本文關(guān)鍵詞：冷暴露誘導(dǎo)肝細(xì)胞損傷及其機制初步探討

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【摘要】： 寒冷環(huán)境暴露對于軍隊的戰(zhàn)斗力可以產(chǎn)生顯著的影響。在世界軍事史上,諸多著名的冬季戰(zhàn)例表明,寒冷可能成為決定一場戰(zhàn)爭走向的關(guān)鍵。所以,寒冷環(huán)境對軍隊?wèi)?zhàn)斗力的影響是軍事醫(yī)學(xué)研究中必須十分關(guān)注的因素。我國的寒區(qū)面積廣大,約有1/3的國土面積、超過1/2的陸地邊界位于寒冷地區(qū),生活著我國近50%的人口和三分之二的駐軍,戰(zhàn)略意義十分重要。而寒冷氣候嚴(yán)重影響了邊防部隊及駐軍平戰(zhàn)時的作訓(xùn)能力。為保障和提高寒區(qū)部隊的適應(yīng)能力和作戰(zhàn)能力,研究提高寒區(qū)軍事作業(yè)能力的醫(yī)學(xué)保障措施具有重要的軍事意義。 寒冷可誘導(dǎo)機體產(chǎn)生一系列的特異性或非特異性生物學(xué)效應(yīng),長時間過強的冷暴露可以對心血管系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)以及骨關(guān)節(jié)系統(tǒng)產(chǎn)生不同程度的損害。肝臟是機體重要的能量代謝器官,在冷暴露狀態(tài)下,肝臟可出現(xiàn)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)增強、酶活性改變、肝糖元分解及糖元異生、免疫細(xì)胞活性下降等,提示冷暴露可以顯著影響肝臟的功能,但是其分子機制目前尚不完全清楚。 寒冷暴露時肝臟功能的調(diào)節(jié)對于寒冷的適應(yīng)能力起到至關(guān)重要的作用。p21是一種重要的細(xì)胞周期調(diào)控蛋白,它參與細(xì)胞的生長、分化及死亡過程,在細(xì)胞的生理、病理過程中發(fā)揮重要的作用。因此,本實驗通過體內(nèi)和體外試驗,觀察冷暴露對肝細(xì)胞形態(tài)及細(xì)胞周期的影響,研究p21在寒冷誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷中的作用及相關(guān)信好轉(zhuǎn)導(dǎo)機制,為進(jìn)一步探討冷暴露過程中肝細(xì)胞的損傷機制、探討衛(wèi)生學(xué)防護(hù)措施提供研究基礎(chǔ)和參考依據(jù)。 【方法】 1.以-15℃,每天6 h冷暴露方法建立冷暴露大鼠模型;用HE染色方法觀察冷暴露不同時間大鼠肝臟的病理學(xué)改變;Western blot檢測肝組織MAPKs信號分子的表達(dá)活化。 2.以Chang liver細(xì)胞系為實驗對象,4℃環(huán)境培養(yǎng)0 h-24 h建立冷暴露細(xì)胞模型;應(yīng)用倒置顯微鏡、MTT方法、臺盼藍(lán)排斥試驗觀察冷暴露不同時間對細(xì)胞形態(tài)、生存活力的影響;用流式細(xì)胞儀分析冷暴露不同時間對細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的影響;用Tunel檢測凋亡試劑盒進(jìn)一步確定冷暴露不同時間對細(xì)胞凋亡的影響;Western blot檢測冷暴露對細(xì)胞周期相關(guān)蛋白、MAPKs信號信號通路相關(guān)蛋白的表達(dá)變化和mTOR信號通路相關(guān)蛋白的表達(dá)變化;分別使用阻斷劑阻斷JNK和mTOR通路后,流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期的改變,并用Western blot檢測細(xì)胞周期蛋白的表達(dá)變化。 【結(jié)果】 1.大鼠肝臟HE染色結(jié)果顯示:隨著冷暴露時間的延長,大鼠肝臟細(xì)胞結(jié)構(gòu)的損傷程度逐漸加重;Western blot結(jié)果顯示:隨著冷暴露時間的延長,肝組織中JNK磷酸化水平明顯增高,而ERK的磷酸化水平?jīng)]有明顯變化。 2.細(xì)胞計數(shù)法、MTT方法、臺盼藍(lán)排斥試驗的結(jié)果均顯示:冷暴露后細(xì)胞生長增殖明顯受到抑制,且存在時間依賴性。流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡和Tunel檢測凋亡試劑盒結(jié)果均顯示:冷暴露沒有引起Chang liver細(xì)胞的凋亡,Western blot結(jié)果顯示在冷暴露反應(yīng)中caspase-3的表達(dá)無顯著變化。流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期結(jié)果發(fā)現(xiàn):冷暴露引起細(xì)胞周期S期的抑制,Westernblot的結(jié)果顯示冷暴露時p21的表達(dá)降低,而JNK和mTOR2446的磷酸化水平增高。用JNK和mTOR的抑制劑作用細(xì)胞后發(fā)現(xiàn),mTOR抑制劑可以部分地逆轉(zhuǎn)冷暴露引起的細(xì)胞周期S期的抑制和p21水平的降低,而JNK抑制劑則無此作用。 【結(jié)論】 1.冷暴露可以引起大鼠肝臟細(xì)胞的損傷,提示長時間寒冷暴露可以引起肝臟的形態(tài)結(jié)構(gòu)呈時間-依賴性的損傷,并可能導(dǎo)致其功能損害;冷暴露可誘導(dǎo)JNK的磷酸化水平呈時間-依賴性的增強,提示JNK信號通路的激活與肝臟的損傷可能存在一定的關(guān)系。而肝臟ERK信號通路可能沒有參與肝臟冷暴露反應(yīng)的過程。 2.4℃環(huán)境培養(yǎng)Chang liver細(xì)胞時,細(xì)胞生長增殖抑制,但這種抑制作用可能不是通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡引起的。同時我們發(fā)現(xiàn)冷暴露引起了細(xì)胞周期S期的抑制,這可能與細(xì)胞周期蛋白p21表達(dá)水平的降低有關(guān)。在這個過程中mTOR信號通路可能參與了細(xì)胞周期的調(diào)控過程。而JNK磷酸化水平的增高可能主要是一種應(yīng)激反應(yīng)性的變化,而與細(xì)胞周期沒有明顯的關(guān)系。
【關(guān)鍵詞】：冷暴露 大鼠 Chang liver細(xì)胞 細(xì)胞周期 絲裂原活化蛋白激酶(MAPKs) 細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK) c-Jun氨基末端激酶/應(yīng)激激活蛋白激酶(JNK/SAPK) 哺乳動物雷帕霉素靶向基因(mTOR)
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R82
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-15
• 文獻(xiàn)回顧15-34
• 正文34-66
• 第一部分 冷暴露對大鼠肝臟的損傷及其機制34-43
• 1 實驗材料34-37
• 2 方法37-38
• 3 結(jié)果38-41
• 4 討論41-43
• 第二部分 冷暴露對肝細(xì)胞增殖的影響及其機制探討43-66
• 實驗一 冷暴露對肝細(xì)胞生長增殖的影響43-56
• 1 材料43-45
• 2 方法45-49
• 3 結(jié)果49-54
• 4 討論54-56
• 實驗二 冷暴露對細(xì)胞周期的影響及其機制探討56-66
• 1 材料56-57
• 2 方法57
• 3 結(jié)果57-63
• 4 討論63-66
• 小結(jié)66-67
• 參考文獻(xiàn)67-78
• 個人簡歷和研究成果78-79
• 致謝79

【引證文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張瑜;殼寡糖對人肝細(xì)胞和人肝癌細(xì)胞凋亡的影響[D];大連醫(yī)科大學(xué);2010年

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本文編號：1066635