本文關(guān)鍵詞：MiR-198、miR-203、miR-210、miR-34a對皮膚損傷修復(fù)過程中相關(guān)細胞功能影響的研究

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【摘要】：研究背景皮膚損傷修復(fù)是通過表皮干細胞的分化及增殖實現(xiàn)的,典型的皮膚損傷修復(fù)開始于角質(zhì)形成細胞從損傷邊緣的遷移,隨后的上皮再生過程還涉及損傷邊緣毛囊細胞的增殖及遷移。總的來說,損傷修復(fù)過程在某種程度上類似于發(fā)育,而且同腫瘤細胞具有相似的細胞生物學(xué)特性以及分子變化。在皮膚的眾多調(diào)控因子中,microRNA(mi RNA)是非常重要的一種。MiR-198近來被發(fā)現(xiàn)作為一種腫瘤抑制因子在機體內(nèi)發(fā)揮調(diào)控作用,其通過抑制細胞的有絲分裂和相關(guān)的運動通路實現(xiàn)對細胞增殖的抑制,但是mi R-198在非腫瘤細胞或組織中對細胞增殖的抑制仍然少有研究。MiR-203是一種上皮組織特異性表達的miRNA,不僅參與皮膚發(fā)育,還具有抑癌和促凋亡作用。MiR-210是一種存在于多種組織細胞中的重要的缺氧相關(guān)mi RNA,其表達廣泛參與了細胞的增殖、線粒體呼吸、DNA損傷修復(fù)、血管生成等病理生理過程。Mi R-34a是目前研究較多的腫瘤相關(guān)mi RNA。皮膚染毒的防治一直是芥子氣(硫芥)研究的重點。角質(zhì)形成細胞,尤其是基底層的表皮細胞是硫芥作用的主要靶細胞。硫芥損傷皮膚的機制尚未完全研究清楚,還沒有見到miRNA參與硫芥損傷的研究。研究內(nèi)容1、研究硫芥染毒人永生化角質(zhì)形成細胞Ha CaT后,miR-198的表達變化。通過改變細胞內(nèi)miR-198的表達研究其對HaCa T細胞增殖及細胞周期的影響,通過生物信息學(xué)預(yù)測手段尋找miR-198新的可能的結(jié)合靶點,用熒光素酶報告基因進行驗證,并研究該靶點是否參與細胞增殖及細胞周期調(diào)控。研究mi R-198及其新靶點對HaCaT細胞的遷移和粘附能力的影響,利用生物信息學(xué)手段并結(jié)合實驗研究對mmu-mi R-198進行預(yù)測和實驗驗證。2、研究硫芥染毒HaCa T細胞以及SKH-1無毛小鼠后,miR-203在細胞及染毒皮膚組織中的表達改變。在細胞水平上,研究mi R-203對細胞增殖和遷移能力的影響,及其應(yīng)對硫芥損傷的能力。在動物模型中,研究mir-203的表達改變對小鼠皮膚切割傷、硫芥染毒損傷修復(fù)的影響,以及mir-203的表達改變是否對硫芥造成的骨髓和腸道損傷具有保護效應(yīng)。通過對臨床病例研究的收集整理,明確mir-203甲基化在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的作用,分析mir-203作為腫瘤病人診斷和預(yù)后生存時間的預(yù)測標(biāo)志物的可能性。3、研究硫芥染毒hacat細胞以及skh-1無毛小鼠后,mir-210在細胞及染毒皮膚組織中的表達改變。在細胞水平上,研究mir-210對細胞增殖和遷移能力的影響。在動物模型中,研究mir-210的表達改變對小鼠皮膚切割傷、硫芥染毒損傷修復(fù)的影響,以及mir-210的表達改變是否對硫芥造成的骨髓和腸道損傷具有保護效應(yīng)。通過對臨床病例研究的收集整理,明確mir-210作為腫瘤病人預(yù)后生存時間的預(yù)測標(biāo)志物的可能性。4、通過對臨床病例研究的收集整理,明確mir-34a作為腫瘤病人預(yù)后生存時間的預(yù)測標(biāo)志物的可能性。研究結(jié)果1、硫芥染毒人永生化角質(zhì)形成細胞hacat后,mir-198的表達出現(xiàn)顯著上調(diào)。瞬時轉(zhuǎn)染mir-198進入hacat細胞抑制了細胞增殖,細胞周期阻滯于g1期。生物信息學(xué)預(yù)測顯示細胞周期蛋白d2(cyclingd2,ccnd2)是mir-198的一個新的靶點,熒光素酶報告基因檢測結(jié)果提示,mir-198可以直接結(jié)合在ccnd2的3‘非編碼區(qū)(3?-untranslatedregions,3‘-utr),下調(diào)細胞內(nèi)ccnd2的mrna和蛋白表達。而細胞內(nèi)ccnd2水平的下調(diào)顯著抑制了細胞增殖,并導(dǎo)致了細胞周期的g1期阻滯。另外,mir-198促進了hacat細胞的遷移和粘附能力,而ccnd2的下調(diào)并未顯示相同的促遷移作用。利用生物信息學(xué)手段對mmu-mir-198的預(yù)測沒有取得預(yù)期的結(jié)果。2、mir-203在硫芥染毒的hacat細胞內(nèi)表達變化并不顯著,但在硫芥染毒小鼠皮膚組織中,mir-203在染毒后的不同時間以及不同部位均出現(xiàn)了顯著的表達變化。mir-203在細胞水平上具有的促進細胞增殖和遷移的作用可能參與了小鼠皮膚組織中表皮細胞的損傷修復(fù)。在硫芥染毒小鼠的皮膚內(nèi)上調(diào)mir-203的表達雖然并沒有顯著的促進皮膚損傷修復(fù),但相應(yīng)的下調(diào)mir-203的表達卻顯著的抑制了皮膚的損傷修復(fù),而對于皮膚染毒的小鼠骨髓和小腸,mir-203的干預(yù)均出現(xiàn)了明顯的保護效應(yīng)。臨床病例研究提示mir-203甲基化參與了部分腫瘤內(nèi)mir-203表達的變化,而基于目前的研究現(xiàn)狀,mir-203作為腫瘤病人診斷和預(yù)后生存時間的預(yù)測標(biāo)志物,并不令人滿意。3、mir-210在硫芥染毒的hacat細胞中表達出現(xiàn)顯著上調(diào),過表達mir-210抑制了細胞的增殖和遷移,而抑制mi R-210則出現(xiàn)相反的效應(yīng)。硫芥染毒小鼠的皮膚組織中,mi R-210的表達在損傷后的不同時間均出現(xiàn)顯著上調(diào)。在硫芥染毒的小鼠皮膚中下調(diào)miR-210的表達不僅顯著的促進了皮膚早期以及中期的損傷修復(fù),也保護了染毒小鼠的骨髓和小腸。臨床的病例研究提示,miR-210在多種腫瘤組織中出現(xiàn)表達變化,其高表達預(yù)示了腫瘤病人較差的預(yù)后生存時間。4、Mi R-34a在多種腫瘤組織中均有顯著的表達變化。多數(shù)的研究證實了其高表達可以預(yù)測腫瘤病人較好的預(yù)后生存,而也有部分研究提出了相反的結(jié)論。通過meta分析,我們認為miR-34a在部分腫瘤中的高表達可以預(yù)測腫瘤病人較好的預(yù)后生存。研究結(jié)論硫芥染毒人永生化角質(zhì)形成細胞HaCa T后,mi R-198、mi R-210的表達出現(xiàn)顯著上調(diào),mi R-203的表達變化不顯著。mi R-198通過靶向CCND2抑制了HaCaT細胞的增殖,引起了細胞周期阻滯。MiR-203促進了染毒HaCa T細胞的存活,對細胞遷移也有一定影響。Mi R-210抑制了HaCa T細胞的增殖以及遷移。硫芥染毒小鼠皮膚中,miR-203和miR-210都發(fā)生了顯著變化,下調(diào)mi R-203抑制了小鼠皮膚的損傷修復(fù),而下調(diào)mi R-210則促進了小鼠皮膚的損傷修復(fù)。臨床病例分析提示,mi R-210和miR-34a均是較為理想的腫瘤病人預(yù)后生存預(yù)測的生物標(biāo)志物,而mi R-203還不能作為腫瘤病人診斷和預(yù)測預(yù)后生存的生物標(biāo)志物。
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R82

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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本文編號：1296053