本文關(guān)鍵詞：用懸浮芯片技術(shù)定量檢測多種病原體的研究

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【摘要】： 目的：利用懸浮芯片技術(shù)，探討直接從“白色粉末”樣品中同時檢測5種病原體(細(xì)菌、細(xì)菌芽孢、病毒、細(xì)菌毒素、植物毒素)的可行性，為建立快速、敏感、特異、高通量、同時檢測多種生物恐怖因子的技術(shù)平臺奠定基礎(chǔ)。 方法：用抗體包被編碼微球作為反應(yīng)載體，雙抗體夾心法為反應(yīng)模式，建立5種代表性的病原體懸浮芯片檢測方法，對“白色粉末”中的鼠疫耶爾森菌、炭疽芽孢、葡萄球菌腸毒素B、蓖麻毒素、SARS冠狀病毒同時進(jìn)行檢測。通過盲樣和標(biāo)準(zhǔn)實驗室檢測評估對現(xiàn)場樣品的適用性。 結(jié)果：建立的懸浮芯片多病原體檢測系統(tǒng)具有較高的特異性和敏感性，檢測鼠疫耶爾森菌、炭疽芽孢、葡萄球菌腸毒素B、蓖麻毒素、SARS冠狀病毒N蛋白的靈敏度分別為67.5 cfu／mL、10~3 cfu／mL、0.203 ng／mL、29.1 ng／mL、4.86 ng／mL，并分別在10~2～10~8 cfu／mL、10~3～10~7 cfu／mL、0.02-152.7 ng／mL、3.56-100852.1ng／mL、0.391-25600 ng／mL濃度范圍內(nèi)具有良好的動力學(xué)響應(yīng)特性，比ELISA方法有較高的靈敏度和較寬動態(tài)檢測范圍。 結(jié)論：多病原體懸浮芯片檢測系統(tǒng)能快速、敏感、特異、同時地定量檢測“白色粉末”中的五種病原體，，在早期識別、快速診斷和應(yīng)對生物恐怖威脅、傳染病暴發(fā)中具有廣闊的應(yīng)用前景。
【關(guān)鍵詞】：懸浮芯片 檢測 雙抗體夾心法 生物威脅劑
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R82
【目錄】：

• 中文摘要9-10
• 英文摘要10-11
• 本研究中的縮略語11-13
• 引言13-34
• 1 面臨生物威脅的形勢13-16
• 2. 生物恐怖因子的種類16-18
• 3. 生物恐怖因子的檢測技術(shù)18-22
• 4. 懸浮芯片及其應(yīng)用概況22-26
• 5. 本研究的目的、意義26-27
• 參考文獻(xiàn)27-34
• 第一部分 懸浮芯片定量檢測方法的建立34-62
• 引言34-36
• 1. 材料與方法36-46
• 1.1 材料36-40
• 1.1.1 抗原、抗體36
• 1.1.2 主要試劑36-37
• 1.1.3 緩沖液37-38
• 1.1.4 菌株與培養(yǎng)基38
• 1.1.5 主要耗材38
• 1.1.6 主要儀器38-39
• 1.1.7 懸浮芯片檢測儀的結(jié)構(gòu)及用途39-40
• 1.2 方法40-46
• 1.2.1 鼠疫菌F1抗原抗體的制備40
• 1.2.2 BCA法測定蛋白的濃度40
• 1.2.3 抗體包被編碼微球40-42
• 1.2.4 生物素標(biāo)記抗體42-43
• 1.2.5 待測樣品制備43-44
• 1.2.6 樣品的懸浮芯片檢測44-45
• 1.2.7 雙抗體夾心ELISA檢測45-46
• 1.2.8 方法的特異性檢測46
• 1.2.9 定量檢測46
• 2. 結(jié)果46-57
• 2.1 懸浮芯片檢測方法的優(yōu)化46-52
• 2.1.1 微球包被不同抗體及包被量的優(yōu)化46-48
• 2.1.2 生物素化抗體的優(yōu)化48-49
• 2.1.3 雙抗夾心法檢測鼠疫菌F1抗原抗體配對組合49-51
• 2.1.4 懸浮芯片檢測過程的優(yōu)化51-52
• 2.2 ELISA方法的優(yōu)化52
• 2.3 懸浮芯片定量檢測模型的建立52-54
• 2.3.1 鼠疫菌F1抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線52-53
• 2.3.2 確定懸浮芯片檢測鼠疫菌F1抗原檢測靈敏度和動態(tài)范圍53-54
• 2.3.3 懸浮芯片定量檢測鼠疫菌F1抗原的回收率54
• 2.4 懸浮芯片檢測鼠疫菌方法的特異性54-55
• 2.5 懸浮芯片與ELISA方法檢測鼠疫菌F1抗原的比較55-57
• 2.5.1 檢測方法相關(guān)性、靈敏度與動態(tài)范圍的比較55-57
• 2.5.2 檢測30份鼠疫菌F1抗原樣品的結(jié)果比較57
• 2.5.3 模擬樣品檢測57
• 3. 討論57-60
• 4. 小結(jié)60
• 參考文獻(xiàn)60-62
• 第二部分 病原體多重懸浮芯片檢測方法建立與初步評價62-126
• 引言62-66
• 1 材料與方法66-77
• 1.1 材料66-68
• 1.1.1 抗原抗體67
• 1.1.2 菌株67
• 1.1.3 培養(yǎng)基67-68
• 1.1.4 主要耗材68
• 1.2 方法68-77
• 1.2.1 細(xì)菌培養(yǎng)及菌液制備68-69
• 1.2.2 待測樣品制備69-70
• 1.2.3 抗體包被編碼微球70-71
• 1.2.4 生物素化抗體71
• 1.2.5 懸浮芯片單因子分析物檢測71
• 1.2.6 懸浮芯片五種病原體多重檢測71-74
• 1.2.7 懸浮芯片多重檢測方法檢測單因子分析物的敏感性實驗74-75
• 1.2.8 ELISA檢測75
• 1.2.9 干擾背景下懸浮芯片多重檢測方法檢測能力75-76
• 1.2.10 懸浮芯片定量檢測76-77
• 1.2.11 懸浮芯片多重檢測方法特異性實驗77
• 1.2.12 生物安全防護(hù)77
• 2 結(jié)果77-112
• 2.1 懸浮芯片檢測方法的優(yōu)化77-80
• 2.1.1 鼠疫菌懸浮芯片檢測方法的優(yōu)化77-78
• 2.1.2 炭疽菌芽孢懸浮芯片檢測方法的優(yōu)化78
• 2.1.3 SEB懸浮芯片檢測方法的優(yōu)化78-79
• 2.1.4 ricin懸浮芯片檢測方法的優(yōu)化79
• 2.1.5 SARS-CoV懸浮芯片檢測方法的優(yōu)化79-80
• 2.2 懸浮芯片五種病原體多重檢測模式的建立80-85
• 2.2.1 五種病原體多重檢測的懸浮芯片方法優(yōu)化80-84
• 2.2.2 懸浮芯片內(nèi)部質(zhì)控方法的建立84-85
• 2.3 懸浮芯片方法檢測病原體的標(biāo)準(zhǔn)曲線85-89
• 2.3.1 懸浮芯片方法檢測鼠疫菌的標(biāo)準(zhǔn)曲線與方程式86
• 2.3.2 懸浮芯片方法檢測炭疽芽孢的標(biāo)準(zhǔn)曲線與方程式86-87
• 2.3.3 懸浮芯片方法檢測SEB的標(biāo)準(zhǔn)曲線與方程式87
• 2.3.4 懸浮芯片方法檢測ricin的標(biāo)準(zhǔn)曲線與方程式87-88
• 2.3.5 懸浮芯片方法檢測SARS-CoV N蛋白的標(biāo)準(zhǔn)曲線與方程式88-89
• 2.4 X-MAP與ELISA方法檢測敏感度和檢測范圍比較89-94
• 2.4.1 鼠疫菌檢測89-90
• 2.4.2 炭疽芽孢檢測90-91
• 2.4.3 SEB檢測91-92
• 2.4.4 蓖麻毒素A檢測92
• 2.4.5 SARS-CoV N蛋白檢測92-94
• 2.4.6 X-MAP方法與ELISA方法檢測樣品結(jié)果的吻合性比較94
• 2.5 X-MAP方法檢測目的分析物在有其他對象干擾情況下的靈敏度94-96
• 2.5.1 檢測鼠疫菌94-95
• 2.5.2 檢測SARS-CoV N蛋白95-96
• 2.6 X-MAP方法的特異性96-98
• 2.7 X-MAP定量檢測五種病原體98-101
• 2.7.1 X-MAP依次定量檢測單種病原體98-100
• 2.7.2 背景干擾條件下目標(biāo)物定量檢測100-101
• 2.8 “白色粉末”污染樣品檢測結(jié)果101-108
• 2.8.1 不同粉末樣品中炭疽芽孢的檢測101-102
• 2.8.2 奶粉人工污染樣品中鼠疫菌定量檢測102-103
• 2.8.3 奶粉人工污染樣品中炭疽芽孢定量檢測103-104
• 2.8.4 奶粉人工污染樣品中SEB定量檢測104-105
• 2.8.5 奶粉人工污染樣品中ricin定量檢測105-106
• 2.8.6 奶粉人工污染樣品中SARS-CoV N蛋白定量檢測106-107
• 2.8.7 不同粉末污染樣品中多病原體檢測107-108
• 2.9 樣品測試108-110
• 2.10 盲樣檢測110-112
• 3 討論112-117
• 4 小結(jié)117-118
• 參考文獻(xiàn)118-126
• 第三部分 結(jié)論126-127
• 1、建立了編碼微球蛋白質(zhì)懸浮芯片的標(biāo)準(zhǔn)實驗方法126
• 2、建立了多種類病原體懸浮芯片檢測技術(shù)126
• 3、評價了方法的敏感性、特異性、重復(fù)性、準(zhǔn)確性126
• 4、實現(xiàn)了定量檢測126
• 5、考核對粉末樣品的定性、定量檢測能力126-127
• 綜述127-144
• 發(fā)表論文144-145
• 申請或獲得專利145-146
• 致謝146

【引證文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 徐華;顧大勇;胡春凌;李永進(jìn);史蕾;劉春曉;趙純中;張妮奇;徐云慶;姜聲揚(yáng);;四種重要生物恐怖毒素液相芯片多重檢測方法的建立[J];中國國境衛(wèi)生檢疫雜志;2012年03期

2 劉麗娟;姜超;楊永莉;王莎莎;于珊珊;王旺;;液相芯片檢測3種發(fā)熱伴出疹病毒方法的建立[J];中國國境衛(wèi)生檢疫雜志;2012年05期

本文編號：540568