本文關(guān)鍵詞：大鼠急性心肌缺血早期PAR和PARP-1裂解片段P89的表達變化

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【摘要】：目的：急性心肌梗死（AMI）引發(fā)的猝死現(xiàn)象頻發(fā)，大多數(shù)病人在發(fā)病后6小時，甚至1小時內(nèi)死亡。常規(guī)的HE染色在心肌缺血至少6小時后才會出現(xiàn)光鏡下的形態(tài)學(xué)變化（如心肌纖維波浪樣變，炎細胞浸潤，心肌細胞嗜酸性增強等）。而在法醫(yī)學(xué)實踐中，AMI猝死者死后常規(guī)檢查除可見冠狀動脈及其分支存在不同程度的動脈粥樣硬化外，由缺血性損傷因素所致的病理形態(tài)學(xué)改變很難檢出，使早期心肌梗死的死后診斷成為法醫(yī)病理學(xué)鑒定的難點。急性心肌缺血早期心肌細胞內(nèi)多聚ADP核糖合成酶1（Poly (ADP-ribose) Polymerase，PARP-1）被激活而可誘導(dǎo)心肌細胞中某些蛋白質(zhì)發(fā)生聚ADP核糖化，即PAR形成，同時PARP-1被蛋白激酶裂解而形成P89片段。因此本實驗采用IHC技術(shù)和Western Blot技術(shù)對大鼠急性心肌缺血早期不同時間點心肌細胞內(nèi)的PAR和P89片段的表達情況進行觀察，以期尋找其表達規(guī)律，用以輔助AMI引起的心源性猝死（SCD）的死后診斷。 方法：健康SD大鼠80只，重250~300克，雌雄不拘，隨機分為缺血組（A組）和假手術(shù)組（S組）。采用結(jié)扎大鼠左冠狀動脈前降支（LAD）的方法建立大鼠急性心肌缺血模型；缺血組大鼠分別于結(jié)扎LAD后0.5h、1h、2h、4h及6h處死取材，假手術(shù)組大鼠只在LAD下穿過縫線而不結(jié)扎，分別于術(shù)后0.5h、1h、2h、4h及6h處死取材。常規(guī)制作石蠟切片，用HE染色觀察大鼠心臟的組織病理改變，并用IHC方法觀察心肌組織中PAR及P89片段表達的變化；用Western Blot方法測定P89片段表達情況。采用SPSS16.0統(tǒng)計分析軟件對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析，以P0.05為有顯著性差異。 結(jié)果： 1HE染色：各假手術(shù)組心肌細胞結(jié)構(gòu)清晰，胞核藍染，未見明顯異常的形態(tài)學(xué)改變。急性心肌缺血2h之內(nèi)僅見部分心肌細胞間質(zhì)輕度水腫，偶見心肌纖維嗜酸性增強，4h組可見間質(zhì)少量炎細胞浸潤，心肌纖維腫脹及波浪樣變，但未見顯著細胞壞死；6h組偶見心肌纖維斷裂和心肌收縮帶壞死。 2IHC染色： 2.1缺血后不同時間點缺血心肌PAR表達情況 假手術(shù)組：心肌細胞胞核中PAR未見陽性表達； 缺血組：心肌細胞胞核在急性缺血0.5h時即有PAR弱陽性表達，其散在分布于心內(nèi)膜下，隨著缺血時間的延長，PAR陽性細胞核數(shù)量明顯增加，表達區(qū)域進一步擴大，缺血2h時進展至心肌中層，至缺血6h時PAR的表達達到高峰，陽性表達區(qū)域累積缺血區(qū)心肌全層。各組大鼠非缺血區(qū)心肌細胞核未見P89片段的陽性表達。 2.2缺血后不同時間點缺血心肌P89片段表達情況 假手術(shù)組：心肌細胞胞核中P89未見陽性表達； 缺血組：急性心肌缺血0.5h后缺血區(qū)心肌細胞胞核中P89片段表達呈弱陽性，，散在分布于心內(nèi)膜下，隨著缺血時間的延長，P89片段陽性細胞核數(shù)量明顯增加，表達區(qū)域進一步擴大，缺血4h時進展至心肌中層，至缺血6h時PAR的表達達到高峰，陽性表達區(qū)域累積缺血區(qū)心肌全層，各組大鼠非缺血區(qū)心肌細胞核未見P89片段的陽性表達。 3Western Blot結(jié)果： P89片段表達結(jié)果：與假手術(shù)組相比，急性心肌缺血組0.5h后P89片段表達明顯增加且其表達強度隨著缺血時間的延長而增加，缺血6h時達到高峰。 結(jié)論：PAR及P89在急性心肌缺血0.5h后即有陽性表達，兩種物質(zhì)表達強度有隨著缺血時間延長而逐步增加的趨勢，表達范圍由心內(nèi)膜逐漸向心肌纖維擴散，最后累計心肌全層。兩個指標(biāo)的敏感性高，在急性心肌梗死死后診斷的法醫(yī)學(xué)實踐中可作為參考指標(biāo)之一。
【關(guān)鍵詞】：法醫(yī)病理學(xué) 急性心肌梗死 PAR PARP-1裂解片段（P89） 免疫組織化學(xué) Western Blot
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：D919
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 英文縮寫9-10
• 前言10-11
• 材料與方法11-17
• 結(jié)果17-19
• 附圖19-25
• 討論25-28
• 結(jié)論28
• 參考文獻28-33
• 綜述 PARP-1 在心血管疾病中的研究33-45
• 參考文獻40-45
• 致謝45-46
• 個人簡歷46

【參考文獻】

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本文編號：843653