目的通過體外研究探索人脂肪干細胞（hADSC）促進海水浸泡創(chuàng)面愈合的可能機制。方法利用人表皮細胞系HaCaT細胞和人工模擬海水建立海水浸泡創(chuàng)面導致細胞損傷的體外模型。從人脂肪組織分離、培養(yǎng)hADSC并進行鑒定,建立HaCaT細胞與hADSC共培養(yǎng)體系。利用活細胞計數(shù)試劑盒（CCK-8）、5-乙炔基-2’-脫氧尿苷（EdU）細胞增殖檢測試劑盒與細胞劃痕實驗等評估HaCaT細胞增殖、遷移能力,并通過蛋白質(zhì)印跡與實時定量PCR技術檢測表皮生長因子受體（EGFR）/細胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（ERK）信號通路活化情況。結果在添加了10%海水的培養(yǎng)液中,HaCaT細胞的增殖活力已受到明顯抑制,與不添加海水培養(yǎng)的細胞相比差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。利用成功分離的hADSC與HaCaT細胞共培養(yǎng)模型,發(fā)現(xiàn)添加10%海水培養(yǎng)的HaCaT細胞增殖與遷移能力均低于不添加海水培養(yǎng)的HaCaT細胞及與hADSC共培養(yǎng)且添加10%海水培養(yǎng)的HaCaT細胞（P均<0.05）,而不添加海水培養(yǎng)的HaCaT細胞和與hADSC共培養(yǎng)且添加10%海水培養(yǎng)的HaCaT細胞增殖與遷移能力差異無統(tǒng)計學意義（P>... 

【文章來源】：第二軍醫(yī)大學學報. 2019,40(10)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

hADSC共培養(yǎng)對海水浸泡HaCaT細胞增殖的影響

·1066·第二軍醫(yī)大學學報2019年10月，第40卷2.3hADSC共培養(yǎng)對海水浸泡的HaCaT細胞增殖影響通過EdU細胞增殖實驗觀察hADSC共培養(yǎng)對海水浸泡細胞增殖的影響，結果（圖3）顯示在10%海水組中，HaCaT細胞增殖受到抑制，細胞的增殖活力與未添加海水的對照組比較差異有統(tǒng)計學意義[（26.0±0.9）%vs（37.4±1.3）%，P＜0.01]；而hADSC共培養(yǎng)組HaCaT細胞增殖活力并未受到明顯抑制，細胞的增殖活力高于海水組且差異有統(tǒng)計學意義[（36.3±2.3）%vs（26.0±0.9）%，P＜0.01]。2.4hADSC共培養(yǎng)對海水浸泡的HaCaT細胞遷移的影響細胞劃痕實驗結果顯示，與不添加海水的對照組相比，10%海水組HaCaT細胞遷移能力在12h即顯示出劃痕閉合延緩，并持續(xù)至36h，修復面積與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；而在同一觀測時間點，hADSC共培養(yǎng)組細胞的遷移能力相較于海水組顯示出較高的愈合效率，修復面積與海水組相比差異有統(tǒng)計學圖3hADSC共培養(yǎng)對海水浸泡HaCaT細胞增殖的影響Fig3Effectofco-culturewithhADSCsonproliferationofHaCaTcellsculturedwithseawaterhADSC:Humanadipose-derivedstemcell;EdU:5-ethynyl-2’-deoxyuridine.Originalmagnification:×1002.5hADSC共培養(yǎng)通過EGFR/ERK通路干預海水浸泡HaCaT細胞的增殖與遷移蛋白質(zhì)印跡分析結果顯示，10%海水組HaCaT細胞EGFR蛋白表達量低于對照組及hADSC共培養(yǎng)組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；而對照組與hADSC共培養(yǎng)組EGFR蛋白表達量差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05，圖5A）。實時定量PCR結果顯示，10%海水組HaCaT細胞ERKmRNA表達量低于對照組及hADSC共培養(yǎng)組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；而對照組與hADSC共培養(yǎng)組ERKmRNA表達量差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05，圖5B）。意義（P＜0.01?

緯陜?源疵?[3]。海水浸泡后的創(chuàng)面組織細胞嚴重變性壞死，加重創(chuàng)面損傷[17]；創(chuàng)面局部炎癥反應增強，局部炎癥期延長，使創(chuàng)面修復延緩[18]；此外，大量研究表明，海水浸泡可導致創(chuàng)面中VEGF表達減少，創(chuàng)面新生血管內(nèi)皮細胞和內(nèi)皮祖細胞增殖受到抑制，創(chuàng)面新生血管化受到阻礙，造成創(chuàng)面愈合延緩[19-21]。但目前尚未見關于海水是否影響表皮細胞增殖與遷移的研究報道。本研究將人表皮細胞系HaCaT細胞作為創(chuàng)面上皮化的代表細胞，觀察海水對其增殖與遷移的影響。真實環(huán)境下，創(chuàng)面最表面應該接觸圖5hADSC共培養(yǎng)通過EGFR/ERK通路干預海水浸泡HaCaT細胞的增殖與遷移Fig5Co-culturewithhADSCsinterferingproliferationandmigrationofHaCaTcellsculturedwithseawaterviaEGFR/ERKpathwayA:EGFRproteinexpressiondetectedbyWesternblotting;B:ERKmRNAexpressiondetectedbyreal-timequantitativePCR.hADSC:Humanadipose-derivedstemcell;EGFR:Epidermalgrowthfactorreceptor;ERK:Extracellular-regulatedproteinkinase.**P＜0.01vscontrolgroup;△△P＜0.01vsseawatergroup.n＝3,x±s第10期．熊佳超，等．脂肪干細胞通過EGFR/ERK通路減輕海水對表皮細胞增殖與遷移能力的抑制作用


本文編號：3447717