本文關(guān)鍵詞：抗菌肽CGA-N46及其衍生肽生物信息學(xué)分析與抗真菌作用機理初步研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：CGA-N46是嗜鉻粒蛋白A N端的一段具有抗真菌活性的片段,能夠抑制多種致病性念珠菌。本文對其兩段衍生肽CGA-N16、CGA-N12的理化性質(zhì)及抑菌活性進行研究,篩選出一段活性更高的抗菌肽,并初步研究其作用機理,為以后的抗念珠菌作用靶標研究奠定基礎(chǔ)。本文通過在CGA-N46兩端刪減不同數(shù)量的氨基酸殘基得到CGA-N46的衍生片段CGA-N16和CGA-N12。對CGA-N46、CGA-N16和CG-N12的氨基酸序列進行生物信息學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)它們均為親水性多肽,α-螺旋結(jié)構(gòu),等電點近中性,微偏堿性。其中,CGA-N12熱穩(wěn)定性最高,在酵母細胞和哺乳動物細胞中半衰期最長。采用圓二色譜方法測定CGA-N46及其衍生肽在PBS溶液、30 mM SDS溶液和小單層脂質(zhì)體溶液中的二級結(jié)構(gòu)譜圖。利用生物信息學(xué)軟件對CGA-N46及其衍生肽在不同溶液中二級結(jié)構(gòu)進行擬合運算,結(jié)果表明CGA-N46、CGA-N16和CGA-N12在PBS、30 mM SDS溶液中的二級結(jié)構(gòu)以α-螺旋為主,但在脂質(zhì)體溶液中α-螺旋結(jié)構(gòu)比例減少,β-轉(zhuǎn)角、β-折疊和無規(guī)則卷曲結(jié)構(gòu)比例增加。MTT法檢測結(jié)果表明CGA-N16和CGA-N12的抗真菌活性均優(yōu)于CGA-N46,其中CGA-N12的活性最高,敏感菌為熱帶念珠菌,MIC100為0.075 mmol·L-1。但其均對細菌無抑制作用。掃描電鏡觀察,發(fā)現(xiàn)CGA-N12能使破壞熱帶念珠菌菌體,使表面出現(xiàn)皺縮甚至裂縫;透射電鏡觀察,發(fā)現(xiàn)CGA-N12能破壞熱帶念珠菌的超顯微結(jié)構(gòu),使細胞壁和細胞膜腔隙變窄、著色變深,細胞器嚴重受損,空泡化嚴重,CGA-N12。推測CGA-N12使細胞壁破裂,導(dǎo)致細胞壁和細胞膜腔隙可溶性物質(zhì)泄漏,CGA-N12通過細胞壁裂縫,進入細胞壁和細胞膜之間的腔隙,再通過構(gòu)型變化進入細胞內(nèi),破壞細胞器結(jié)構(gòu)與功能,使細胞死亡。綜上,CGA-N12是一段抗菌活性高、有很高研究價值的抗菌肽。
【關(guān)鍵詞】：CGA-N12 CGA-N46衍生物 念珠菌 二級結(jié)構(gòu) 作用機制
【學(xué)位授予單位】：河南工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R917
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-11
• 第一章 前言11-22
• 1.1 真菌病11-12
• 1.1.1 真菌病現(xiàn)狀11
• 1.1.2 念珠菌病現(xiàn)狀11-12
• 1.2 抗真菌藥物12-13
• 1.2.1 抗真菌藥物簡述12-13
• 1.2.2 念珠菌病藥物治療現(xiàn)狀13
• 1.3 抗菌肽研究現(xiàn)狀13-18
• 1.3.1 抗菌肽簡述13-14
• 1.3.2 抗菌肽特性14
• 1.3.3 抗菌肽來源14-15
• 1.3.4 抗菌肽的結(jié)構(gòu)及分類15
• 1.3.5 抗菌肽的生物功能15-16
• 1.3.6 抗菌肽的作用機制16-17
• 1.3.7 抗菌肽的優(yōu)勢及存在的問題17-18
• 1.3.8 抗菌肽的應(yīng)用前景18
• 1.4 影響抗菌肽抗菌特異性的構(gòu)效關(guān)系18-19
• 1.5 生物信息學(xué)在抗菌肽研究中的應(yīng)用19
• 1.6 抗菌肽CGA-N46研究進展19-20
• 1.7 本研究的目的和內(nèi)容20-22
• 1.7.1 研究目的20
• 1.7.2 研究內(nèi)容20-22
• 第二章 實驗材料和方法22-33
• 2.1 實驗材料22-26
• 2.1.1 CGA-N46及其衍生肽氨基酸序列22
• 2.1.2 軟件與網(wǎng)址22
• 2.1.3 實驗菌株22
• 2.1.4 主要試劑22-23
• 2.1.5 主要儀器23-24
• 2.1.6 培養(yǎng)基24-25
• 2.1.7 主要溶液配置25-26
• 2.2 實驗方法26-33
• 2.2.1 固相化學(xué)法合成多肽CGA-N46的衍生物26-29
• 2.2.2 MTT法檢測多肽抗菌活性29-30
• 2.2.3 多肽生物信息學(xué)分析30
• 2.2.4 測定多肽二級結(jié)構(gòu)30-31
• 2.2.5 CGA-N12抑菌特性檢測31-33
• 第三章 試驗結(jié)果與分析33-46
• 3.1 CGA-N46及其衍生肽生物學(xué)信息33-34
• 3.1.1 CGA-N46及其衍生肽的理化性質(zhì)33-34
• 3.1.2 CGA-N46及其衍生肽親疏水性氨基酸分布34
• 3.2 CGA-N46衍生肽的合成與檢測34-37
• 3.2.1 合成與純化34-36
• 3.2.2 質(zhì)譜鑒定36-37
• 3.3 CGA-N46及其衍生肽抗菌活性檢測37-38
• 3.4 CD光譜測定CGA-N46及其衍生肽二級結(jié)構(gòu)38-40
• 3.5 熱帶念珠菌念珠菌生長曲線測定40-41
• 3.6 CGA-N12對熱帶念珠菌細胞形態(tài)的影響41-43
• 3.7 CGA-N12對熱帶念珠菌超顯微結(jié)構(gòu)的影響43-46
• 第四章 討論46-50
• 4.1 CGA-N46及其衍生肽的設(shè)計46
• 4.2 CGA-N46及其衍生肽二級結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系46-48
• 4.3 CGA-N46及其衍生物抑菌特性48
• 4.4 初步推測CGA-N12作用機理48-50
• 第五章 結(jié)論50-51
• 參考文獻51-58
• 致謝58-59
• 個人簡歷59

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本文編號：325092