本文關(guān)鍵詞：海灣戰(zhàn)爭綜合征模型大鼠海馬VGF、BDNF及MAPK表達(dá)的實驗研究

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【摘要】：目的：參與1990-1991年海灣戰(zhàn)爭的70萬美國軍人中，有17.5萬至21萬人在戰(zhàn)后不久出現(xiàn)了持續(xù)的、難以處理的健康問題，包括認(rèn)知困難、持續(xù)廣泛的疼痛、疲勞、頭痛、慢性腹瀉、皮疹等，被稱為海灣戰(zhàn)爭綜合征(Gulf War Syndrome，GWS)或海灣戰(zhàn)爭疾病。2000年Steele等定義GWS為：6組癥狀(疲勞/睡眠問題、疼痛癥狀、神經(jīng)學(xué)/認(rèn)知/心境癥狀、胃腸道癥狀、呼吸道癥狀、皮膚癥狀)中至少有3組，并排除能夠診斷的內(nèi)科或心理原因。2008年美國正式認(rèn)定GWS為法定疾病。目前的研究認(rèn)為海灣戰(zhàn)爭綜合征的主要原因是海灣戰(zhàn)爭期間使用對抗神經(jīng)毒氣的溴吡斯的明（PB）及對付沙蠅等有毒害蟲的殺蟲劑(DEET)等化學(xué)藥劑。利用磁共振波譜分析、PETCT等新技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)，GWS患者海馬、扣帶回、顳葉、下丘腦等腦區(qū)體積減小、代謝異常、功能受到損害。因此，GWS很可能是由于慢性應(yīng)激以及長期小劑量化學(xué)毒劑的接觸，，導(dǎo)致海馬、下丘腦等多個腦區(qū)的損害，進(jìn)而出現(xiàn)各種各樣的臨床癥狀。本實驗?zāi)康模航Y(jié)合本課題組既往研究結(jié)果，通過建立海灣戰(zhàn)爭綜合征大鼠模型，觀察該模型大鼠海馬VGF、BDNF及MAPK／Erk的表達(dá)變化，探討神經(jīng)營養(yǎng)因子BDNF、神經(jīng)肽VGF及MAPK／Erk信號傳導(dǎo)通路的異常是否與海灣戰(zhàn)爭綜合征發(fā)病機(jī)制有關(guān)，是否與海灣戰(zhàn)爭綜合征海馬損傷有關(guān)？ 方法：取SD大鼠36只，隨機(jī)分成對照組、限制應(yīng)激組和GWS模型組，采用Abdel-Rahman法建立GWS大鼠模型。GWS模型組：大鼠每天給與溴化吡啶斯的明（1.3mg/kg/d，溶于2ml水中灌服)和DEET（40mg/kg/d，溶入1ml70%乙醇皮下注射)，同時每天固定束縛20分鐘。限制應(yīng)激組：大鼠每天給予2ml水灌服，70%乙醇1ml皮下注射，固定束縛20分鐘。對照組：大鼠每天僅給予2ml水灌服，70%乙醇1ml皮下注射，不進(jìn)行固定束縛。實驗周期為28天。分別在0天、7天、14天、21天和28天測定大鼠體重。28天后，予足量10%水合氯醛麻醉，4％多聚甲醛灌注，斷頭取腦，分離海馬組織。每組一半大鼠（6只）的海馬組織制備成常規(guī)石蠟切片，采用SABC法進(jìn)行免疫組化染色及VGF/MAPK免疫熒光雙標(biāo)染色，觀察大鼠海馬VGF、BDNF、MAPK的表達(dá)情況；另一半大鼠分離海馬組織，采用western blot定量分析VGF、BDNF、MAPK等指標(biāo)。 結(jié)果：⒈體重分析：以每只鼠實驗開始時（0天）測定體重作為對照體重（100%），計算各觀察時間點所有大鼠體重的增長率。單因素方差分析（one-wayANOVA）發(fā)現(xiàn)，三組間存在顯著差異（P0.01），GWS模型組大鼠體重增長率明顯低于對照組（P0.01）和應(yīng)激組（P0.05）。⒉免疫組化結(jié)果：限制應(yīng)激組與對照組相比較、GWS模型組與對照組相比較、GWS模型組與限制應(yīng)激組相比較，海馬CA1區(qū)VGF、BDNF、MAPK組化染色的平均光密度值降低，均有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。⒊免疫熒光結(jié)果：海馬CA3區(qū)細(xì)胞內(nèi)MAPK與VGF的表達(dá)部位相同、變化趨勢相一致，MAPK和VGF熒光的表達(dá)與CA1區(qū)免疫組化結(jié)果相一致。⒋Western blot結(jié)果：限制應(yīng)激組與對照組相比較、GWS模型組與對照組相比較、GWS模型組與限制應(yīng)激組相比較，海馬VGF、BDNF和MAPK的積分光密度值降低，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。 結(jié)論：⒈海灣戰(zhàn)爭綜合征模型大鼠體重增長明顯減少。⒉海灣戰(zhàn)爭綜合征模型大鼠海馬損傷與神經(jīng)營養(yǎng)因子BDNF減量表達(dá)相關(guān)。⒊海灣戰(zhàn)爭綜合征模型大鼠海馬損傷與MAPK的減量表達(dá)相關(guān)。⒋海灣戰(zhàn)爭綜合征模型大鼠海馬神經(jīng)肽VGF呈減量表達(dá)，可能通過VGF與MAPK／Erk信號傳導(dǎo)通路參與海灣戰(zhàn)爭綜合征的發(fā)病機(jī)制。
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R82

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1184253