【摘要】：目的研究模擬微重力條件下培養(yǎng)的小鼠早期胚胎體外發(fā)育與1g重力條件下體外發(fā)育的差異。方法檢測葡萄糖代謝關(guān)鍵酶6-磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PD)在昆明小鼠早期胚胎體外不同重力條件下培養(yǎng)各個時期基因的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)。結(jié)果模擬微重力培養(yǎng)條件下,胚胎體外發(fā)育受到明顯的抑制,模擬微重力不利于小鼠胚胎的體外發(fā)育。用CZB+10%FCS進(jìn)行培養(yǎng),2-細(xì)胞期培養(yǎng)的囊胚率為零,顯著低于常規(guī)培養(yǎng)的23.92%;4-細(xì)胞期培養(yǎng)的囊胚率為18.44%,顯著低于常規(guī)培養(yǎng)的80.12%。利用G6PD的內(nèi)、外兩對引物,檢測昆明小鼠早期胚胎體外發(fā)育各個階段的G6PD基因的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)。從2-細(xì)胞期開始體外常規(guī)培養(yǎng)的胚胎,發(fā)育至4-、8-細(xì)胞胚胎、桑椹胚、囊胚及退化囊胚都有G6PD基因的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)。在模擬微重力條件下,從2-細(xì)胞期開始培養(yǎng)的胚胎,發(fā)育至4-細(xì)胞期、桑椹期、囊胚期胚胎和退化桑椹胚皆有G6PD基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá),而退化的2-細(xì)胞胚胎沒有檢測到G6PD基因的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)。結(jié)論兩種培養(yǎng)方式之間,G6PD基因的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)不存在差異,說明早期胚胎都存在磷酸戊糖途徑。
【圖文】：

可見從22細(xì)胞期開始體外常規(guī)培養(yǎng)的胚胎,早期胚胎42細(xì)胞、82細(xì)胞、桑椹胚、囊胚都可擴(kuò)增出一條378bp的特異性條帶(見圖1)。說明體外培養(yǎng)的胚胎從42細(xì)胞到囊胚期皆有G6PD基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá),亦表達(dá)G6PD�！　⌒∈�22細(xì)胞期胚胎開始在模擬微重力條件下進(jìn)行體外培養(yǎng),各期胚胎通過巢式RT2PCR擴(kuò)增實驗檢測G6PD的表達(dá)情況,可見早期22細(xì)胞開始培養(yǎng),體外退化的22細(xì)胞胚胎沒有擴(kuò)增出特異性條帶;發(fā)育到42細(xì)胞期、桑椹期、囊胚期(4細(xì)胞開始培養(yǎng))的胚胎都可擴(kuò)增出一條378bp的特異性條帶,退化桑椹胚(細(xì)胞出現(xiàn)碎片、囊胚腔縮圖1　巢式RT2PCR擴(kuò)增1g重力條件下昆明小鼠體外培養(yǎng)早期胚胎G6PD的結(jié)果Fig.1　Results of expressions of G6PD by nested RT2PCR in Kunm ing early embryos cultured undernormal gravityLane127: negative contro,l m ouse liverRNA as positivecontro,l42cell embryos

m ouse liverRNA as positivecontro,l42cell embryos,82cell embryos, m orula, blas2tocyst, degenerate blastocyst小等)亦擴(kuò)增出一條378bp的特異性條帶(圖2)。說明體外發(fā)育42細(xì)胞、桑椹胚、囊胚期胚胎和退化桑椹胚皆有G6PD基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá),而在體外退化的22細(xì)胞期胚胎(細(xì)胞出現(xiàn)大量碎片、體積縮小)檢測不到G6PD基因的轉(zhuǎn)錄。圖2　巢式RT2PCR擴(kuò)增模擬微重力條件下昆明小鼠體外培養(yǎng)早期胚胎G6PD的結(jié)果Fig.2　Results of expressions of G6PD by nested RT2PCR in Kunm ing early embryos cultured undersimulated m icrogravityLane127: negative contro,l m ouse liverRNA as positivecontro,l degenerate22cell embryos,42cell embryos,m orula, blastocyst, degenerate m orula討　論模擬微重力條件下小鼠胚胎的旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)　模擬微重力條件下

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

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本文編號：2565625