發(fā)布時(shí)間：2017-12-23 12:41

  本文關(guān)鍵詞：谷氨酸脫羧酶在急性腦型氧中毒中的快速變化　出處：《青島大學(xué)》2005年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 高壓氧 氧中毒 氧化損傷 谷氨酸脫羧酶 γ-氨基丁酸

【摘要】：高壓氧在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用越來越廣泛,但是在特殊的環(huán)境下,例如在氧飽和潛水發(fā)生事故時(shí)可導(dǎo)致急性腦型氧中毒,發(fā)生氧驚厥。對(duì)氧驚厥發(fā)病機(jī)制目前較為公認(rèn)的有以下幾種假說:腦血流量改變學(xué)說,氧自由基學(xué)說,酶抑制學(xué)說,氨基酸遞質(zhì)失衡學(xué)說,但確切機(jī)制至今尚無定論。γ-氨基丁酸(GABA)是腦內(nèi)的主要抑制性神經(jīng)遞質(zhì),而谷氨酸脫羧酶(GAD)是GABA合成過程中的關(guān)鍵酶。在所有產(chǎn)生或降解神經(jīng)遞質(zhì)的酶中,GAD是迄今為止發(fā)現(xiàn)的高分壓氧暴露時(shí)活性受抑制最明顯的酶,所以研究GAD的變化對(duì)闡明氧中毒的發(fā)生機(jī)制具有特殊的意義。有試驗(yàn)證實(shí),體外高分壓氧暴露會(huì)造成GAD活性降低。為了在細(xì)胞和分子層面系統(tǒng)性的研究GAD在氧驚厥的發(fā)生發(fā)展中的變化及其意義,我們建立了原代海馬神經(jīng)元培養(yǎng)方法,進(jìn)行了一系列的試驗(yàn): 1.培養(yǎng)新生SD大鼠海馬神經(jīng)元,觀察一定時(shí)程的高分壓氧對(duì)海馬神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)損害。 2.采用不同的高壓氧暴露方案,采用5ATA高壓氧;120分鐘,及采用微量液體,10,20,30分鐘,分別檢測(cè)即刻和24小時(shí)后的細(xì)胞存活率(MTT比色法)。 3.檢測(cè)高壓氧暴露前后神經(jīng)元內(nèi)GAD含量的變化。(采用Western Blotting和免疫熒光的方法);同時(shí)檢測(cè)高壓氧暴露成年SD大鼠海馬區(qū)GAD含量的變化(采用Western Blotting的方法),并分型檢測(cè)。 4.檢測(cè)高壓氧暴露前后神經(jīng)元內(nèi)GAD mRNA表達(dá)的變化(采用rtPCR的方法)。 5.檢測(cè)高壓氧暴露前后神經(jīng)元內(nèi)GAD活性的變化(采用HPLC法)。 6.檢測(cè)高壓氧暴露前后神經(jīng)元內(nèi)外GABA的變化(采用HPLC法)。 我們的試驗(yàn)結(jié)果如下: 1.一定壓力時(shí)程的高壓氧暴露可導(dǎo)致神經(jīng)元形態(tài)學(xué)損傷。 2.分別檢測(cè)高壓氧暴露后即刻和24小時(shí)后的細(xì)胞存活率(MTT比色法)。結(jié)果在即刻組均無存活率降低,而24h組細(xì)胞存活率下降。 3.高壓氧暴露后,神經(jīng)元內(nèi)的GAD含量降低。使用分別抗GAD65、GAD67的單抗發(fā)現(xiàn)隨高壓氧暴露發(fā)生變化的是GAD67。動(dòng)物試驗(yàn)證明高壓氧暴露SD大鼠海馬區(qū)GAD67含量有所變化,在驚厥發(fā)作前升高到一個(gè)峰值,隨后降低,驚厥發(fā)作后約降至正常水平。 4.GAD67 mRNA表達(dá)明顯增多,與此同時(shí)檢測(cè)GAD65 mRNA無明顯變化。 5.GAD活性在10,20,30分鐘組有一個(gè)先升高,后降至正常的趨勢(shì)。在2h組GAD活性降低至約正常的50%左右。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R84

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 柳林,呂文山,董硯虎;高純度GAD的制備及對(duì)診斷1型糖尿病的價(jià)值[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).內(nèi)分泌學(xué)分冊(cè);2001年03期

2 李金蓮,董玉琳,龐有旺;大鼠三叉神經(jīng)中腦核內(nèi)GAD樣陽(yáng)性終末與PAG和GABA_A 受體α3亞單位陽(yáng)性共存神經(jīng)元的聯(lián)系[J];解剖學(xué)報(bào);2003年01期

3 袁仕善,周智廣;谷氨酸脫羧酶若干研究進(jìn)展[J];生理科學(xué)進(jìn)展;1998年01期

4 田發(fā)發(fā),謝光潔,楊期東,陳主初,呂冰清;點(diǎn)燃癲癇模型中顳區(qū)腦組織GAD基因表達(dá)的研究[J];中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志;2002年03期

5 楊金奎,陳家偉,何戎華;從豬腦中提取純化谷氨酸脫羧酶的研究[J];中華內(nèi)分泌代謝雜志;1999年04期

6 何小華,阮旭中,王偉;戊四氮所致慢性癲癇發(fā)病過程中谷氨酸脫羧酶基因表達(dá)的研究[J];卒中與神經(jīng)疾病;2001年02期

7 王偉,張建民,屈伸;癲癇狀態(tài)大鼠海馬HSP_(70) mRNA及GAD_(67) mRNA表達(dá)水平的研究[J];卒中與神經(jīng)疾病;2001年03期

，

本文編號(hào)：1323921