發(fā)布時間：2017-08-01 19:25

  本文關(guān)鍵詞：模擬微重力對哺乳動物不同腦區(qū)神經(jīng)組織細胞的影響研究

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【摘要】：實驗?zāi)康?宇宙環(huán)境對航天員的身體健康帶來了一些不良影響。目前,關(guān)于空間環(huán)境,尤其是微重力對宇航員中樞神經(jīng)系統(tǒng)影響的研究層出不窮。但是少有將不同腦區(qū)的微重力效應(yīng)進行比較的研究進展。不同腦區(qū)在細胞組成、組織結(jié)構(gòu)、功能作用等方面都存在差異,所以不同腦區(qū)對微重力的響應(yīng)是否相同的問題也需要解決。研究地面模擬微重力效應(yīng)對不同腦區(qū)組織形態(tài)學和凋亡的影響,是研究微重力效應(yīng)的重要一環(huán)。我們希望通過本實驗為宇航員中樞神經(jīng)系統(tǒng)的保護提供一些數(shù)據(jù)。實驗方法:取SD(Sprague Dawley)乳鼠海馬、小腦、皮層腦區(qū),進行組織塊培養(yǎng)。培養(yǎng)7-10天后,隨機分為模擬微重力組和地面對照組。模擬微重力效應(yīng)由SM-31雙軸驅(qū)動式回轉(zhuǎn)器提供。兩組組織塊培養(yǎng)1天、7天、14天后,進行形態(tài)觀察實驗。利用倒置顯微鏡、相差顯微鏡、原位掃描電子顯微鏡觀察組織塊表面形貌和遷出細胞的變化;利用透射電子顯微鏡觀察組織塊內(nèi)部細胞骨架的變化;利用HE染色(hematoxylin-eosin staining,蘇木精-伊紅染色)觀察組織塊內(nèi)部細胞分布的情況。另取SD乳鼠海馬、小腦、皮層腦區(qū)的原代細胞進行培養(yǎng),同樣回轉(zhuǎn)1天、7天、14天以后,利用流式細胞儀檢測細胞凋亡的變化。另外,我們將鼠腦的實驗結(jié)果在人腦膠質(zhì)瘤細胞上進行驗證。由宣武醫(yī)院神經(jīng)外科提供的膠質(zhì)瘤組織經(jīng)過無菌的組織塊培養(yǎng)后,分別回轉(zhuǎn)1天、7天、14天。隨后利用流式細胞儀對其凋亡情況進行檢測。實驗結(jié)果:通過顯微鏡觀察到,三個腦區(qū)組織塊皆出現(xiàn)生長暈面積增大,內(nèi)部細胞大量遷出的現(xiàn)象;由于細胞骨架發(fā)生暫時性的變化,導致細胞形態(tài)發(fā)生變化,并且細胞聚集成片狀生長。流式檢測結(jié)果顯示,1天、7天的回轉(zhuǎn)沒有對三個腦區(qū)細胞凋亡率產(chǎn)生影響,14天的回轉(zhuǎn)降低了三個腦區(qū)的細胞凋亡率。病人膠質(zhì)瘤細胞的凋亡率沒有被不同時長的回轉(zhuǎn)影響。結(jié)論:短期和中期的模擬微重力效應(yīng)刺激即可引起組織塊和細胞發(fā)生形態(tài)變化,但對細胞凋亡不會產(chǎn)生影響,隨著回轉(zhuǎn)時間的延長,細胞即可適應(yīng)模擬微重力效應(yīng)。海馬、小腦、皮層在形態(tài)改變和凋亡兩個方面上,對模擬微重力的響應(yīng)是一致的,沒有腦區(qū)之間的區(qū)別。
【關(guān)鍵詞】：微重力模擬 不同腦區(qū) 膠質(zhì)瘤 形態(tài)結(jié)構(gòu) 凋亡
【學位授予單位】：北京理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R85
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-10
• 第一章 緒論10-17
• 1.1 本論文研究的背景和意義10-11
• 1.2 重力、微重力和模擬微重力11-13
• 1.2.1 重力和微重力11
• 1.2.2 微重力效應(yīng)的模擬11-13
• 1.3 微重力的生物學效應(yīng)13-14
• 1.3.1 微重力對骨骼系統(tǒng)的影響13
• 1.3.2 微重力對肌肉的影響13-14
• 1.3.3 微重力對免疫系統(tǒng)的影響14
• 1.3.4 微重力對心血管系統(tǒng)的影響14
• 1.4 海馬，，小腦，皮層和神經(jīng)膠質(zhì)瘤14-15
• 1.5 本課題研究內(nèi)容15
• 1.6 本課題研究思路15-17
• 第二章 材料與方法17-27
• 2.1 主要儀器設(shè)備17
• 2.2 人腦神經(jīng)組織，鼠腦神經(jīng)組織17-18
• 2.3 主要試劑及抗體18
• 2.4 原代組織塊和細胞培養(yǎng)準備工作18-19
• 2.4.1 解剖器械的清洗與滅菌18
• 2.4.2 培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿的包被處理18
• 2.4.3 DMEM-F12培養(yǎng)基及緩沖液的配制18-19
• 2.5 體外組織塊和原代細胞培養(yǎng)19-20
• 2.5.1 組織塊培養(yǎng)19-20
• 2.5.2 原代細胞培養(yǎng)20
• 2.6 模擬微重力效應(yīng)模型的建立20-21
• 2.7 海馬、小腦、皮層組織塊的明場、相差顯微鏡拍攝21
• 2.8 海馬、小腦組織塊的HE染色21-22
• 2.8.1 海馬、小腦組織塊的冰凍切片的制備21-22
• 2.8.2 冰凍切片的HE染色22
• 2.9 原位掃描電鏡和透射電鏡組織塊標本的制備及拍照22-24
• 2.9.1 2.5 ％戊二醛固定液的配制22
• 2.9.2 環(huán)境掃描電鏡組織塊樣品制備22-23
• 2.9.3 組織塊的環(huán)境掃描電子顯微鏡拍攝23
• 2.9.4 透射電鏡組織塊樣本制備23-24
• 2.9.5 組織塊的透射電鏡拍攝24
• 2.10 細胞凋亡率的檢測24-27
• 2.10.1 流式細胞儀檢測細胞凋亡率24-25
• 2.10.2 TUNEL法檢測細胞凋亡25-27
• 第三章 結(jié)果27-43
• 3.1 海馬、小腦、皮層組織塊明場、相差顯微鏡觀察的結(jié)果27-31
• 3.1.1 海馬腦區(qū)sMG組和Ctr組組織塊的表面形態(tài)比較27-28
• 3.1.2 小腦腦區(qū)sMG組和Ctr組組織塊的表面形態(tài)比較28-29
• 3.1.3 皮層腦區(qū)sMG組和Ctr組組織塊的表面形態(tài)比較29-30
• 3.1.4 小結(jié)30-31
• 3.2 海馬、小腦組織塊HE染色的結(jié)果31-33
• 3.2.1 海馬組織塊HE染色結(jié)果31-32
• 3.2.2 小腦組織塊HE染色結(jié)果32
• 3.2.3 小結(jié)32-33
• 3.3 組織塊電鏡觀察的結(jié)果33-36
• 3.3.1 皮層組織塊的環(huán)境掃描電子顯微鏡觀察結(jié)果33-34
• 3.3.2 海馬組織塊透射電子顯微鏡觀察結(jié)果34-36
• 3.3.3 小結(jié)36
• 3.4 海馬、小腦、皮層、膠質(zhì)瘤細胞凋亡的檢測結(jié)果36-43
• 3.4.1 海馬、小腦、皮層腦區(qū)回轉(zhuǎn)至不同時間點的細胞凋亡情況36-39
• 3.4.2 海馬組織塊石蠟切片TUNEL檢測結(jié)果39-40
• 3.4.3 膠質(zhì)瘤回轉(zhuǎn)至不同時間點的細胞凋亡情況40-42
• 3.4.4 小結(jié)42-43
• 第四章 討論43-49
• 4.1 模擬微重力效應(yīng)對海馬、小腦、皮層組織塊形態(tài)學影響的分析43-46
• 4.2 模擬微重力效應(yīng)對海馬、小腦、皮層、膠質(zhì)瘤細胞凋亡率影響的分析46-49
• 結(jié)論49-50
• 參考文獻50-53
• 攻讀學位期間發(fā)表論文與研究成果清單53-54
• 致謝54

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