本文關(guān)鍵詞：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激—自噬途徑介導(dǎo)apelin-13誘導(dǎo)大鼠H9c2心肌細(xì)胞肥大研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《南華大學(xué)》 2014年

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激—自噬途徑介導(dǎo)apelin-13誘導(dǎo)大鼠H9c2心肌細(xì)胞肥大研究

謝鳳  

【摘要】：目的：Apelin為G蛋白偶聯(lián)受體APJ的內(nèi)源性配體，具有促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖，，促進(jìn)單核細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞粘附等作用。本實驗室前期研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，apelin-13可以誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大，且PI3K-Akt-ERk1/2-p70S6K信號途徑和PI3K-自噬途徑均介導(dǎo)了apelin-13誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大過程。本課題擬研究apelin-13對NOX4的表達(dá)及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響，并在前期研究的基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討apelin-13誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激-自噬機(jī)制，揭示apelin-13誘導(dǎo)心肌肥厚的新的作用機(jī)制，為開發(fā)APJ為心血管藥物作用靶點提供新的理論依據(jù)。 方法: 1. Western Blot：檢測大鼠H9c2心肌細(xì)胞APJ, Bip, CHOP, LC3-II/I, beclin-1, p62,NOX4, β-Tubulin的表達(dá)； 2. SiRNA干擾: APJ shRNA干擾APJ的表達(dá)；Bip siRNA干擾Bip的表達(dá)；CHOPsiRNA干擾CHOP的表達(dá)； 3.免疫熒光標(biāo)記LC3及氯喹阻斷自噬體的降解，觀察自噬體的形成;或者使用GFP-LC3示蹤觀察自噬體的形成； 4. ER tracker-red熒光標(biāo)記內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，觀察內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形態(tài)； 5. ScepterTM手持式細(xì)胞計數(shù)器:測量大鼠H9c2心肌細(xì)胞直徑和體積； 6. BCA定量法：測定大鼠H9c2心肌細(xì)胞蛋白含量； 7. CCK-8試劑盒檢測apelin-13對細(xì)胞增殖的影響； 8. Hoechst33258染色檢測apelin-13對心肌細(xì)胞凋亡的影響； 結(jié)果： 1. Apelin-13濃度依賴（0-2μM）和時間依賴性（0-24h）促進(jìn)心肌細(xì)胞內(nèi)NOX4的表達(dá) 2. Apelin-13濃度依賴（0-2μM）和時間依賴性（0-24h）促進(jìn)心肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志蛋白Bip和CHOP的表達(dá)； 3. APJ shRNA抑制apelin-13（1μM）誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志蛋白Bip和CHOP的增加； 4. Apelin-13誘導(dǎo)原代心肌細(xì)胞自噬體的形成，APJ shRNA抑制apelin-13（1μM）誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞自噬標(biāo)志蛋白beclin1、LC3-II/I的表達(dá)增加； 5. NOX4抑制劑DPI阻斷apelin-13（1μM）誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志蛋白Bip和CHOP的增加； 6. NOX4抑制劑DPI阻斷apelin-13（1μM）誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞自噬標(biāo)志蛋白beclin1、LC3-II/I的表達(dá)增加和自噬降解蛋白p62的表達(dá)減少； 7.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑Salubrinal阻斷apelin-13誘導(dǎo)的beclin1和LC3-II/I的表達(dá)增加及p62的表達(dá)降低；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)劑Tunicamycin對apelin-13誘導(dǎo)的beclin1和LC3-II/I及p62表達(dá)均無影響;Bip siRNA和CHOP siRNA阻斷apelin-13誘導(dǎo)的beclin1和LC3-II/I的表達(dá)增加及p62的表達(dá)降低； 8. Apelin-13促進(jìn)H9c2心肌細(xì)胞中GFP-LC3在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上表達(dá)，提示可能發(fā)生了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)自噬； 9. APJ shRNA抑制apelin-13促大鼠H9c2心肌細(xì)胞直徑、體積增大和細(xì)胞內(nèi)蛋白含量增加作用；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑Salubrinal阻斷apelin-13促大鼠H9c2心肌細(xì)胞直徑、體積增大和細(xì)胞內(nèi)蛋白含量增加作用；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)誘導(dǎo)劑Tunicamycin增強(qiáng)apelin-13促大鼠H9c2心肌細(xì)胞直徑、體積增大和細(xì)胞內(nèi)蛋白含量增加作用；自噬抑制劑3MA也可以阻斷apelin-13促大鼠H9c2心肌細(xì)胞直徑、體積增大和細(xì)胞內(nèi)蛋白含量增加作用；Bip siRNA和CHOP siRNA同樣具有抑制apelin-13促大鼠H9c2心肌細(xì)胞直徑、體積增大和細(xì)胞內(nèi)蛋白含量增加的作用； 10. Apelin-13濃度依賴性（0-2μM）促進(jìn)心肌細(xì)胞增殖； 11. Apelin-13濃度依賴（0-2μM）和時間依賴性（0-24h）增加心肌細(xì)胞凋亡； 12.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑Salubrinal和自噬抑制劑3MA均可阻斷apelin-13促大鼠H9c2心肌細(xì)胞凋亡作用；Bip siRNA和CHOP siRNA抑制apelin-13促大鼠H9c2心肌細(xì)胞凋亡作用。 結(jié)論：NOX4-內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激-自噬途徑介導(dǎo)apelin-13促心肌細(xì)胞肥大和凋亡調(diào)節(jié)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R966
【目錄】：

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【參考文獻(xiàn)】

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9 姜志華;EPO對高糖環(huán)境下乳鼠心肌細(xì)胞肥大的影響[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2014年

10 吉麗敏;一氧化氮抑制AngⅡ誘導(dǎo)新生大鼠心肌細(xì)胞肥大反應(yīng)的機(jī)制[D];山西醫(yī)科大學(xué);2004年

  本文關(guān)鍵詞：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激—自噬途徑介導(dǎo)apelin-13誘導(dǎo)大鼠H9c2心肌細(xì)胞肥大研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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