本文關(guān)鍵詞：EGCG對(duì)慢性低劑量X線輻射誘導(dǎo)的細(xì)胞DNA甲基化影響的研究

  更多相關(guān)文章： EGCG 低劑量輻射 全基因組DNA甲基化 啟動(dòng)子甲基化 MGMT

【摘要】：背景： 電離輻射是一類公認(rèn)的具有基因毒性的致癌因子。目前低劑量電離輻射所產(chǎn)生的健康危害及其可能的致癌作用受到了人們的廣泛關(guān)注。然而,低劑量電離輻射所致的生物學(xué)效應(yīng)不同于高劑量輻射的線性無閾模式,其本質(zhì)可能與DNA甲基化相關(guān)。目前國內(nèi)外研究對(duì)于低劑量輻射誘導(dǎo)的表觀遺傳學(xué)改變多集中在急性照射方面,僅幾位學(xué)者報(bào)道了慢性低劑量輻射誘導(dǎo)DNA甲基化改變的體內(nèi)研究結(jié)果,但在體外實(shí)驗(yàn)方面未見報(bào)道。表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG),作為天然物質(zhì)茶多酚中的單體,研究表明它具有抗氧化、抗腫瘤、抗輻射等生物學(xué)功能。然而,目前EGCG逆轉(zhuǎn)DNA甲基化改變僅見于抗腫瘤研究中,EGCG是否也通過影響DNA甲基化途徑起輻射防護(hù)作用仍未見報(bào)道。 目的： 探討低劑量輻射是否能誘導(dǎo)L-02、HUVEC細(xì)胞發(fā)生DNA甲基化,及EGCG對(duì)慢性低劑量輻射所誘導(dǎo)的DNA甲基化的影響。從表觀遺傳學(xué)DNA甲基化方面來闡述慢性低劑量輻射損傷的機(jī)制,為輻射損傷防護(hù)提供新的綠色靶點(diǎn)。 方法： 人正常細(xì)胞(L-02細(xì)胞、HUVEC細(xì)胞)經(jīng)分次低劑量X線照射后,檢測(cè)其全基因組DNA甲基化的改變,MGMT、P53的表達(dá)及其啟動(dòng)子甲基化的狀態(tài)；用MTT法計(jì)算出EGCG的安全濃度；人正常細(xì)胞(L-02、HUVEC細(xì)胞)經(jīng)EGCG孵育后再經(jīng)慢性低劑量X線照射后,檢測(cè)其全基因組DNA甲基化的改變,MGMT、P53的表達(dá)及其啟動(dòng)子甲基化的狀態(tài)。 結(jié)果： 1.低劑量X線照射對(duì)全基因組DNA甲基化水平的影響：在L-02、HUVEC細(xì)胞,慢性低劑量X線照射組(5cGy/d×5d/10d)與急性低劑量組(50cGy/d×1d)較不照射對(duì)照組(0cGy),全基因組DNA甲基化水平均明顯降低(P0.05)。 2.低劑量x線照射對(duì)P53蛋白含量的影響：在L-02、HUVEC細(xì)胞,不照射對(duì)照組(0cGy),急性照射組(50cGy/d×1d)與慢性照射組(5cGy/d×5d/10d)之間P53蛋白含量均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。 3.低劑量X線照射對(duì)MGMT表達(dá)的影響：在L-02、HUVEC細(xì)胞,慢性低劑量X線照射組(5cGy/d×5d/10d)較不照射組(0cGy)、急性低劑量組(50cGy/d×1d), MGMT表達(dá)水平均明顯降低。 4.低劑量x線照射對(duì)MGMT啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)的影響：在L-02、HUVEC細(xì)胞,慢性低劑量X線照射組(5cGy/d×5d/10d)較不照射組(0cGy)、急性低劑量組(50cGy/d×1d), MGMT啟動(dòng)子均處于完全甲基化狀態(tài)。 5. EGCG安全濃度的篩選：EGCG隨著濃度的降低,L-02、HUVEC細(xì)胞生存率相應(yīng)增大,均呈現(xiàn)劑量依賴性(5000μ/M、250μM、1250μM、313μM、20μM)。在EGCG (78μM,20μM)孵育12h、24h、48h、72h后,兩細(xì)胞系的生存率均達(dá)85%以上,故選用50μM、20μM為EGCG的安全濃度。 6. EGCG對(duì)慢性低劑量X線照射(5cGy/d×10d)后全基因組DNA甲基化水平的影響：在HUVEC細(xì)胞,EGCG (20μM、50μM組較EGCG (0μM)組,全基因組DNA甲基化水平均明顯升高(P0.05),與陽性對(duì)照組(5-Aza-CdR5μM)全基因組DNA甲基化升高水平無明顯差異(P0.05)；在L-02細(xì)胞,各組間全基因組DNA甲基化水平均無明顯差異(P0.05)。 7. EGCG對(duì)慢性低劑量X線照射后P53蛋白含量的影響：在L-02、HUVEC細(xì)胞,EGCG (0μM、20μM、50μM)組及陽性對(duì)照組(5-Aza-CdR5μM)對(duì)慢性低劑量X線照射(5cGy/d×10d)后P53蛋白含量均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。 8. EGCG對(duì)慢性低劑量X線照射(5cGy/d×5d/10d)后MGMT表達(dá)的影響：在L-02、HUVEC細(xì)胞,EGCG組較EGCG組,MGMT表達(dá)水平均明顯升高,與陽性對(duì)照組(5-Aza-CdR5μM) MGMT表達(dá)水平相仿。 9. EGCG對(duì)慢性低劑量X線照射(5cGy/d×5d/10d)后MGMT啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)的影響：在L-02、HUVEC細(xì)胞,EGCG組較EGCG組,MGMT啟動(dòng)子處于非甲基化狀態(tài),與陽性對(duì)照組(5-Aza-CdR5μM)結(jié)果一致。 結(jié)論： 低劑量X線輻射易誘導(dǎo)全基因組及MGMT啟動(dòng)子DNA甲基化狀態(tài)的改變,且慢性照射組較急性照射組更易誘導(dǎo)全基因組DNA甲基化水平的降低及MGMT啟動(dòng)子的甲基化。EGCG能逆轉(zhuǎn)慢性低劑量輻射所致全基因組低甲基化及MGMT啟動(dòng)子DNA甲基化狀態(tài),并上調(diào)其表達(dá)。慢性低劑量輻射可能通過累積異常的DNA甲基化而成為輻射相關(guān)疾病的強(qiáng)烈誘導(dǎo)劑,EGCG可能通過表觀遺傳學(xué)調(diào)控DNA甲基化而成為一天然的有潛力的輻射損傷防護(hù)物質(zhì)。
【關(guān)鍵詞】：EGCG 低劑量輻射 全基因組DNA甲基化 啟動(dòng)子甲基化 MGMT
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R818
【目錄】：

• 中文摘要2-4
• Abstract4-7
• 目錄7-9
• 符號(hào)說明9-11
• 引言11-14
• 第一部分：低劑量X線輻射對(duì)L-02、HUVEC細(xì)胞DNA甲基化的影響14-29
• 1 材料與方法14-23
• 2 結(jié)果23-26
• 2.1 低劑量X線輻射對(duì)全基因組DNA甲基化水平的影響23-24
• 2.2 低劑量X線輻射對(duì)P53蛋白含量的影響24-25
• 2.3 低劑量X線輻射對(duì)MGMT表達(dá)的影響25-26
• 2.4 低劑量X線輻射對(duì)MGMT啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)的影響26
• 3 討論26-29
• 第二部分：EGCG對(duì)慢性低劑量X線輻射誘導(dǎo)的細(xì)胞DNA甲基化的影響29-39
• 1 材料與方法29-31
• 2 結(jié)果31-37
• 2.1 EGCG安全濃度的篩選31-32
• 2.2 EGCG對(duì)慢性低劑量X線輻射后全基因組DNA甲基化水平的影響32-34
• 2.3 EGCG對(duì)慢性低劑量X線輻射后P53蛋白含量的影響34
• 2.4 EGCG對(duì)慢性低劑量X線輻射后MGMT表達(dá)的影響34-35
• 2.5 EGCG對(duì)慢性低劑量X線輻射后MGMT啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)的影響35-37
• 3 討論37-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 創(chuàng)新點(diǎn)44-45
• 綜述45-53
• 參考文獻(xiàn)49-53
• 致謝53-54
• 攻讀碩士學(xué)位期間論文發(fā)表54-55

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3 陳偉強(qiáng);李樹田;侯s，

本文編號(hào)：671883