本文關(guān)鍵詞：臍帶間充質(zhì)干細胞聯(lián)合尼莫地平對放射性腦損傷小鼠模型的神經(jīng)保護作用

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【摘要】：背景放射性腦損傷是頭頸部腫瘤患者經(jīng)放射治療后產(chǎn)生的中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害性疾病,是最為嚴重的晚期并發(fā)癥之一。人源性臍帶間充質(zhì)干細胞(human umbilical cord derived mesenchymal stromal cells,hUC-MSCs)是一類具有自我更新、分化潛能、低免疫源性的成體干細胞,具有修復腦損傷的特點,在細胞再生醫(yī)學領(lǐng)域中具有巨大的應(yīng)用潛力。尼莫地平是一種雙氫吡啶類的鈣離子通道拮抗劑及神經(jīng)保護劑,可以選擇性增加腦血流量,使更多的MSCs定位于腦損傷部位,從而更有效的修復腦損傷。目的觀察hUC-MSCs及hUC-MSCs聯(lián)合尼莫地平治療放射性腦損傷的效果,探討其有效治療放射性腦病的可能機制。方法用組織貼壁法從臍帶中獲得hUC-MSCs用于細胞治療,6-8周雌性小鼠50只,給予單次15 Gy劑量60Coγ射線全腦照射后,隨機分為正常對照組、全腦照射組、尼莫地平治療組、間充質(zhì)干細胞治療組、間充質(zhì)干細胞聯(lián)合尼莫地平治療組。每周觀察體重變化;治療4周和12周給予小鼠曠場實驗和跳臺實驗檢測自主運動、焦慮、記憶等行為學變化;治療12周后,通過HE染色、免疫組化觀察神經(jīng)細胞形態(tài)變化,通過Western Blot和q-PCR做凋亡檢測。結(jié)果1.HUC-MSCs高表達CD90、CD73、HLA-DR,不表達CD34、CD45;可以向成脂、成骨、成軟骨分化。2.HUC-MSCs可以成功定植于損傷腦組織局部,在不同治療后24小時后hMSCs達到腦組織的量。而且MSC+NIMO組β-globin的表達量明顯高于MSCs組(P0.01),證明hUC-MSCs聯(lián)合尼莫地平可以促進MSCs在小鼠腦組織的定植。3.在全腦照射后12周,與正常組相比,wbi組和nimo組,小鼠的平均體重均降低;但與wbi組和nimo組相比,msc組和msc+nimo組的小鼠平均體重均有顯著增加(p0.05),尤其在msc+nimo組的小鼠平均體重增加更明顯(p0.05)。4.在全腦照射后4周,五組不同治療組之間,總的距離,總的穿越格子數(shù)沒有統(tǒng)計學差異;但是,在全腦照射后12周,與wbi組相比,msc組和msc+nimo組的小鼠在曠場實驗中總的距離,總的穿越格子數(shù)有明顯的增加,且其差異有明顯的統(tǒng)計學差異(p0.05)。在全腦照射后4周和12周,與正常對照組相比,wbi組和nimo組的小鼠在中心區(qū)域所持續(xù)的時間和在中心區(qū)域行進的距離明顯縮短(p0.05);與wbi組相比,msc組和msc+nimo組的小鼠在中心區(qū)域所持續(xù)的時間和在中心區(qū)域行進的距離明顯延長(p0.05);在全腦照射后12周,與msc組相比,msc+nimo組的小鼠在中心區(qū)域所持續(xù)的時間和在中心區(qū)域行進的距離顯著延長(p0.05)。5.在全腦照射后4周和12周,與正常對照組相比,wbi組和nimo組的小鼠學習潛伏期(跳上所需時間)明顯延長(p0.05),記憶潛伏期(跳下所需時間)明顯縮短(p0.05),5分鐘內(nèi)錯誤次數(shù)明顯增多(p0.05);在全腦照射后4周,與wbi組相比,msc組和msc+nimo組的小鼠學習潛伏期明顯縮短(p0.05),記憶潛伏期明顯延長(p0.05),5分鐘內(nèi)錯誤次數(shù)明顯減少(p0.05);msc組和msc+nimo組小鼠的記錄結(jié)果沒有明顯差異。但是在全腦照射后12周,與msc組相比,msc+nimo組的小鼠學習潛伏期明顯縮短(p0.05),記憶潛伏期明顯延長(p0.05),5分鐘內(nèi)錯誤次數(shù)明顯減少(p0.05)。6.全腦照射后12周,在正常對照組、msc組和msc+nimo組中,dg區(qū)和ca1區(qū)神經(jīng)元分別是密集而清晰,相反,wbi組和nimo組的海馬dg區(qū)和ca1區(qū)的神經(jīng)元損傷嚴重,表現(xiàn)為神經(jīng)元的核固縮、形態(tài)輪廓不規(guī)則。我們計數(shù)觀察,與wbi組和nimo組對比,msc組和msc+nimo組中,神經(jīng)元核固縮、凋亡的數(shù)量明顯降低。msc+nimo組的神經(jīng)元存活數(shù)更多,尤其ca1區(qū)(p0.05);而wbi組和nimo組的dg區(qū)和ca1區(qū)神經(jīng)元存活數(shù)無明顯差異。7.在全腦照射后12周,與正常對照組、MSC組和MSC+NIMO組相比,WBI組和NIMO組的GFAP+細胞數(shù)明顯減少(P0.05),而MSC組和MSC+NIMO組的GFAP+細胞數(shù)明顯增多(P0.05);同時,我們檢測了GFAP的mRNA水平的表達,與正常對照組、MSC組和MSC+NIMO組相比,WBI組和NIMO組的GFAP的mRNA水平的表達明顯降低(P0.05),而MSC組和MSC+NIMO組GFAP的mRNA水平的表達明顯增多(P0.05);同時發(fā)現(xiàn),MSC+NIMO組的GFAP+細胞數(shù)和GFAP的m RNA水平的表達量均高于MSC組。8.在全腦照射后12周,與正常組相比,WBI組和NIMO組的P53、Bax的mRNA和蛋白的表達量明顯增加(P0.05),而Bcl-2的mRNA和蛋白的表達量明顯降低(P0.05);然而,與WBI組相比,MSC組和MSC+NIMO組P53、Bax的m RNA和蛋白的表達量明顯降低(P0.05),而Bcl-2的mRNA和蛋白的表達量明顯增加(P0.05)。尤其,與MSC組相比,MSC+NIMO組的凋亡檢測指標更具有統(tǒng)計學差異(P0.05)。結(jié)論1.HUC-MSCs可以改善放射性腦損傷小鼠的體重變化、行為學異常及病理學變化;2.HUC-MSCs聯(lián)合尼莫地平可以更有效改善放射性腦損傷小鼠體重變化、行為學異常及病理學變化;3.HUC-MSCs聯(lián)合尼莫地平有效放射性腦損傷小鼠可能是通過抑制腦部細胞的凋亡和促進MSCs在小鼠腦組織的定植。
【關(guān)鍵詞】：放射性腦損傷 人源性臍帶間充質(zhì)干細胞 尼莫地平 抗凋亡
【學位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R730.55;R-332
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-12
• 前言12-14
• 1 實驗材料14-21
• 2 實驗方法21-31
• 3 實驗結(jié)果31-35
• 4 討論35-38
• 5 結(jié)論38-39
• 6 附圖39-47
• 參考文獻47-51
• 綜述：間充質(zhì)干細胞治療放射性腦損傷的研究進展51-66
• 參考文獻60-66
• 附錄66-67
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況67-68
• 致謝68-69
• 個人簡歷69

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