本文關(guān)鍵詞：菲律賓蛤仔酶解寡肽抗氧化活性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《浙江海洋學(xué)院》 2013年

菲律賓蛤仔酶解寡肽抗氧化活性研究

李榮  

【摘要】：氧化反應(yīng)在許多生物體中是一種重要的生物進程，自由基作為氧化反應(yīng)的產(chǎn)物，非常不穩(wěn)定，，可能導(dǎo)致DNA或蛋白質(zhì)損傷，進而引發(fā)多種疾病，包括癌癥，阿爾茲海默氏癥以及其他神經(jīng)性疾病。盡管合成的抗氧化物具有良好的抗氧化活性，但因其潛在的毒性和副作用，消費者對這些抗氧化物的抵抗越來越強，因此，從自然資源中開發(fā)抗氧化物成為新的研究熱點。 本實驗采用酶解法制備菲律賓蛤仔酶解肽，酶解工藝通過正交試驗方案進行優(yōu)化，以最佳酶解條件制備酶解粗提物，粗提物經(jīng)過分離純化，氨基酸序列分析，結(jié)構(gòu)表征分析等得到酶解寡肽純化物；從體外和小鼠體內(nèi)實驗兩方面對菲律賓蛤仔酶解寡肽的抗氧化活性進行研究。具體有如下幾個部分。 第一部分，菲律賓蛤仔酶解寡肽的制備 首先將菲律賓蛤仔肌肉組織勻漿，利用胰蛋白酶酶解，采用正交實驗設(shè)計，以DPPH清除力為指標(biāo)，對活性肽的酶解制備工藝進行優(yōu)化，得出最佳酶解條件為物料比1:2，加酶量2000U/g，pH為8，酶解溫度為40℃，酶解時間12h。在此酶解條件下制備酶解物，利用超濾法將酶解物按分子量大小分成四個組分，收集抗氧化活性最強組分，濃縮后冷凍干燥，干燥物經(jīng)G-25凝膠分離得到六個洗脫峰，收集抗氧化活性最高的峰，濃縮、冷凍干燥后經(jīng)反相高效液相梯度洗脫進一步分離得到三個洗脫峰，選取最強抗氧化活性組分收集，高效液相檢測得出該提取物為單一組分，氨基酸序列分析得其序列為Gly-Asp-Gln-Gln-Lys，分子量為575.45Da。 第二部分，體外研究菲律賓蛤仔酶解寡肽抗氧化活性 1、采用分光光度法測定寡肽對2,2′-連氮基-雙-（3-乙基苯并二氫噻唑啉-6-磺酸）二銨鹽（ABTS）自由基、超氧陰離子（O2-·）、羥自由基（·OH）、DPPH自由基的清除能力，還原力和寡肽的金屬離子螯合能力，結(jié)果發(fā)現(xiàn)菲律賓蛤仔酶解寡肽具有較顯著的ABTS自由基（半數(shù)有效濃度（EC50）0.204g.L-1）、羥自由基（EC500.815g.L-1）、超氧陰離子自由基（EC500.066g.L-1）清除能力、還原力和金屬離子螯合能力（EC501.554g.L-1）。 2、瓊脂糖凝膠電泳檢測寡肽對羥自由基誘導(dǎo)的DNA損傷的保護作用。結(jié)果顯示，與空白組（Blank）相比，對照組（Control）中超螺旋結(jié)構(gòu)的DNA幾乎完全消失并轉(zhuǎn)化為開環(huán)結(jié)構(gòu)，而加樣組（1.25mg/mL,2.5mg/mL和5mg/mL）大部分DNA仍以超螺旋結(jié)構(gòu)存在，小部分DNA被損傷形成開環(huán)結(jié)構(gòu)DNA。說明寡肽對羥自由基誘導(dǎo)的DNA損傷顯示出有效地保護作用，并且保護作用隨濃度的升高而增強。 3、四甲基偶氮唑藍（MTT）法檢測寡肽對腫瘤細(xì)胞DU-145和人體正常前列腺細(xì)胞RWPE-1的增殖抑制效應(yīng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，寡肽對前列腺癌DU-145細(xì)胞具有明顯的增殖抑制作用（IC505.202mg/mL），并呈良好的量效關(guān)系。且人體正常前列腺細(xì)胞RWPE-1細(xì)胞毒性檢測結(jié)果表明，寡肽對RWPE-1細(xì)胞無增殖抑制作用。 第三部分，菲律賓蛤仔酶解寡肽體內(nèi)抗氧化活性研究 ICR雄性小鼠隨機分成四組，分別灌服高、中、低劑量寡肽和生理鹽水。連續(xù)給藥30d后，心臟采血及組織取樣，用試劑盒測定小鼠血清、腦、肝臟組織中超氧化歧化酶（superoxide dismutase, SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活力和丙二醛（malondialdehyde, MDA）含量。結(jié)果顯示，菲律賓蛤仔酶解寡肽可有效提高小鼠體內(nèi)SOD和GSH-Px活力，并降低MDA含量，表明寡肽具有小鼠體內(nèi)抗氧化活性。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：浙江海洋學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：S917.4;R96
【目錄】：

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3 萬慧一;菲律賓蛤仔（Ruditapes philippinarum）抑菌酶解物的制備與作用機理研究[D];青島大學(xué);2012年

4 隨建強;菲律賓蛤仔堿性磷酸酶的分離純化和性質(zhì)研究[D];中國海洋大學(xué);2012年

5 高萍;石油脅迫對菲律賓蛤仔的生物有效性及毒性效應(yīng)研究[D];中國海洋大學(xué);2013年

6 鞏秀玉;壬基酚對波紋巴非蛤和菲律賓蛤仔的毒性效應(yīng)[D];上海海洋大學(xué);2012年

7 付姍姍;菲律賓蛤仔（Ruditapes philippinarum）養(yǎng)殖水域底棲食物網(wǎng)動態(tài)變化過程的研究[D];中國海洋大學(xué);2013年

8 高鷹;海水銅鉛及環(huán)境因子對菲律賓蛤仔生物標(biāo)志物的影響研究[D];中國海洋大學(xué);2011年

9 王曉紅;菲律賓蛤仔生態(tài)遺傳學(xué)研究[D];遼寧師范大學(xué);2003年

10 陶顏霞;菲律賓蛤仔（Venerupis philippinarum）在硫丹脅迫下毒性效應(yīng)與分子生物標(biāo)志物的研究[D];中國海洋大學(xué);2013年

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本文編號：151038