本文關(guān)鍵詞：3-甲基腺嘌呤及SIK2對放射誘發(fā)細(xì)胞自噬的影響研究

  更多相關(guān)文章： 鹽誘導(dǎo)激酶2(SIK2) 3-MA 電離輻射 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞自噬 放射敏感性 分割劑量照射

【摘要】：目的:研究PI3K抑制劑3-MA、SIK2以及分割照射對細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡以及細(xì)胞自噬的影響,探索SIK2在電離輻射誘發(fā)細(xì)胞自噬中的作用。探討3-MA在細(xì)胞照射后對細(xì)胞自噬及凋亡發(fā)生的影響,并觀察照射的生物效應(yīng)時效規(guī)律,為闡明電離輻射誘發(fā)細(xì)胞自噬的機制提供新的依據(jù)。方法:1.4 Gy 60Coγ、3-MA早期作用(即在照射后即刻時間點加入3-MA并作用12 h)和3-MA后期作用(即在照射后12 h加入3-MA并作用12 h)于sh RNA介導(dǎo)SIK2敲低的Hela-sh SIK2及其對照細(xì)胞后,于0 h,12 h,24 h,48 h和72 h用CCK8檢測不同處理后細(xì)胞的增殖和毒性效應(yīng)。2.4 Gy 60Coγ、3-MA早期作用和3-MA后期作用于Hela-sh SIK2及其對照細(xì)胞,Annexin V-FITC/PI標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡。3.2 Gy、4 h分割照射劑量(2+2 Gy)和單劑量4 Gy X射線照射以及3-MA早期作用于Hela-sh SIK2及其對照細(xì)胞,克隆形成率檢測細(xì)胞的放射敏感性。4.2 Gy、4 h分割照射劑量(2+2 Gy)和單劑量4 Gy X射線照射后,免疫印跡檢測LC3蛋白隨照射后時間表達(dá)水平的變化。5.2 Gy、4 h分割照射劑量(2+2 Gy)和單劑量4 Gy X射線照射轉(zhuǎn)染GFP-LC3質(zhì)粒的Hela-sh SIK2及其對照細(xì)胞,免疫熒光觀察自噬體的形成。結(jié)果:1.CCK8結(jié)果顯示各處理組和對照組相比,在12 h內(nèi)3-MA晚期作用組無明顯影響,其余處理組在12 h時即發(fā)現(xiàn)明顯的細(xì)胞毒性,P0.05;以4 Gy照射組為對照組,照射聯(lián)合3-MA早期(照射后即刻至12 h)處理組在12 h,24 h,48 h,72 h產(chǎn)生更大的毒性,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.01;以4 Gy照射組為對照組,照射聯(lián)合3-MA后期(照射后12 h至24 h)處理組在24 h、48 h和72 h產(chǎn)生更大的毒性,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.01。2.流式細(xì)胞術(shù)測凋亡發(fā)現(xiàn)以0 h為對照組,各處理組的凋亡率增加具有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.01;以4 Gy照射組為對照,照射聯(lián)合3-MA早期作用組的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05。以照射聯(lián)合3-MA早期作用組為對照,3-MA后期作用組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05。3.克隆形成率實驗發(fā)現(xiàn)3-MA聯(lián)合2+2 Gy照射組與3-MA聯(lián)合4 Gy照射組相比較,細(xì)胞存活率高,差別具有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05;各劑量組加入3-MA前期作用后存活率明顯降低,差別具有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.01。Hela-sh SIK2細(xì)胞3-MA聯(lián)合照射組與對照組Hela-sh NC細(xì)胞對放射更加敏感,細(xì)胞存活率差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05。4.Western Blot結(jié)果表明,在對照細(xì)胞中三種劑量下都能引起LC3II的增多,并在24 h達(dá)到高峰。不同劑量同一時間LC3II表達(dá)情況,分割照射2+2 Gy LC3II的表達(dá)水平比單次4 Gy照射高,說明分割照射似乎增強了輻射誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬;而在敲低細(xì)胞中,LC3II的表達(dá)水平比對照細(xì)胞低,說明SIK2敲低細(xì)胞減弱了細(xì)胞自噬。5.免疫熒光可看出SIK2敲低的細(xì)胞自噬標(biāo)記蛋白LC3的熒光強度不及對照組。更有效的證實了SIK2對電離輻射后細(xì)胞自吞噬的負(fù)調(diào)控。且分割照射劑量2+2 Gy的熒光強度比其他照射組同一時間的熒光強度強。結(jié)論:3-MA早期作用和3-MA晚期作用對細(xì)胞毒性存在差異,3-MA早期作用對細(xì)胞毒性更大。3-MA早期作用比3-MA晚期作用更能促進(jìn)凋亡,差異有顯著性。分割照射劑量比單劑量照射下LC3Ⅱ的表達(dá)更多,更有利于自噬的發(fā)生。SIK2敲低后減弱了輻射誘發(fā)的細(xì)胞自吞噬作用,細(xì)胞的放射敏感性增加。
【關(guān)鍵詞】：鹽誘導(dǎo)激酶2(SIK2) 3-MA 電離輻射 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞自噬 放射敏感性 分割劑量照射
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R818
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 主要英文縮略語索引10-11
• 第1章 緒論11-15
• 第2章 材料與方法15-31
• 2.1 材料15-17
• 2.2 方法17-31
• 第3章 結(jié)果31-39
• 3.1 SIK2對細(xì)胞生長的影響31
• 3.2 γ 放射照射后不同時間3甲基腺嘌呤對He La細(xì)胞放射敏感性的影響31-33
• 3.3 3-MA不同時間作用對受照射細(xì)胞凋亡的促進(jìn)程度33-35
• 3.4 分割照射劑量下細(xì)胞的放射敏感性35-36
• 3.5 檢測分割照射下SIK2敲低細(xì)胞自噬蛋白的表達(dá)36-37
• 3.6 免疫熒光檢測分割照射劑量下自噬體的形成37-39
• 第4章 討論39-43
• 第5章 結(jié)論43-45
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 綜述49-63
• 參考文獻(xiàn)57-63
• 作者攻讀學(xué)位期間的科研成果63-65
• 致謝65

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 邢國勝;賀桂泉;趙文君;;藥物對細(xì)胞自噬性死亡的干預(yù)作用[J];天津藥學(xué);2011年03期

2 ;《現(xiàn)代細(xì)胞自噬分子生物學(xué)》出版[J];診斷學(xué)理論與實踐;2011年05期

3 ;《現(xiàn)代細(xì)胞自噬分子生物學(xué)》出版[J];診斷學(xué)理論與實踐;2011年06期

4 陳蘭芳;肖亮;楊軍平;;細(xì)胞自噬的分子機制及其功能[J];實驗與檢驗醫(yī)學(xué);2014年02期

5 李桂蘭;閆華超;;細(xì)胞自噬對衰老的調(diào)節(jié)[J];中國老年學(xué)雜志;2010年09期

6 王琦;蘇舒;王立新;;胞內(nèi)感染病原體與細(xì)胞自噬相互作用的研究進(jìn)展[J];東南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2010年03期

7 ;《自然-細(xì)胞生物學(xué)》:蛋白抗癌與其誘導(dǎo)細(xì)胞自噬有關(guān)[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2010年20期

8 汪昌麗;滿娜;溫龍平;;納米材料誘導(dǎo)細(xì)胞自噬的效應(yīng)及生物學(xué)功能[J];東南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2011年01期

9 錢帥偉;漆正堂;支彩霞;丁樹哲;;抑癌基因p53與細(xì)胞自噬[J];生命的化學(xué);2011年05期

10 馬泰;孫國平;李家斌;;細(xì)胞自噬的研究方法[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2012年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 許赤;陳文捷;楊楊;李華;易述紅;陳規(guī)劃;;老年大鼠肝臟細(xì)胞自噬及其移植后改變[A];2013中國器官移植大會論文匯編[C];2013年

2 劉杰民;紀(jì)云西;蔣歷;黃貴華;鄭超偉;郭超峰;;細(xì)胞自噬是探索中醫(yī)藥微觀機制的新思路[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會脾胃病分會第二十四次全國脾胃病學(xué)術(shù)交流會論文匯編[C];2012年

3 李康生;代劍平;;病毒感染與細(xì)胞自噬[A];新發(fā)和再發(fā)傳染病防治熱點研討會論文集[C];2011年

4 楊鍵;鄧玉杰;張曉燕;呂鵬飛;徐俊;楊穎;寧光;;脂肪細(xì)胞自噬檢測方法的建立及意義探討[A];中華醫(yī)學(xué)會第十一次全國內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2012年

5 陳英;樸英杰;;人肝細(xì)胞自噬性凋亡的形態(tài)學(xué)觀察[A];第十二屆全國電子顯微學(xué)會議論文集[C];2002年

6 楊鍵;鄧玉杰;張曉燕;呂鵬飛;徐俊;楊穎;寧光;;脂肪細(xì)胞自噬檢測方法的建立及意義探討[A];中華醫(yī)學(xué)會糖尿病學(xué)分會第十六次全國學(xué)術(shù)會議論文集[C];2012年

7 趙穎;楊靜;廖文娟;劉向宇;張輝;王杉;王冬來;馮京南;俞立;朱衛(wèi)國;;胞漿中Fox01引起細(xì)胞自噬進(jìn)而發(fā)揮抑制腫瘤的功能[A];中華醫(yī)學(xué)會腫瘤學(xué)分會第七屆全國中青年腫瘤學(xué)術(shù)會議——中華醫(yī)學(xué)會腫瘤學(xué)分會“中華腫瘤 明日之星”大型評選活動暨中青年委員全國遴選論文匯編[C];2011年

8 陳永;鄒s舠，

本文編號：878612