本文關(guān)鍵詞：三嵌段聚合物膠束共轉(zhuǎn)運(yùn)阿霉素和siRNA用于逆轉(zhuǎn)耐藥和協(xié)同抗癌的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:制備同時(shí)遞送阿霉素和si RNA的共轉(zhuǎn)運(yùn)遞藥系統(tǒng)(si RNA-Dox-micelle),考察其腫瘤靶向及耐藥逆轉(zhuǎn),提供一種用于協(xié)同抗腫瘤的新策略。方法:(1)合成N-琥珀酰殼聚糖-聚L賴氨酸-軟脂酸三嵌段聚合物(NSC-PLL-PA),并在此基礎(chǔ)上制備共轉(zhuǎn)運(yùn)si RNA和Dox膠束(si RNA-Dox-micelle)。(2)考察si RNAmicelle、Dox-micelle和si RNA-Dox-micelle的體外細(xì)胞攝取和亞細(xì)胞分布特性,探究不同阿霉素制劑在細(xì)胞內(nèi)的攝取與消除。(3)從細(xì)胞內(nèi)藥物蓄積的角度闡明造成不同阿霉素制劑體外藥效學(xué)差異的原因。(4)考察si RNA-micelle的轉(zhuǎn)染效率和si RNA-Dox-micelle的腫瘤靶向性,初步探討P-gp在細(xì)胞間的轉(zhuǎn)移對(duì)化療藥物藥效學(xué)的影響,從逆轉(zhuǎn)耐藥和增強(qiáng)腫瘤靶向方面提高si RNA-Dox-micelle協(xié)同增效的抗腫瘤作用。結(jié)果:(1)通過縮合法成功地制備了NSC-PLL-PA三嵌段聚合物,N-琥珀酰殼聚糖(NSC)作為親水性外殼用于延長膠束在血液循環(huán)中的半衰期和降低聚L-賴氨酸(PLL)的毒性,PLL作為陽離子層用以吸附si RNA,軟脂酸(PA)作為疏水層用來包載阿霉素。該聚合物在水溶液中有很強(qiáng)的膠束化行為,疏水端易于自聚集而壓縮進(jìn)膠束內(nèi)核。制備得到的膠束外觀圓整,粒徑分布均勻,能夠高效包載Dox和si RNA。并且,si RNA-Dox-micelle在p H 5.3條件下沒有在p H 7.4條件下穩(wěn)定,易于在酸性條件下釋放所負(fù)載的Dox和si RNA。(2)si RNA-Dox-micelle能同時(shí)轉(zhuǎn)運(yùn)Dox和si RNA,從而使抗癌藥物和基因在同一細(xì)胞內(nèi)共定位。并且隨著孵育時(shí)間的延長,細(xì)胞內(nèi)的熒光增強(qiáng),攜帶兩種顏色熒光的細(xì)胞比例增加,抗癌藥物和基因在同一細(xì)胞內(nèi)累積從而更好的發(fā)揮協(xié)同增效的作用;Dox信號(hào)最終由細(xì)胞質(zhì)擴(kuò)散到細(xì)胞核,但si RNA信號(hào)始終定位于細(xì)胞質(zhì),這有利于他們?cè)诟髯缘陌胁课话l(fā)揮協(xié)同增效的作用。(3)共轉(zhuǎn)運(yùn)膠束能夠一定程度上避開外排泵的作用,下調(diào)耐藥細(xì)胞表面P-gp的表達(dá),增加細(xì)胞內(nèi)阿霉素的濃度,并且細(xì)胞內(nèi)藥物蓄積越多,引起的細(xì)胞毒性越大。(4)si RNA-micelle能夠有效遞送si RNA進(jìn)入靶細(xì)胞沉默P-gp的表達(dá),但是P-gp能夠在細(xì)胞間轉(zhuǎn)移并保留其生物學(xué)活性,而且,P-gp在細(xì)胞間的傳遞不依賴于mdr1的轉(zhuǎn)錄,一定程度上限制了si RNA-micelle體內(nèi)療效的發(fā)揮;si RNA-Dox-micelle表現(xiàn)出協(xié)同增效的的抗腫瘤活性并能夠明顯改善裸鼠的生存質(zhì)量;并且,si RNA在體內(nèi)能夠有效逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥,一定程度上增強(qiáng)了Dox的抗腫瘤作用。結(jié)論:合成的NSC-PLL-PA三嵌段聚合物能夠高效負(fù)載si RNA和Dox,并且在細(xì)胞內(nèi)有效釋放;制備得到的si RNA-Dox-micelle能夠靶向腫瘤部位,沉默P-gp表達(dá),逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥,發(fā)揮協(xié)同抗腫瘤作用,是一種安全有效的藥物遞送系統(tǒng)。
【關(guān)鍵詞】：共轉(zhuǎn)運(yùn) 逆轉(zhuǎn)耐藥 阿霉素 siRNA 協(xié)同抗癌
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R943
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 引言11-29
• 第一章 嵌段聚合物載體的合成29-41
• 材料29-30
• 方法與結(jié)果30-39
• 一、聚合物的合成與表征30-34
• 1. 聚合物的合成30-31
• 2. 聚合物的表征31-34
• 二、聚合物理化性質(zhì)的分析34-36
• 1. 臨界膠束濃度（CMC）的測(cè)定34-36
• 2. 粒徑和表面電位測(cè)定36
• 三、聚合物的安全性評(píng)價(jià)36-39
• 1. 體外溶血實(shí)驗(yàn)36-38
• 2. 細(xì)胞毒性試驗(yàn)38-39
• 討論與小結(jié)39-41
• 第二章 載藥膠束的制備及細(xì)胞攝取特性研究41-62
• 材料41-42
• 方法與結(jié)果42-60
• 一、Dox-micelle的制備及工藝優(yōu)化42-51
• 1. 分析方法42-44
• 2. Dox-micelle的制備方法44-45
• 3. Dox-micelle的質(zhì)量評(píng)價(jià)45-46
• 4. Dox-micelle制備工藝的優(yōu)化46-49
• 5. Dox-micelle的體外釋放49-51
• 二、Dox-micelle的細(xì)胞攝取特性51-55
• 1. 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Dox-micelle的細(xì)胞攝取51-52
• 2. 激光共聚焦顯微鏡觀察Dox-micelle在細(xì)胞內(nèi)的攝入與分布52-53
• 3. 載藥膠束的細(xì)胞內(nèi)吞機(jī)制研究53-55
• 三、細(xì)胞間P-gp的傳遞作用55-60
• 1. Dox-micelle的細(xì)胞毒性55-56
• 2. MTT實(shí)驗(yàn)考察細(xì)胞間P-gp的傳遞56
• 3. 流式細(xì)胞術(shù)觀察細(xì)胞間P-gp的傳遞56-57
• 4. 激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞間P-gp的傳遞57-58
• 5. RT-PCR及Western blot分析細(xì)胞間P-gp的傳遞58-60
• 討論與小結(jié)60-62
• 第三章 聚合物膠束遞送siRNA沉默靶基因的研究62-78
• 材料62-63
• 方法與結(jié)果63-76
• 一、siRNA-micelle理化性質(zhì)的研究63-70
• 1. 瓊脂糖凝膠電泳試驗(yàn)檢驗(yàn)?zāi)z束結(jié)合siRNA的能力63-64
• 2. siRNA-micelle的肝素解絡(luò)試驗(yàn)64-65
• 3. siRNA-micelle血清穩(wěn)定學(xué)試驗(yàn)65-66
• 4. RNase酶穩(wěn)定性評(píng)價(jià)66-67
• 5. 熒光替代（EB displacement）實(shí)驗(yàn)67-68
• 6. siRNA-micelle的體外釋放68-69
• 7. MTT試驗(yàn)檢測(cè)si RNA-micelle的生物相容性69-70
• 二、siRNA-micelle的細(xì)胞攝取與亞細(xì)胞分布70-72
• 1. 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)siRNA-micelle的細(xì)胞攝取70-71
• 2. 激光共聚焦顯微鏡觀察siRNA-micelle在細(xì)胞內(nèi)的攝入與分布71-72
• 三、siRNA-micelle下調(diào)P-gp表達(dá)的研究72-76
• 1. RT-PCR技術(shù)分析細(xì)胞內(nèi)mdr1 mRNA的表達(dá)72-74
• 2. Western blot分析細(xì)胞內(nèi)P-gp的表達(dá)74-76
• 討論與小結(jié)76-78
• 第四章 聚合物膠束共轉(zhuǎn)運(yùn)阿霉素和siRNA的研究78-97
• 材料78-79
• 方法與結(jié)果79-95
• 一、siRNA-Dox-micell理化性質(zhì)的考察79-81
• 1. siRNA-Dox-micelle的制備與表征79-80
• 2. siRNA-Dox-micelle穩(wěn)定性考察80-81
• 二、siRNA-Dox-micelle的細(xì)胞攝取特性81-86
• 1. 雙色流式細(xì)胞術(shù)考察Dox和siRNA的共轉(zhuǎn)運(yùn)81-82
• 2. 激光共聚焦顯微鏡觀察Dox-siRNA-micelle在細(xì)胞內(nèi)的攝入與分布82-83
• 3. 活細(xì)胞工作站觀察Dox-siRNA-micelle在細(xì)胞內(nèi)的累積與分布83-84
• 4. 定量測(cè)定Dox在細(xì)胞內(nèi)的攝取動(dòng)力學(xué)84-86
• 三、Dox-siRNA-micell的體外藥效學(xué)考察86-91
• 1. MTT法考察給藥時(shí)間間隔及siRNA濃度對(duì)體外藥效學(xué)的影響86-88
• 2. MTT法考察不同Dox制劑的細(xì)胞毒性88-90
• 3. 激光共聚焦顯微鏡和流式細(xì)胞儀考察細(xì)胞內(nèi)Dox的累積90-91
• 四、體內(nèi)藥效學(xué)與靶向性考察91-95
• 1. siRNA-Dox-micelle的體內(nèi)藥效學(xué)91-93
• 2. 近紅外小動(dòng)物成像研究siRNA-Dox-micelle的體內(nèi)靶向性93-95
• 討論與小結(jié)95-97
• 全文總結(jié)97-100
• 參考文獻(xiàn)100-112
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文與其它112-114
• 英文縮略詞表114-115
• 致謝115-116

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  本文關(guān)鍵詞：三嵌段聚合物膠束共轉(zhuǎn)運(yùn)阿霉素和siRNA用于逆轉(zhuǎn)耐藥和協(xié)同抗癌的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：287175