本文關(guān)鍵詞：滇池水域中硅藻的法醫(yī)學檢驗

  更多相關(guān)文章： 硅藻18S rDNA PCR擴增 DNA測序 水中尸體 死因鑒定

【摘要】：[目的]：本研究旨在研究滇池水域中6個地點硅藻的種屬差異,運用掃描電鏡從形態(tài)上找出優(yōu)勢種群,豐富滇池水域中硅藻種群的數(shù)據(jù),揭示滇池水域中硅藻群落特征,為溺死尸體判斷落水地點奠定基礎,用動物實驗在掃描電鏡陽性結(jié)果下,運用18S rDNA測序法,從分子生物學角度檢測出硅藻,提高靈敏性,提高檢測陽性率,擴大檢測范圍,縮短檢測時間,降低檢測難度,為水中尸體的溺死診斷提供更多依據(jù)。[方法]：在滇池水域內(nèi)選取六個水樣采集點,分別于冬夏兩季各采樣500m1。先用微波消解法分別檢測滇池水樣、家兔和實際檢案；再用Chelex-100法、CTAB法和、Power Soil DNA Isolation Kit法提取水中硅藻DNA后,采用PCR技術(shù)擴增18S rDNA基因片段,并用瓊脂糖凝膠電泳、3130測序技術(shù)及BLAST對擴增產(chǎn)物進行檢測分析。待實驗方法及擴增體系穩(wěn)定后,取18只家兔進行動物實驗,其中2只作為陰性對照,余16只分別拋入采水點使其溺死。分別取實驗動物的心、肝、脾、肺、腎進行硅藻檢驗。[結(jié)果]：用Power Soil DNA Isolation Kit法提取硅藻DNA效果優(yōu)于傳統(tǒng)的Chelex-100法、CTAB法和微波消解法；掃描電鏡法得出滇池優(yōu)勢種屬為冠盤藻、直鏈藻、菱形藻、小環(huán)藻。動物實驗得出的溺死家兔肺組織中含有現(xiàn)場水樣中的大多數(shù)種類硅藻,如直鏈藻、小環(huán)藻、舟形藻、菱形藻等,肝腎脾也可以檢出。檢案得出的溺死尸體肺組織中含有現(xiàn)場水樣中的大多數(shù)種類硅藻,如直鏈藻、小環(huán)藻、舟形藻、菱形藻等;肝、腎、脾臟組織中所見硅藻種類有小環(huán)藻、冠盤藻、橋彎藻等。檢案中的硅藻種屬與水樣和動物實驗基本保持一致。水樣用18SrDNA測序法與掃描電鏡法結(jié)果保持一致;溺死組家兔內(nèi)臟組織均檢測出硅藻18S rDNA擴增產(chǎn)物,與掃描電鏡結(jié)果一致；肺中檢測例數(shù)最多,效果最佳；其次為腎、脾、肝和心,且檢出率較微波消解-掃描電鏡檢出率均更高,死后拋尸入水組均無擴增產(chǎn)物。在7例檢案中只有一例肺和一例肝中檢測到硅藻門,其余為陰性。[結(jié)論]：滇池水域中硅藻有冠盤藻、直鏈藻、菱形藻和小環(huán)藻,且用微波消解-電鏡掃描聯(lián)用效果較好,檢出率高,可用于水中尸體死亡原因的診斷方法；18S rDNA方法用于動物實驗的結(jié)果較理想,如果優(yōu)化硅藻DNA模板,設計更優(yōu)的硅藻特異性引物,可達到最大擴增效率,實現(xiàn)種屬精確鑒定,從而使溺死的鑒定及溺死地點的推斷更加準確、更加可信。
【關(guān)鍵詞】：硅藻18S rDNA PCR擴增 DNA測序 水中尸體 死因鑒定
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：D919
【目錄】：

• 縮略詞表5-6
• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 第一章 前言10-14
• 第二章 滇池水樣中的硅藻檢測方法的建立14-19
• 1 材料與方法14-18
• 2 實驗結(jié)果18-19
• 第三章 動物實驗19-28
• 1 材料與方法19-24
• 2 實驗結(jié)果24-28
• 第四章 溺死檢案實驗28-31
• 1 材料與方法28-31
• 2 實驗結(jié)果31
• 第五章 實驗結(jié)果的討論與結(jié)論31-34
• 1.實驗結(jié)果的討論31-33
• 2.實驗結(jié)論33-34
• 參考文獻34-36
• 附錄36-46
• 綜述46-54
• 參考文獻51-54
• 攻讀學位期間獲得的學術(shù)成果54-55
• 致謝55

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本文編號：543809