目的通過體外研究探索人脂肪干細(xì)胞（hADSC）促進(jìn)海水浸泡創(chuàng)面愈合的可能機(jī)制。方法利用人表皮細(xì)胞系HaCaT細(xì)胞和人工模擬海水建立海水浸泡創(chuàng)面導(dǎo)致細(xì)胞損傷的體外模型。從人脂肪組織分離、培養(yǎng)hADSC并進(jìn)行鑒定,建立HaCaT細(xì)胞與hADSC共培養(yǎng)體系。利用活細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒（CCK-8）、5-乙炔基-2’-脫氧尿苷（EdU）細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒與細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)等評(píng)估HaCaT細(xì)胞增殖、遷移能力,并通過蛋白質(zhì)印跡與實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）/細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（ERK）信號(hào)通路活化情況。結(jié)果在添加了10%海水的培養(yǎng)液中,HaCaT細(xì)胞的增殖活力已受到明顯抑制,與不添加海水培養(yǎng)的細(xì)胞相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。利用成功分離的hADSC與HaCaT細(xì)胞共培養(yǎng)模型,發(fā)現(xiàn)添加10%海水培養(yǎng)的HaCaT細(xì)胞增殖與遷移能力均低于不添加海水培養(yǎng)的HaCaT細(xì)胞及與hADSC共培養(yǎng)且添加10%海水培養(yǎng)的HaCaT細(xì)胞（P均<0.05）,而不添加海水培養(yǎng)的HaCaT細(xì)胞和與hADSC共培養(yǎng)且添加10%海水培養(yǎng)的HaCaT細(xì)胞增殖與遷移能力差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>... 

【文章來(lái)源】：第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2019,40(10)北大核心CSCD

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hADSC共培養(yǎng)對(duì)海水浸泡HaCaT細(xì)胞增殖的影響

·1066·第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)2019年10月，第40卷2.3hADSC共培養(yǎng)對(duì)海水浸泡的HaCaT細(xì)胞增殖影響通過EdU細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)觀察hADSC共培養(yǎng)對(duì)海水浸泡細(xì)胞增殖的影響，結(jié)果（圖3）顯示在10%海水組中，HaCaT細(xì)胞增殖受到抑制，細(xì)胞的增殖活力與未添加海水的對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[（26.0±0.9）%vs（37.4±1.3）%，P＜0.01]；而hADSC共培養(yǎng)組HaCaT細(xì)胞增殖活力并未受到明顯抑制，細(xì)胞的增殖活力高于海水組且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[（36.3±2.3）%vs（26.0±0.9）%，P＜0.01]。2.4hADSC共培養(yǎng)對(duì)海水浸泡的HaCaT細(xì)胞遷移的影響細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與不添加海水的對(duì)照組相比，10%海水組HaCaT細(xì)胞遷移能力在12h即顯示出劃痕閉合延緩，并持續(xù)至36h，修復(fù)面積與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；而在同一觀測(cè)時(shí)間點(diǎn)，hADSC共培養(yǎng)組細(xì)胞的遷移能力相較于海水組顯示出較高的愈合效率，修復(fù)面積與海水組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)圖3hADSC共培養(yǎng)對(duì)海水浸泡HaCaT細(xì)胞增殖的影響Fig3Effectofco-culturewithhADSCsonproliferationofHaCaTcellsculturedwithseawaterhADSC:Humanadipose-derivedstemcell;EdU:5-ethynyl-2’-deoxyuridine.Originalmagnification:×1002.5hADSC共培養(yǎng)通過EGFR/ERK通路干預(yù)海水浸泡HaCaT細(xì)胞的增殖與遷移蛋白質(zhì)印跡分析結(jié)果顯示，10%海水組HaCaT細(xì)胞EGFR蛋白表達(dá)量低于對(duì)照組及hADSC共培養(yǎng)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；而對(duì)照組與hADSC共培養(yǎng)組EGFR蛋白表達(dá)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，圖5A）。實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示，10%海水組HaCaT細(xì)胞ERKmRNA表達(dá)量低于對(duì)照組及hADSC共培養(yǎng)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；而對(duì)照組與hADSC共培養(yǎng)組ERKmRNA表達(dá)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，圖5B）。意義（P＜0.01?

緯陜?源疵?[3]。海水浸泡后的創(chuàng)面組織細(xì)胞嚴(yán)重變性壞死，加重創(chuàng)面損傷[17]；創(chuàng)面局部炎癥反應(yīng)增強(qiáng)，局部炎癥期延長(zhǎng)，使創(chuàng)面修復(fù)延緩[18]；此外，大量研究表明，海水浸泡可導(dǎo)致創(chuàng)面中VEGF表達(dá)減少，創(chuàng)面新生血管內(nèi)皮細(xì)胞和內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖受到抑制，創(chuàng)面新生血管化受到阻礙，造成創(chuàng)面愈合延緩[19-21]。但目前尚未見關(guān)于海水是否影響表皮細(xì)胞增殖與遷移的研究報(bào)道。本研究將人表皮細(xì)胞系HaCaT細(xì)胞作為創(chuàng)面上皮化的代表細(xì)胞，觀察海水對(duì)其增殖與遷移的影響。真實(shí)環(huán)境下，創(chuàng)面最表面應(yīng)該接觸圖5hADSC共培養(yǎng)通過EGFR/ERK通路干預(yù)海水浸泡HaCaT細(xì)胞的增殖與遷移Fig5Co-culturewithhADSCsinterferingproliferationandmigrationofHaCaTcellsculturedwithseawaterviaEGFR/ERKpathwayA:EGFRproteinexpressiondetectedbyWesternblotting;B:ERKmRNAexpressiondetectedbyreal-timequantitativePCR.hADSC:Humanadipose-derivedstemcell;EGFR:Epidermalgrowthfactorreceptor;ERK:Extracellular-regulatedproteinkinase.**P＜0.01vscontrolgroup;△△P＜0.01vsseawatergroup.n＝3,x±s第10期．熊佳超，等．脂肪干細(xì)胞通過EGFR/ERK通路減輕海水對(duì)表皮細(xì)胞增殖與遷移能力的抑制作用


本文編號(hào)：3447717