本文關鍵詞：二甲基塞來昔布增敏ABT-737抗胃癌的作用和機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：ABT-737是類似BH-3的小分子物質(zhì),能夠抑制抗凋亡的Bcl-2家族蛋白Bcl-2,Bcl-xL和Bcl-w的活性,引起凋亡蛋白Bid, Bad及Bim等從抗凋亡蛋白中釋放。ABT-737能夠拮抗Bcl-2和Bcl-xL,但是和另一個抑凋亡家族蛋白Mcl-1的親和力較小,因而在某些實體瘤中Mcl-1蛋白高表達時,造成腫瘤細胞對ABT-737耐藥。本文研究了ABT-737與二甲基塞來昔布聯(lián)合用藥的藥效學及其機制研究。方法：(1)MTT法檢測ABT-737與二甲基塞來昔布(DMC)聯(lián)合用藥抑制人胃癌細胞增殖。(2)利用PI單染或Annexin V/PI雙染法流式細胞術檢測凋亡率。(3)利用JC1染色法檢測線粒體膜電位變化。(4)Western blotting法檢測蛋白的表達。(5)激光共聚焦檢測AIF細胞內(nèi)定位。(6)熒光定量PCR法檢測mRNA的表達。(7)利用SiRNA技術沉默基因表達。結(jié)果：二甲基塞來昔布與ABT-737聯(lián)合用藥較塞來昔布聯(lián)合ABT-737具有更強的的抗腫瘤作用,且二甲基塞來昔布不顯著影響細胞內(nèi)PGE2的水平。二甲基塞來昔布與ABT-737合用通過改變線粒體膜通透性,增強Mc1-1的降解,且與Mcl-1的蛋白水平呈明顯的負相關,但不顯著上調(diào)Noxa, Bim和Bak等促凋亡蛋白的水平,提示該凋亡作用可能與caspase的激活無關。進一步發(fā)現(xiàn),二甲基塞來昔布與ABT-737合用能夠激活AIF的核轉(zhuǎn)位,最終引起兩藥發(fā)生協(xié)同效果。結(jié)論：二甲基塞來昔布與ABT-737聯(lián)合用藥通過降解細胞內(nèi)的Mcl-1蛋白,促進AIF核轉(zhuǎn)位,從而產(chǎn)生caspase非依賴凋亡。
【關鍵詞】：ABT-737 二甲基塞來昔布 McI-1 AIF
【學位授予單位】：浙江中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R96
【目錄】：

• 中文摘要5-6
• ABSTRACT6-9
• 前言9-13
• 一、材料與方法13-26
• (一) 實驗材料13-17
• 1. 實驗細胞13
• 2. 實驗藥品13-14
• 3. 主要實驗儀器與設備14-15
• 4. 實驗試劑15-17
• (二) 實驗方法17-26
• 1. 細胞培養(yǎng)17-18
• 2. MTT實驗18
• 3. 集落形成實驗18-19
• 4. 流式細胞術測定細胞凋亡19
• 5. Hoechst 33342熒光染色實驗19
• 6. PGE2 ELISA檢測試劑盒19-20
• 7. JC-1染色測定線粒體膜電位變化20
• 8. Western Blotting法檢測蛋白含量20-23
• 9. 實時熒光定量PCR法測定Mcl-1基因轉(zhuǎn)錄水平23-25
• 10. SiRNA技術沉默AGS和HGC-27細胞的Mcl-125
• 11. 免疫熒光25
• 12. 數(shù)據(jù)分析25-26
• 二、實驗結(jié)果26-33
• (一) DMC顯著增敏ABT-737抗人胃癌細胞株AGS和HGC-27的增殖26-28
• (二) DMC對人胃癌細胞AGS和HGC-27內(nèi)PGE2水平無顯著影響28-29
• (三) DMC聯(lián)合ABT-737誘導胃癌細胞AGS和HGC-27發(fā)生凋亡29-30
• (四) DMC聯(lián)合ABT-737引起胃癌細胞AGS和HGC-27的線粒體膜電位下降30
• (五) DMC與ABT-737的聯(lián)合抗腫瘤作用與Mcl-1蛋白水平相關30-31
• (六) DMC聯(lián)合ABT-737誘導AIF蛋白的核轉(zhuǎn)運31-33
• 三、分析和討論33-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻35-42
• 附圖42-56
• 致謝56-57
• 文獻綜述57-66
• 參考文獻63-66

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