本文關(guān)鍵詞：模擬微重力下人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡信號通路及藥物干預(yù)

  更多相關(guān)文章： 模擬微重力 肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞 線粒體 凋亡 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 紅景天苷 一氧化氮

【摘要】：微血管內(nèi)皮細(xì)胞不僅構(gòu)成了血液與組織間的主要屏障,而且是強(qiáng)大的內(nèi)分泌器官和代謝器官,有很強(qiáng)的合成、分泌和降解生物活性物質(zhì)的功能。微血管內(nèi)皮細(xì)胞反應(yīng)異常與充血、出血、水腫、炎癥等多種病理過程有關(guān)。在正常情況下,內(nèi)皮細(xì)胞的增殖率和凋亡率都很低,血管內(nèi)皮細(xì)胞依靠其正常的增殖和凋亡平衡維持著內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)量的穩(wěn)定和血管功能的正常。本課題組前期的研究結(jié)果表明模擬微重力可誘導(dǎo)肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡,而短時間內(nèi)內(nèi)皮細(xì)胞大量凋亡將導(dǎo)致增殖和凋亡平衡失調(diào),引起內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙,進(jìn)而循環(huán)系統(tǒng)功能受損。因而進(jìn)一步探討凋亡發(fā)生信號通路并采用藥物干預(yù)抑制凋亡發(fā)生尤為必要。 本工作采用回轉(zhuǎn)器回轉(zhuǎn)模擬微重力效應(yīng)建立模型,首先證實模擬微重力72h引起人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生明顯凋亡改變,進(jìn)而對線粒體凋亡信號通路及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)凋亡的蛋白及基因進(jìn)行檢測,說明其在凋亡發(fā)生中的作用。之后分別采用紅景天苷(Sal)及左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)對失重誘導(dǎo)的凋亡進(jìn)行干預(yù),并探討紅景天苷和NO對模擬微重力誘導(dǎo)凋亡影響及機(jī)制。主要方法與結(jié)果如下： 一、人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞應(yīng)用回轉(zhuǎn)器回轉(zhuǎn)72h小時后,采用TUNEL法及DAPI染色檢測細(xì)胞凋亡情況,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡率明顯升高。另應(yīng)用JC-I熒光探針檢測線粒體膜電位的變化,進(jìn)一步驗證了凋亡改變。采用Real-time PCR或Western blot檢測線粒體通路和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)凋亡通路蛋白及基因(CytC、Caspase9. Caspase3、CHOP、ATF-6、GRP78、Caspase12和JNK)進(jìn)行檢測。最終證實線粒體通路及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激均參與了模擬微重力誘導(dǎo)的凋亡。 二、紅景天苷(Sal)是從中藥紅景天中分離得到的糖氧苷類化合物,已有研究表明紅景天苷可抑制多種細(xì)胞凋亡。本實驗在細(xì)胞回轉(zhuǎn)前分別加入紅景天苷及紅景天苷+PI3K抑制劑(LY294002)干預(yù),72h小時后通過TUNEL法觀察細(xì)胞凋亡率的變化,發(fā)現(xiàn)紅景天苷干預(yù)后可明顯減輕細(xì)胞凋亡率。通過Western blot檢測發(fā)現(xiàn)PI3K及p-AKT在回轉(zhuǎn)時表達(dá)降低,而紅景天苷干預(yù)后兩者表達(dá)上升,并伴隨著Bal-2/BAX比例表達(dá)升高,采用PI3K抑制劑干預(yù)可下調(diào)PI3K及p-AKT表達(dá),凋亡檢測發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡率上升,Bal-2/BAX比例表達(dá)下降,因而推斷紅景天苷可能通過PI3K/AKT通路抑制了回轉(zhuǎn)誘導(dǎo)的凋亡。 三、課題組前期研究發(fā)現(xiàn)回轉(zhuǎn)過程中NO升高,其可能為模擬微重力誘導(dǎo)凋亡機(jī)制之一,L-NAME為NOS抑制劑,可以阻斷NO的合成。TUNEL法觀察凋亡率后發(fā)現(xiàn)L-NAME干預(yù)后凋亡率下降,通過對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白檢測發(fā)現(xiàn)相關(guān)蛋白檢測下降,推測模擬微重力下NO可能通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑誘導(dǎo)凋亡發(fā)生。 通過上述實驗研究,結(jié)論如下：回轉(zhuǎn)模擬微重力可導(dǎo)致人肺血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生凋亡,線粒體通路及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激均參與了凋亡發(fā)生。紅景天苷和L-NAME均可使失重引發(fā)的凋亡率下降,紅景天苷通過影響PI3K/AKT通路降低凋亡率,NO可能通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑誘導(dǎo)凋亡發(fā)生。
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R855

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 胡碩;胡成平;;線粒體與細(xì)胞凋亡的研究進(jìn)展[J];國際呼吸雜志;2006年06期

2 劉光偉,龔守良;細(xì)胞凋亡的線粒體調(diào)控機(jī)制與電離輻射[J];國外醫(yī)學(xué)(放射醫(yī)學(xué)核醫(yī)學(xué)分冊);2003年02期

3 汪德生,孫磊,任維,董建文,馬鐵民,向求魯;尾部懸吊大鼠胸主動脈及肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮合酶mRNA表達(dá)的動態(tài)變化[J];航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程;2001年05期

4 沈羨云;王林杰;;我國失重生理學(xué)研究進(jìn)展[J];航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程;2008年03期

5 康春燕;袁明;鄒琳;章燁;李天志;王俊鋒;劉長庭;;模擬微重力對肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞窖蛋白-1和內(nèi)皮型一氧化氮合酶表達(dá)的影響[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2010年11期

6 張向陽;;細(xì)胞凋亡檢測方法[J];濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2008年03期

7 章燁;袁明;李婷;張瑩;劉長庭;;模擬失重對肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響[J];軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院學(xué)報;2009年01期

8 孔晉星;;糖尿病腎病血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷及凝血纖溶功能變化實驗研究[J];昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2007年S1期

9 張海燕;劉寶琴;鄧娓娓;都鎮(zhèn)先;王華芹;;GRP78在蛋白酶體抑制劑誘導(dǎo)甲狀腺癌細(xì)胞凋亡中的作用[J];中華腫瘤防治雜志;2009年18期

10 臧傳波;吳榮謙;宋旭華;李崇輝;徐迎新;李榮;;膿毒癥時肝肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥基因的表達(dá)及意義[J];山東醫(yī)藥;2007年15期

，

本文編號：1280950