發(fā)布時(shí)間：2017-12-16 12:34

  本文關(guān)鍵詞：MiR-198、miR-203、miR-210、miR-34a對皮膚損傷修復(fù)過程中相關(guān)細(xì)胞功能影響的研究

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【摘要】：研究背景皮膚損傷修復(fù)是通過表皮干細(xì)胞的分化及增殖實(shí)現(xiàn)的,典型的皮膚損傷修復(fù)開始于角質(zhì)形成細(xì)胞從損傷邊緣的遷移,隨后的上皮再生過程還涉及損傷邊緣毛囊細(xì)胞的增殖及遷移�？偟膩碚f,損傷修復(fù)過程在某種程度上類似于發(fā)育,而且同腫瘤細(xì)胞具有相似的細(xì)胞生物學(xué)特性以及分子變化。在皮膚的眾多調(diào)控因子中,microRNA(mi RNA)是非常重要的一種。MiR-198近來被發(fā)現(xiàn)作為一種腫瘤抑制因子在機(jī)體內(nèi)發(fā)揮調(diào)控作用,其通過抑制細(xì)胞的有絲分裂和相關(guān)的運(yùn)動通路實(shí)現(xiàn)對細(xì)胞增殖的抑制,但是mi R-198在非腫瘤細(xì)胞或組織中對細(xì)胞增殖的抑制仍然少有研究。MiR-203是一種上皮組織特異性表達(dá)的miRNA,不僅參與皮膚發(fā)育,還具有抑癌和促凋亡作用。MiR-210是一種存在于多種組織細(xì)胞中的重要的缺氧相關(guān)mi RNA,其表達(dá)廣泛參與了細(xì)胞的增殖、線粒體呼吸、DNA損傷修復(fù)、血管生成等病理生理過程。Mi R-34a是目前研究較多的腫瘤相關(guān)mi RNA。皮膚染毒的防治一直是芥子氣(硫芥)研究的重點(diǎn)。角質(zhì)形成細(xì)胞,尤其是基底層的表皮細(xì)胞是硫芥作用的主要靶細(xì)胞。硫芥損傷皮膚的機(jī)制尚未完全研究清楚,還沒有見到miRNA參與硫芥損傷的研究。研究內(nèi)容1、研究硫芥染毒人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞Ha CaT后,miR-198的表達(dá)變化。通過改變細(xì)胞內(nèi)miR-198的表達(dá)研究其對HaCa T細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期的影響,通過生物信息學(xué)預(yù)測手段尋找miR-198新的可能的結(jié)合靶點(diǎn),用熒光素酶報(bào)告基因進(jìn)行驗(yàn)證,并研究該靶點(diǎn)是否參與細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期調(diào)控。研究mi R-198及其新靶點(diǎn)對HaCaT細(xì)胞的遷移和粘附能力的影響,利用生物信息學(xué)手段并結(jié)合實(shí)驗(yàn)研究對mmu-mi R-198進(jìn)行預(yù)測和實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。2、研究硫芥染毒HaCa T細(xì)胞以及SKH-1無毛小鼠后,miR-203在細(xì)胞及染毒皮膚組織中的表達(dá)改變。在細(xì)胞水平上,研究mi R-203對細(xì)胞增殖和遷移能力的影響,及其應(yīng)對硫芥損傷的能力。在動物模型中,研究mir-203的表達(dá)改變對小鼠皮膚切割傷、硫芥染毒損傷修復(fù)的影響,以及mir-203的表達(dá)改變是否對硫芥造成的骨髓和腸道損傷具有保護(hù)效應(yīng)。通過對臨床病例研究的收集整理,明確mir-203甲基化在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的作用,分析mir-203作為腫瘤病人診斷和預(yù)后生存時(shí)間的預(yù)測標(biāo)志物的可能性。3、研究硫芥染毒hacat細(xì)胞以及skh-1無毛小鼠后,mir-210在細(xì)胞及染毒皮膚組織中的表達(dá)改變。在細(xì)胞水平上,研究mir-210對細(xì)胞增殖和遷移能力的影響。在動物模型中,研究mir-210的表達(dá)改變對小鼠皮膚切割傷、硫芥染毒損傷修復(fù)的影響,以及mir-210的表達(dá)改變是否對硫芥造成的骨髓和腸道損傷具有保護(hù)效應(yīng)。通過對臨床病例研究的收集整理,明確mir-210作為腫瘤病人預(yù)后生存時(shí)間的預(yù)測標(biāo)志物的可能性。4、通過對臨床病例研究的收集整理,明確mir-34a作為腫瘤病人預(yù)后生存時(shí)間的預(yù)測標(biāo)志物的可能性。研究結(jié)果1、硫芥染毒人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞hacat后,mir-198的表達(dá)出現(xiàn)顯著上調(diào)。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染mir-198進(jìn)入hacat細(xì)胞抑制了細(xì)胞增殖,細(xì)胞周期阻滯于g1期。生物信息學(xué)預(yù)測顯示細(xì)胞周期蛋白d2(cyclingd2,ccnd2)是mir-198的一個新的靶點(diǎn),熒光素酶報(bào)告基因檢測結(jié)果提示,mir-198可以直接結(jié)合在ccnd2的3‘非編碼區(qū)(3?-untranslatedregions,3‘-utr),下調(diào)細(xì)胞內(nèi)ccnd2的mrna和蛋白表達(dá)。而細(xì)胞內(nèi)ccnd2水平的下調(diào)顯著抑制了細(xì)胞增殖,并導(dǎo)致了細(xì)胞周期的g1期阻滯。另外,mir-198促進(jìn)了hacat細(xì)胞的遷移和粘附能力,而ccnd2的下調(diào)并未顯示相同的促遷移作用。利用生物信息學(xué)手段對mmu-mir-198的預(yù)測沒有取得預(yù)期的結(jié)果。2、mir-203在硫芥染毒的hacat細(xì)胞內(nèi)表達(dá)變化并不顯著,但在硫芥染毒小鼠皮膚組織中,mir-203在染毒后的不同時(shí)間以及不同部位均出現(xiàn)了顯著的表達(dá)變化。mir-203在細(xì)胞水平上具有的促進(jìn)細(xì)胞增殖和遷移的作用可能參與了小鼠皮膚組織中表皮細(xì)胞的損傷修復(fù)。在硫芥染毒小鼠的皮膚內(nèi)上調(diào)mir-203的表達(dá)雖然并沒有顯著的促進(jìn)皮膚損傷修復(fù),但相應(yīng)的下調(diào)mir-203的表達(dá)卻顯著的抑制了皮膚的損傷修復(fù),而對于皮膚染毒的小鼠骨髓和小腸,mir-203的干預(yù)均出現(xiàn)了明顯的保護(hù)效應(yīng)。臨床病例研究提示mir-203甲基化參與了部分腫瘤內(nèi)mir-203表達(dá)的變化,而基于目前的研究現(xiàn)狀,mir-203作為腫瘤病人診斷和預(yù)后生存時(shí)間的預(yù)測標(biāo)志物,并不令人滿意。3、mir-210在硫芥染毒的hacat細(xì)胞中表達(dá)出現(xiàn)顯著上調(diào),過表達(dá)mir-210抑制了細(xì)胞的增殖和遷移,而抑制mi R-210則出現(xiàn)相反的效應(yīng)。硫芥染毒小鼠的皮膚組織中,mi R-210的表達(dá)在損傷后的不同時(shí)間均出現(xiàn)顯著上調(diào)。在硫芥染毒的小鼠皮膚中下調(diào)miR-210的表達(dá)不僅顯著的促進(jìn)了皮膚早期以及中期的損傷修復(fù),也保護(hù)了染毒小鼠的骨髓和小腸。臨床的病例研究提示,miR-210在多種腫瘤組織中出現(xiàn)表達(dá)變化,其高表達(dá)預(yù)示了腫瘤病人較差的預(yù)后生存時(shí)間。4、Mi R-34a在多種腫瘤組織中均有顯著的表達(dá)變化。多數(shù)的研究證實(shí)了其高表達(dá)可以預(yù)測腫瘤病人較好的預(yù)后生存,而也有部分研究提出了相反的結(jié)論。通過meta分析,我們認(rèn)為miR-34a在部分腫瘤中的高表達(dá)可以預(yù)測腫瘤病人較好的預(yù)后生存。研究結(jié)論硫芥染毒人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞HaCa T后,mi R-198、mi R-210的表達(dá)出現(xiàn)顯著上調(diào),mi R-203的表達(dá)變化不顯著。mi R-198通過靶向CCND2抑制了HaCaT細(xì)胞的增殖,引起了細(xì)胞周期阻滯。MiR-203促進(jìn)了染毒HaCa T細(xì)胞的存活,對細(xì)胞遷移也有一定影響。Mi R-210抑制了HaCa T細(xì)胞的增殖以及遷移。硫芥染毒小鼠皮膚中,miR-203和miR-210都發(fā)生了顯著變化,下調(diào)mi R-203抑制了小鼠皮膚的損傷修復(fù),而下調(diào)mi R-210則促進(jìn)了小鼠皮膚的損傷修復(fù)。臨床病例分析提示,mi R-210和miR-34a均是較為理想的腫瘤病人預(yù)后生存預(yù)測的生物標(biāo)志物,而mi R-203還不能作為腫瘤病人診斷和預(yù)測預(yù)后生存的生物標(biāo)志物。
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R82

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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本文編號：1296053