本文選題：模擬失重 + 大鼠��； 參考：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2008年博士論文

【摘要】： 研究背景和目的:隨著對(duì)外層空間探索活動(dòng)的不斷高漲,航天醫(yī)學(xué)從無(wú)到有、迅速發(fā)展。太空資源的開(kāi)發(fā)和利用亦是國(guó)家整體利益的延伸。雖然倡導(dǎo)和平利用空間資源,但已經(jīng)出現(xiàn)的太空競(jìng)爭(zhēng)將日趨激烈。我國(guó)“神舟”系列載人航天飛行的成功以及建立空間站、“嫦娥工程”等后續(xù)重大任務(wù)對(duì)航天醫(yī)學(xué)提出了更高更緊迫的要求。 我國(guó)航天醫(yī)學(xué)研究起始于20世紀(jì)50年代末期。60年代中期探空生物火箭(cosmos biosatellite)的成功發(fā)射是中國(guó)空間科學(xué)探測(cè)邁開(kāi)的第一步,也是我國(guó)航天醫(yī)學(xué)的實(shí)際開(kāi)端和載人航天的前奏。我國(guó)先后組建“宇宙醫(yī)學(xué)研究室”(1958)、“航天醫(yī)學(xué)工程研究所”(1968)、第四軍醫(yī)大學(xué)航空航天醫(yī)學(xué)系(1999)和“中國(guó)航天員科研訓(xùn)練中心”(2005)。國(guó)內(nèi)航天醫(yī)學(xué)研究最初主要集中在失重心血管生理學(xué)方面,隨著系統(tǒng)平臺(tái)的構(gòu)建,科學(xué)研究工作不斷深入,進(jìn)行了較為系統(tǒng)的涉及多系統(tǒng)的失重生理學(xué)研究,并從單純觀測(cè)失重對(duì)機(jī)體的影響上升到機(jī)理探討和失重防護(hù)措施的研究,為我國(guó)航天醫(yī)學(xué)發(fā)展奠定了良好的基礎(chǔ)。在掌握載人航天飛行技術(shù)之后,我國(guó)航天工程將逐步進(jìn)入到空間站時(shí)代,航天醫(yī)學(xué)也將面臨如何保障航天員在太空環(huán)境中長(zhǎng)期生活的問(wèn)題,研究重心將會(huì)更多集中于長(zhǎng)期生命保障系統(tǒng)的研究和應(yīng)用。 相較美國(guó)和俄羅斯(前蘇聯(lián)),我國(guó)涉足外層空間所用時(shí)間短,發(fā)展步伐快。但是,雖有6名宇航員進(jìn)入過(guò)太空,但生命系統(tǒng)在太空環(huán)境中的醫(yī)學(xué)研究尚屬空白,相關(guān)的研究工作基本為地面模擬失重狀態(tài)下進(jìn)行。對(duì)心血管系統(tǒng)、血液系統(tǒng)、肌肉骨骼系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等做了較多的研究工作,而對(duì)消化系統(tǒng)失重生理病理學(xué)的研究十分局限,迄今國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)有關(guān)失重和模擬失重環(huán)境下肝臟生理和病理研究的報(bào)道。 本研究依據(jù)目前國(guó)內(nèi)航天醫(yī)學(xué)的現(xiàn)狀而設(shè)立課題,進(jìn)行模擬失重動(dòng)物實(shí)驗(yàn),觀察微重力環(huán)境對(duì)肝臟應(yīng)激反應(yīng)及超微結(jié)構(gòu)變化的影響。 研究方法:(1)選用清潔級(jí)成年健康雄性Wistar大鼠,適應(yīng)飼養(yǎng)1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。依照陳杰等設(shè)計(jì)的尾懸吊法(tail-suspension)建立模擬失重大鼠模型。各時(shí)相點(diǎn)實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),腹腔注射戊巴比妥鈉(45 mg/kg)將實(shí)驗(yàn)及對(duì)照動(dòng)物麻醉,無(wú)菌操作,剖腹取材。(2)實(shí)驗(yàn)一:Wistar大鼠48只,隨機(jī)分為6組:模擬失重6 h組、模擬失重12 h組、模擬失重24 h組、模擬失重48 h組、模擬失重96 h組以及地面對(duì)照組(0 h)。應(yīng)用RT-PCR和Western blot技術(shù)分別檢測(cè)大鼠肝組織Hsp70 mRNA和Hsp70蛋白表達(dá)。(3)實(shí)驗(yàn)二:Wistar大鼠84只,隨機(jī)分為模擬失重組和對(duì)照組,每組又分別設(shè)1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d及7 d共7個(gè)時(shí)相點(diǎn),每時(shí)相點(diǎn)模擬失重和同步對(duì)照各6只大鼠。應(yīng)用Western blot半定量檢測(cè)懸吊大鼠肝臟NF-κB p65蛋白水平的變化,同時(shí)進(jìn)行NF-κB p65的免疫組化PV-6001分析。(4)實(shí)驗(yàn)三:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組同實(shí)驗(yàn)二。TUNEL法原位檢測(cè)模擬失重大鼠肝組織中凋亡細(xì)胞,免疫組化檢測(cè)大鼠肝組織p53表達(dá),透射電鏡觀察肝組織超微結(jié)構(gòu)。 結(jié)果:(1) RT-PCR和Western blot分析顯示大鼠肝臟在微重力環(huán)境中發(fā)生明顯的應(yīng)激反應(yīng);失重大鼠肝臟Hsp70和Hsp70mRNA表達(dá)水平較對(duì)照組明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);Hsp70蛋白和基因在模擬失重6 h和12 h分別達(dá)高峰,而后其表達(dá)均下調(diào)。(2)肝組織中NF-κB的Western blot分析結(jié)果表明,各實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組大鼠肝臟組織中均可檢測(cè)到70 kDa的NF-κB表達(dá)。與對(duì)照組比較,模擬失重1 d組大鼠肝臟組織中NF-κB蛋白水平顯著升高,并形成高峰,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。NF-κB蛋白表達(dá)水平隨懸吊時(shí)間延長(zhǎng)而呈下降趨勢(shì)。免疫組化結(jié)果顯示NF-κB陽(yáng)性產(chǎn)物主要見(jiàn)于實(shí)驗(yàn)大鼠的肝細(xì)胞內(nèi),亦見(jiàn)于炎細(xì)胞及Kupffer細(xì)胞內(nèi);可分為胞漿型、核型、核漿型等三個(gè)類型;肝細(xì)胞核型表達(dá)中,可見(jiàn)全核及局部碎點(diǎn)狀陽(yáng)性者,且主要位于核仁區(qū)。(3) TUNEL檢測(cè)結(jié)果顯示,各組懸尾大鼠肝組織中均可見(jiàn)陽(yáng)性染色細(xì)胞,胞核呈黃棕色顆粒,少數(shù)胞漿淡染;2 d組最為明顯,其后逐漸減少,6 d和7 d組凋亡細(xì)胞指數(shù)與對(duì)照組無(wú)顯著差異。PV-6001染色結(jié)果顯示,p53陽(yáng)染顆粒均位于細(xì)胞核內(nèi),為顆粒狀、彌漫性或混合型等多種表現(xiàn),懸吊早期大鼠肝組織中p53表達(dá)陽(yáng)性指數(shù)明顯高于對(duì)照組(P0.05),1 d組最為明顯,懸吊后期和對(duì)照組標(biāo)本中見(jiàn)少量陽(yáng)性染色細(xì)胞。電鏡下可見(jiàn)模擬失重大鼠肝細(xì)胞染色質(zhì)濃縮邊集,線粒體腫脹,嵴斷裂或消失,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張,胞質(zhì)內(nèi)脂滴,出現(xiàn)凋亡小體等現(xiàn)象。上述超微結(jié)構(gòu)改變?cè)趯?shí)驗(yàn)組大鼠懸吊早期階段比較明顯。 結(jié)論:(1)失重和模擬失重是一種能誘導(dǎo)大鼠肝臟Hsp70和Hsp70mRNA快速表達(dá)的典型應(yīng)激原。(2)模擬失重早期大鼠肝組織NF-κB高表達(dá)及其在核仁功能區(qū)形態(tài)特征說(shuō)明失重導(dǎo)致NF-κB應(yīng)激活化,對(duì)靶基因在失重應(yīng)激及適應(yīng)過(guò)程中的信息轉(zhuǎn)錄可能產(chǎn)生影響。(3)模擬失重導(dǎo)致大鼠肝臟超微結(jié)構(gòu)改變,肝細(xì)胞凋亡增加,并伴有肝細(xì)胞壞死。p53在模擬失重早期即參與了肝細(xì)胞的凋亡過(guò)程,具體機(jī)制有待探討。肝臟失重應(yīng)激損傷的減輕和較快恢復(fù)說(shuō)明機(jī)體在應(yīng)激反應(yīng)過(guò)程中迅速發(fā)揮了代償和適應(yīng)機(jī)能。(4)本研究初步揭示了模擬失重因素對(duì)肝臟造成的應(yīng)激反應(yīng)及可能的作用機(jī)制和特點(diǎn),對(duì)進(jìn)一步探討失重特殊訓(xùn)練及航天飛行實(shí)踐中航天員的應(yīng)激適應(yīng)和耐力提高機(jī)制以及擬定保健策略等方面均具有重要意義,并為后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:The research background and purpose : With the increasing expansion of exploration activities in outer space , space medicine has developed rapidly . The development and utilization of space resources is also an extension of the whole national interest . While promoting the peaceful uses of space resources , the space competition has become more and more intense . The success of the manned space flight in our country and the establishment of the space station , and the follow - up major tasks such as the " Chang ' e Project " have put forward higher and more urgent requirements for space medicine .



The research of space science in China began in the late 1950s . The successful launch of the mid - 1960s exploration biological rocket was the first step in China ' s space science exploration .



Compared with the United States and Russia ( the former Soviet Union ) , the time used in outer space of our country is short and the pace of development is fast . However , although six astronauts have entered space , the medical research of life system in the space environment is still blank , and the related research work is basically carried out under the condition of ground simulation .



Based on the present situation of domestic aerospace medicine , this study was established to study the effects of micro - gravity environment on stress response and ultrastructural changes of liver .



Methods : ( 1 ) Male Wistar rats were randomly divided into 6 groups : simulated weight loss 6 h group , simulated weight loss 12 h group , simulated weight loss 24 h group , simulated weight loss 48 h group , simulated weight loss 96 h group and ground control group ( 0 h ) . The expression of Hsp70 mRNA and Hsp70 protein in liver tissues of rats was detected by RT - PCR and Western blot . ( 3 ) The experimental results showed that 84 Wistar rats were randomly divided into two groups : one d , 2 d , 3 d , 4 d , 5 d , 6 d and 7 d .



Results : ( 1 ) The expression of NF - 魏B in liver tissues of rats was significantly higher than that in control group ( P0.05 ) .



Conclusion : ( 1 ) Loss and simulated weight loss is a typical stressor that can induce the rapid expression of Hsp70 and Hsp70 mRNA in rat liver .
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R85

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 孫會(huì)品,孫喜慶,王冰,姚永杰,耿捷,石菲;間斷性頭高位45°對(duì)模擬失重兔頸靜脈及腸系膜靜脈順應(yīng)性的影響[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2005年05期

2 楊文軍;余正平;張啟瑜;宋其同;梁華平;徐祥;朱冠保;施紅旗;蔣飛照;;核因子-κB活性在創(chuàng)傷性炎癥大鼠肝臟損傷中的變化及其意義[J];肝膽胰外科雜志;2006年01期

3 張虹,汪濤,陳建和,溫秀蘭,鐘萍,宋錦平;尾部懸吊對(duì)小鼠胸腺細(xì)胞凋亡的影響[J];航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程;2001年04期

4 周熙成,陳斌,曹平;特殊的航天食品:微生態(tài)保健食品[J];航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程;2003年S1期

5 徐志鵬;孫喜慶;劉挺松;吳斌;張舒;薛月英;;模擬飛船應(yīng)急返回時(shí)+Gx暴露后大鼠腦組織細(xì)胞凋亡的研究[J];航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程;2006年01期

6 張靜雪;魏西平;;中國(guó)首批生物火箭發(fā)射實(shí)驗(yàn)——狗的四大生理指標(biāo)綜合結(jié)果[J];航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程;2008年01期

7 沈羨云;王林杰;;我國(guó)失重生理學(xué)研究進(jìn)展[J];航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程;2008年03期

8 郭志峰;李勇枝;蓋宇清;;載人航天實(shí)施醫(yī)學(xué)的建設(shè)與發(fā)展[J];航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程;2008年03期

9 王瑞安，，蔡文琴，蘇慧慈，張立藩，丁兆平;尾吊大鼠胃竇部胃泌素、生長(zhǎng)抑素、5－羥色胺和嗜鉻顆粒素A免疫反應(yīng)細(xì)胞的變化[J];航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程;1995年01期

10 王俊鋒 ,劉長(zhǎng)庭 ,王德龍;尾懸吊模擬失重大鼠肺組織細(xì)胞凋亡調(diào)控基因的研究[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2002年11期

本文編號(hào)：1947534