本文關(guān)鍵詞：TLR2激動(dòng)劑云芝多糖減輕小腸輻射損傷和輔助結(jié)直腸癌放療的機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 云芝多糖 TLR2 小腸 輻射防護(hù) 結(jié)直腸癌

【摘要】：小腸是輻射的敏感組織，輻射對(duì)小腸的嚴(yán)重?fù)p傷極大地限制了腹部腫瘤放射治療和突發(fā)核事故中腸型放射病的救治。因此迫切需要找到預(yù)防和治療小腸輻射損傷的藥物來(lái)解決這些難題。 在眾多腸道輻射保護(hù)劑的研究中，Toll樣受體5激動(dòng)劑鞭毛蛋白為腸道的輻射防護(hù)帶來(lái)了振奮人心的結(jié)果。最近的研究顯示TLR2具有保持腸道上皮細(xì)胞功能性屏障完整的作用，其基因的缺失會(huì)加速黏膜損傷和對(duì)結(jié)腸炎易感。2011年，來(lái)源于蘑菇的云芝多糖polysaccharide Krestin（PSK）被證實(shí)也是TLR2的激動(dòng)劑，且PSK因?yàn)榧せ頝K細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞抑制腫瘤在臨床實(shí)驗(yàn)中已有應(yīng)用。鑒于此，本論文著重研究PSK對(duì)10Gy全身照射后小鼠小腸保護(hù)作用的靶細(xì)胞及機(jī)制，然后將其應(yīng)用于小鼠結(jié)直腸原位癌模型的放療中，研究其輔助放療抑制腫瘤生長(zhǎng)的機(jī)制，為其應(yīng)用于輔助腹部腫瘤放射治療進(jìn)行可行性探索。 一、云芝多糖減輕10Gy全身照射后小腸輻射損傷的機(jī)制研究 【目的】研究TLR2激動(dòng)劑PSK對(duì)10Gy全身照射后小腸輻射防護(hù)作用的機(jī)制。 【方法】將C57BL/6J雄性小鼠隨機(jī)分為10Gy單純照射組、照前0.5小時(shí)給藥組、照后24小時(shí)給藥組，PSK濃度為200mg/kg，腹腔注射，C57BL/6小鼠接受10Gy（200cGy/min）X線全身照射后，分別于照后4小時(shí)、6小時(shí)、14小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)和96小時(shí)取小腸利用雙重免疫熒光染色和原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)（TUNEL）研究小腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞（特指絨毛部）和隱窩細(xì)胞的凋亡情況；利用Ki-67和PCNA免疫組化研究其增殖情況；利用雙重免疫熒光染色及免疫組化研究Bax、Bcl-2、Akt1、Akt2、Akt3、p-Akt的表達(dá)情況；觀察記錄10Gy全身照射后C57BL/6小鼠、TLR2-/-和AKT1+/-小鼠的生存，繪制生存曲線。 【結(jié)果】10Gy全身照射后，小腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡在4小時(shí)和6小時(shí)較明顯；小腸上皮細(xì)胞的凋亡在6小時(shí)和96小時(shí)較明顯；隱窩細(xì)胞在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)凋亡都較明顯。PSK照前0.5小時(shí)給藥通過(guò)減少凋亡蛋白Bax的表達(dá)，升高抗凋亡蛋白Akt2、p-Akt、Bcl-2的表達(dá)減少內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡，但不能減少上皮細(xì)胞和隱窩細(xì)胞的凋亡。PSK照后24小時(shí)給藥通過(guò)升高隱窩細(xì)胞的Akt1、Akt3、p-Akt的表達(dá)促進(jìn)其增殖。PSK照前0.5小時(shí)或照后24小時(shí)給予均延長(zhǎng)10Gy全身照射C57BL/6小鼠的生存時(shí)間，但在TLR2-/-和AKT1+/-小鼠中作用消失。 【結(jié)論】PSK照前0.5小時(shí)給藥減少小腸內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，PSK照后24小時(shí)給藥促進(jìn)小腸隱窩增殖。PSK通過(guò)TLR2/Akt通路對(duì)小腸起到輻射防護(hù)作用。 二、云芝多糖輔助放療減少結(jié)直腸癌血管生成和增殖的作用研究 【目的】建立C57BL/6小鼠結(jié)直腸原位癌模型，研究PSK在結(jié)直腸原位癌放療中的作用。 【方法】在C57BL/6小鼠中建立氧化偶氮甲烷（AOM）/葡聚糖硫酸鈉（DSS）誘發(fā)的結(jié)直腸原位癌模型；將模型鼠分為4組，分別為不處理組（Untreated）、PSK單給藥組（PSK）、單純照射組（10Gy）、PSK給藥聯(lián)合照射組（10Gy+PSK），每組22只，腹部照射采用10Gy的電子束（6MeV，200cGy/min），PSK濃度為200mg/kg，于每次放療前半小時(shí)腹腔注射給予，放療每周1次，共進(jìn)行4次；每組中11只用來(lái)觀察體重變化及生存率；每組另有11只于4周后取材，統(tǒng)計(jì)結(jié)直腸腫瘤大小及分布，腫瘤組織的微血管密度、VEGF表達(dá)情況，觀察小腸組織的病理改變及其血管生成素-1（Angiopoietin-1）的表達(dá)情況。 【結(jié)果】10Gy+PSK組與不處理組、PSK單給藥組、單純照射組相比較顯著減小腫瘤體積。10Gy+PSK組與單純照射組相比較顯著減少腫瘤組織微血管密度，保持小腸結(jié)構(gòu)完整性，但對(duì)小腸Angiopoietin-1的表達(dá)沒有影響。10Gy+PSK組顯著減少模型鼠的體重?fù)p失，顯著延長(zhǎng)其生存時(shí)間。 【結(jié)論】 PSK能輔助放療減小結(jié)直腸癌的腫瘤體積，減少腫瘤組織的微血管密度。同時(shí)，，PSK能保持小腸的結(jié)構(gòu)完整，減少小鼠體重?fù)p失，延長(zhǎng)其生存時(shí)間。 綜上所述，本論文研究發(fā)現(xiàn)TLR2激動(dòng)劑PSK通過(guò)TLR2/Akt通路對(duì)10Gy全身照射后的小腸起到輻射防護(hù)作用，將其應(yīng)用于C57BL/6小鼠結(jié)直腸原位癌放療中，可以更加有效減小腫瘤體積及微血管密度并在一定程度上保護(hù)小腸，減少模型鼠體重?fù)p失，并延長(zhǎng)其生存時(shí)間，為PSK作為腸型放射病救治藥物和腹部腫瘤放療的輔助治療藥物提供實(shí)驗(yàn)支持。
【關(guān)鍵詞】：云芝多糖 TLR2 小腸 輻射防護(hù) 結(jié)直腸癌
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R735.34;R730.55
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 引言12-16
• 參考文獻(xiàn)14-16
• 第一部分 PSK 減輕 10 Gy全身照射后小腸輻射損傷的機(jī)制研究16-33
• 材料和方法17-21
• 結(jié)果21-30
• 討論30-31
• 參考文獻(xiàn)31-33
• 第二部分 PSK 輔助放療減少結(jié)直腸癌血管生成和增殖33-56
• （一）C57BL/6 小鼠結(jié)直腸原位癌模型的建立34-40
• 材料和方法34-36
• 結(jié)果36-39
• 討論39-40
• （二）PSK 在 C57BL/6 結(jié)直腸原位癌放療中的作用40-53
• 材料和方法40-44
• 結(jié)果44-51
• 討論51-53
• 參考文獻(xiàn)53-56
• 結(jié)論56-57
• 綜述57-66
• 參考文獻(xiàn)63-66
• 中英文對(duì)照縮略詞表66-67
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表的論文及科研成果67-68
• 致謝68-69

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 林凱璇;瞿秀華;趙曉航;;AOM/DSS模型與炎癥相關(guān)癌變研究進(jìn)展[J];生命科學(xué);2012年03期

本文編號(hào)：582712