本文關(guān)鍵詞：臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合尼莫地平對放射性腦損傷小鼠模型的神經(jīng)保護(hù)作用

  更多相關(guān)文章： 放射性腦損傷 人源性臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞 尼莫地平 抗凋亡

【摘要】：背景放射性腦損傷是頭頸部腫瘤患者經(jīng)放射治療后產(chǎn)生的中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害性疾病,是最為嚴(yán)重的晚期并發(fā)癥之一。人源性臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical cord derived mesenchymal stromal cells,hUC-MSCs)是一類具有自我更新、分化潛能、低免疫源性的成體干細(xì)胞,具有修復(fù)腦損傷的特點(diǎn),在細(xì)胞再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中具有巨大的應(yīng)用潛力。尼莫地平是一種雙氫吡啶類的鈣離子通道拮抗劑及神經(jīng)保護(hù)劑,可以選擇性增加腦血流量,使更多的MSCs定位于腦損傷部位,從而更有效的修復(fù)腦損傷。目的觀察hUC-MSCs及hUC-MSCs聯(lián)合尼莫地平治療放射性腦損傷的效果,探討其有效治療放射性腦病的可能機(jī)制。方法用組織貼壁法從臍帶中獲得hUC-MSCs用于細(xì)胞治療,6-8周雌性小鼠50只,給予單次15 Gy劑量60Coγ射線全腦照射后,隨機(jī)分為正常對照組、全腦照射組、尼莫地平治療組、間充質(zhì)干細(xì)胞治療組、間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合尼莫地平治療組。每周觀察體重變化;治療4周和12周給予小鼠曠場實(shí)驗(yàn)和跳臺實(shí)驗(yàn)檢測自主運(yùn)動、焦慮、記憶等行為學(xué)變化;治療12周后,通過HE染色、免疫組化觀察神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)變化,通過Western Blot和q-PCR做凋亡檢測。結(jié)果1.HUC-MSCs高表達(dá)CD90、CD73、HLA-DR,不表達(dá)CD34、CD45;可以向成脂、成骨、成軟骨分化。2.HUC-MSCs可以成功定植于損傷腦組織局部,在不同治療后24小時后hMSCs達(dá)到腦組織的量。而且MSC+NIMO組β-globin的表達(dá)量明顯高于MSCs組(P0.01),證明hUC-MSCs聯(lián)合尼莫地平可以促進(jìn)MSCs在小鼠腦組織的定植。3.在全腦照射后12周,與正常組相比,wbi組和nimo組,小鼠的平均體重均降低;但與wbi組和nimo組相比,msc組和msc+nimo組的小鼠平均體重均有顯著增加(p0.05),尤其在msc+nimo組的小鼠平均體重增加更明顯(p0.05)。4.在全腦照射后4周,五組不同治療組之間,總的距離,總的穿越格子數(shù)沒有統(tǒng)計學(xué)差異;但是,在全腦照射后12周,與wbi組相比,msc組和msc+nimo組的小鼠在曠場實(shí)驗(yàn)中總的距離,總的穿越格子數(shù)有明顯的增加,且其差異有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05)。在全腦照射后4周和12周,與正常對照組相比,wbi組和nimo組的小鼠在中心區(qū)域所持續(xù)的時間和在中心區(qū)域行進(jìn)的距離明顯縮短(p0.05);與wbi組相比,msc組和msc+nimo組的小鼠在中心區(qū)域所持續(xù)的時間和在中心區(qū)域行進(jìn)的距離明顯延長(p0.05);在全腦照射后12周,與msc組相比,msc+nimo組的小鼠在中心區(qū)域所持續(xù)的時間和在中心區(qū)域行進(jìn)的距離顯著延長(p0.05)。5.在全腦照射后4周和12周,與正常對照組相比,wbi組和nimo組的小鼠學(xué)習(xí)潛伏期(跳上所需時間)明顯延長(p0.05),記憶潛伏期(跳下所需時間)明顯縮短(p0.05),5分鐘內(nèi)錯誤次數(shù)明顯增多(p0.05);在全腦照射后4周,與wbi組相比,msc組和msc+nimo組的小鼠學(xué)習(xí)潛伏期明顯縮短(p0.05),記憶潛伏期明顯延長(p0.05),5分鐘內(nèi)錯誤次數(shù)明顯減少(p0.05);msc組和msc+nimo組小鼠的記錄結(jié)果沒有明顯差異。但是在全腦照射后12周,與msc組相比,msc+nimo組的小鼠學(xué)習(xí)潛伏期明顯縮短(p0.05),記憶潛伏期明顯延長(p0.05),5分鐘內(nèi)錯誤次數(shù)明顯減少(p0.05)。6.全腦照射后12周,在正常對照組、msc組和msc+nimo組中,dg區(qū)和ca1區(qū)神經(jīng)元分別是密集而清晰,相反,wbi組和nimo組的海馬dg區(qū)和ca1區(qū)的神經(jīng)元損傷嚴(yán)重,表現(xiàn)為神經(jīng)元的核固縮、形態(tài)輪廓不規(guī)則。我們計數(shù)觀察,與wbi組和nimo組對比,msc組和msc+nimo組中,神經(jīng)元核固縮、凋亡的數(shù)量明顯降低。msc+nimo組的神經(jīng)元存活數(shù)更多,尤其ca1區(qū)(p0.05);而wbi組和nimo組的dg區(qū)和ca1區(qū)神經(jīng)元存活數(shù)無明顯差異。7.在全腦照射后12周,與正常對照組、MSC組和MSC+NIMO組相比,WBI組和NIMO組的GFAP+細(xì)胞數(shù)明顯減少(P0.05),而MSC組和MSC+NIMO組的GFAP+細(xì)胞數(shù)明顯增多(P0.05);同時,我們檢測了GFAP的mRNA水平的表達(dá),與正常對照組、MSC組和MSC+NIMO組相比,WBI組和NIMO組的GFAP的mRNA水平的表達(dá)明顯降低(P0.05),而MSC組和MSC+NIMO組GFAP的mRNA水平的表達(dá)明顯增多(P0.05);同時發(fā)現(xiàn),MSC+NIMO組的GFAP+細(xì)胞數(shù)和GFAP的m RNA水平的表達(dá)量均高于MSC組。8.在全腦照射后12周,與正常組相比,WBI組和NIMO組的P53、Bax的mRNA和蛋白的表達(dá)量明顯增加(P0.05),而Bcl-2的mRNA和蛋白的表達(dá)量明顯降低(P0.05);然而,與WBI組相比,MSC組和MSC+NIMO組P53、Bax的m RNA和蛋白的表達(dá)量明顯降低(P0.05),而Bcl-2的mRNA和蛋白的表達(dá)量明顯增加(P0.05)。尤其,與MSC組相比,MSC+NIMO組的凋亡檢測指標(biāo)更具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論1.HUC-MSCs可以改善放射性腦損傷小鼠的體重變化、行為學(xué)異常及病理學(xué)變化;2.HUC-MSCs聯(lián)合尼莫地平可以更有效改善放射性腦損傷小鼠體重變化、行為學(xué)異常及病理學(xué)變化;3.HUC-MSCs聯(lián)合尼莫地平有效放射性腦損傷小鼠可能是通過抑制腦部細(xì)胞的凋亡和促進(jìn)MSCs在小鼠腦組織的定植。
【關(guān)鍵詞】：放射性腦損傷 人源性臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞 尼莫地平 抗凋亡
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R730.55;R-332
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-12
• 前言12-14
• 1 實(shí)驗(yàn)材料14-21
• 2 實(shí)驗(yàn)方法21-31
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-35
• 4 討論35-38
• 5 結(jié)論38-39
• 6 附圖39-47
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 綜述：間充質(zhì)干細(xì)胞治療放射性腦損傷的研究進(jìn)展51-66
• 參考文獻(xiàn)60-66
• 附錄66-67
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況67-68
• 致謝68-69
• 個人簡歷69

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