本文關(guān)鍵詞：模擬失重對比目魚肌凋亡的影響及藥物干預(yù)研究

  更多相關(guān)文章： 失重 肌萎縮 血府逐瘀膠囊 丁苯酞 PI3K/AKT MAPK

【摘要】：背景與目的：失重條件下為適應(yīng)環(huán)境,人和動物生理狀態(tài)會發(fā)生一系列的變化,其中以骨骼肌萎縮最為顯著。目前其發(fā)生的機(jī)制仍不明確且缺少特效的干預(yù)措施。因此,探討肌肉萎縮的發(fā)生機(jī)制對肌萎縮的防治具有重要的意義。PI3K/AKT通路和MAPK通路是膜受體感受外界刺激后向胞內(nèi)傳導(dǎo)信號的主要途徑,也是調(diào)節(jié)細(xì)胞分化、增殖、衰老和凋亡的關(guān)鍵信號途徑。研究表明上述信號途徑可能參與失重狀態(tài)下骨骼肌萎縮的發(fā)生機(jī)制。本研究選用血府逐瘀膠囊和丁苯酞兩種藥物,以尾部懸吊為模擬失重模型,對模擬失重狀態(tài)下骨骼肌的形態(tài)學(xué)及PI3K/AKT通路和MAPK通路相關(guān)蛋白和基因轉(zhuǎn)錄水平變化進(jìn)行研究,以期尋找有效的失重狀態(tài)下骨骼肌萎縮的干預(yù)藥物。 實(shí)驗(yàn)方法：建立尾部懸吊大鼠模擬失重模型,40只同源雌性SD大鼠(10周齡,200-250g)隨機(jī)分為對照組(CON),尾吊組(SUS),尾吊+血府逐瘀膠囊組(XFZY),尾吊+丁苯酞組(NBP)。尾吊30天,對照組及尾吊組單純給予溶媒,血府逐瘀膠囊組劑量為25mg/kg.d,丁苯酞組劑量為20mg/kg.d,各組均每日上午八點(diǎn)灌胃一次。 (1)通過測量比目魚肌濕重體質(zhì)量比,橫截面積,mATP酶染色,觀察形態(tài)學(xué)變化。 (2)應(yīng)用Western-blot及RT-PCR檢測技術(shù)分析PI3K/AKT及MAPK通路中ERK. JNK通路相關(guān)蛋白及下游分子BAX、Cyto-c蛋白及轉(zhuǎn)錄水平變化。 (3)分別利用紫外分光光度計(jì)和TUNEL方法檢測caspase-3活性和比目魚肌纖維細(xì)胞凋亡程度。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：40只大鼠全部進(jìn)入結(jié)果分析,無脫失。 (1)與對照組相比,尾吊組比目魚肌濕重體質(zhì)量比下降了56.39%。血府逐瘀組和丁苯酞組平均濕重體質(zhì)量比分別較單純尾吊組增加了14.49%和13.85%。血府逐瘀膠囊組與尾吊組差異達(dá)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。尾吊30天后,與對照組相比,其余三組Ⅰ型纖維比例明顯減少,而藥物干預(yù)后并未改善Ⅰ型纖維向Ⅱ纖維的轉(zhuǎn)換。 (2)尾吊30天顯著抑制了PI3K/AKT信號通路中PI3K、P-AKT、GRP78蛋白及轉(zhuǎn)錄水平表達(dá),增強(qiáng)了磷酸化GSK-3β蛋白表達(dá)。血府逐瘀膠囊組干預(yù)后提高了PI3K、P-AKT、GRP78蛋白及轉(zhuǎn)錄水平表達(dá),降低了磷酸化GSK-3β蛋白表達(dá),其中對關(guān)鍵分子P-AKT的表達(dá)影響最大,與單純尾吊組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。丁苯酞組干預(yù)后,也提高了P-AKT、GRP78蛋白及轉(zhuǎn)錄水平表達(dá),降低了磷酸化GSK-3β蛋白表達(dá),但丁苯酞對GRP78的蛋白及轉(zhuǎn)錄水平影響最大。 (3)尾吊30天,抑制了ERK細(xì)胞保護(hù)通路中P-ERK的蛋白表達(dá),同時增強(qiáng)了促凋亡的JNK通路中P-JNK蛋白表達(dá),兩種藥物干預(yù)后可從兩方面檢測到保護(hù)作用,并且血府逐瘀膠囊保護(hù)作用優(yōu)于丁苯酞組。 (4)尾吊30天比目魚肌caspase3酶活性顯著增強(qiáng),肌纖維細(xì)胞凋亡增加,藥物干預(yù)后caspase3酶活性較尾吊組顯著降低,凋亡細(xì)胞減少,但仍高于對照組。 結(jié)論： (1)尾吊模擬失重可通過抑制PI3K/AKT、ERK信號通路及促進(jìn)JNK通路相關(guān)分子表達(dá)水平,增強(qiáng)caspase-3活性,促進(jìn)肌纖維細(xì)胞凋亡,導(dǎo)致比目魚肌萎縮。 (2)血府逐瘀膠囊和丁苯酞兩種藥物,可能通過PI3K/AKT通路和MAPK通路對失重性肌萎縮起到保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：失重 肌萎縮 血府逐瘀膠囊 丁苯酞 PI3K/AKT MAPK
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R85
【目錄】：

• 縮略語表6-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-12
• 一、實(shí)驗(yàn)材料12-15
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動物12-13
• 1.2 主要試劑和藥物13
• 1.3 儀器設(shè)備13-15
• 二、實(shí)驗(yàn)方法15-26
• 2.1 實(shí)驗(yàn)分組15
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法15-25
• 2.2.1 尾吊大鼠模擬失重模型及藥物制備15
• 2.2.2 標(biāo)本制備15-16
• 2.2.3 組織切片制備16
• 2.2.4 組織切片化學(xué)染色16-17
• 2.2.5 Western blot檢測17-19
• 2.2.6 RT-PCR檢測19-23
• 2.2.7 Caspase 3活性檢測23-24
• 2.2.8 TUNEL檢測24-25
• 2.3 統(tǒng)計(jì)分析25-26
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-43
• (一) 形態(tài)學(xué)結(jié)果26-29
• 1、模擬失重對大鼠比目魚肌濕重影響及藥物干預(yù)效果26-27
• 2、模擬失重對大鼠比目魚肌組織橫截面積的影響及藥物干預(yù)效果27-28
• 3、模擬失重對大鼠比目魚肌纖維類型的影響及藥物干預(yù)效果28-29
• (二) Western blot檢測結(jié)果29-38
• 1、模擬失重對大鼠比目魚肌PI3K/AKT信號通路的影響及藥物干預(yù)效果29-31
• 2、尾吊模擬失重對ERK/P-ERK及JNK/P-JNK信號通路的影響及藥物干預(yù)作用31-33
• 3、尾吊模擬失重對GRP78、GSK-3β的影響及藥物干預(yù)作用33-35
• 4、尾吊模擬失重對凋亡通路BAX的影響及藥物干預(yù)作用35-36
• 5、尾吊模擬失重對胞漿細(xì)胞色素C的影響及藥物干預(yù)作用36-38
• (三) mRNA水平RT-PCR結(jié)果38-41
• (四) caspase-3活性檢測結(jié)果41-42
• (五) TUNEL檢測結(jié)果42-43
• 四、討論43-54
• 4.1 尾吊模擬失重對大鼠比目魚肌形態(tài)學(xué)變化的影響43-46
• 4.2 尾吊模擬失重對大鼠比目魚肌凋亡過程的影響及藥物干預(yù)作用46-48
• 4.2.1 尾吊模擬失重下大鼠比目魚肌TUNEL檢測結(jié)果及藥物干預(yù)46-47
• 4.2.2 尾吊模擬失重對大鼠比目魚肌caspase-3活性的影響47-48
• 4.3 尾吊模擬失重對大鼠比目魚肌凋亡機(jī)制的影響及藥物干預(yù)作用48-53
• 4.3.1 尾吊模擬失重對大鼠比目魚肌PI3K/AKT通路的影響及藥物干預(yù)作用48-51
• 4.3.2 尾吊模擬失重對大鼠比目魚肌MAPK通路的影響及藥物干預(yù)作用51-53
• 4.4 小結(jié)與展望53-54
• 參考文獻(xiàn)54-59
• 文獻(xiàn)綜述59-69
• 參考文獻(xiàn)66-69
• 致謝69-70
• 個人簡介70

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：529415