情況62-63
• 3.1.5 大鼠心肌組織K_v4.3鉀離子通道基因mRNA的表達情況63-64
• 3.2 Western Blot法分析睡眠剝奪后大鼠心肌組織K_v1.5、K_v2.1、K_v4.3電壓依賴性鉀離子通道蛋白的表達情況64-67
• 3.2.1 大鼠心肌組織K_v1.5、K_v2.1、K_v4.3離子通道蛋白表達結(jié)果64
• 3.2.2 結(jié)果分析方法64-65
• 3.2.3 大鼠心肌組織K_v1.5鉀離子通道蛋白表達結(jié)果分析65
• 3.2.4 大鼠心肌組織K_v2.1鉀離子通道蛋白表達結(jié)果分析65-66
• 3.2.5 大鼠心肌組織K_v4.3鉀離子通道蛋白表達結(jié)果分析66-67
• 4.討論67-72
• 4.1 K_v1.5鉀離子道通69-70
• 4.2 K_v2.1鉀離子道通70-71
• 4.3 K_v4.3鉀離子道通71-72
• 5.結(jié)論72-74
• 參考文獻74-83
• 綜述——睡眠剝奪對心血管系統(tǒng)的影響及其研究進展83-92
• 1 睡眠剝奪的基本概念及分類83
• 2 睡眠剝奪的流行病學(xué)研究83-85
• 2.1 睡眠剝奪對機體功能的影響83-84
• 2.2 睡眠剝奪對心血管疾病影響的流行病學(xué)研究84
• 2.3 睡眠剝奪對其他系統(tǒng)及器官功能影響的流行病學(xué)研究84-85
• 3 睡眠剝奪對心血管系統(tǒng)的作用85-87
• 3.1 睡眠剝奪對應(yīng)激反應(yīng)及炎癥因子的影響85-86
• 3.2 睡眠剝奪對自主神經(jīng)調(diào)節(jié)功能以及激素水平和血液動力學(xué)的影響86-87
• 3.3 睡眠剝奪對心血管系統(tǒng)結(jié)構(gòu)及功能的影響87
• 4 睡眠剝奪在心血管領(lǐng)域研究的問題及展望87-92
• 附錄——縮略語詞匯表92-93
• 攻讀博士期間發(fā)表論文情況93-94
• 致謝94

【引證文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 彭貴海;黃琪;陳玲玲;張雨馨;王治校;譚利;;慢性睡眠剝奪對CAS大鼠冠狀動脈狹窄程度的影響[J];職業(yè)與健康;2014年07期

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本文編號：673400