發(fā)布時(shí)間：2017-07-05 15:26

  本文關(guān)鍵詞：深靜脈血栓形成時(shí)間推斷研究

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【摘要】：目的:深靜脈血栓(deep venous thrombosis,DVT)是血液在深靜脈內(nèi)異常凝結(jié)形成血栓引起的靜脈回流障礙性疾病,血栓脫落可引起肺動(dòng)脈栓塞(pulmonary embolism,PE)。兩者在形成過(guò)程、發(fā)病機(jī)制及治療上頗為相似,常將兩者合稱為靜脈血栓栓塞癥(venous thromboembolism,VTE)。VTE發(fā)病率僅次于急性冠狀動(dòng)脈綜合征和腦卒中,其危害范圍廣而嚴(yán)重。據(jù)統(tǒng)計(jì),血栓栓塞致死案件約占法醫(yī)病理學(xué)鑒定案例死亡原因的5%。臨床上常根據(jù)血液學(xué)、影像學(xué)等手段來(lái)診斷肺栓塞;而法醫(yī)檢案過(guò)程中遇到的致命性肺栓塞案例,通過(guò)尸體解剖肉眼可見明顯肺動(dòng)脈血栓及下肢深靜脈(通常是乆靜脈)血栓形成,并結(jié)合常規(guī)法醫(yī)病理學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)對(duì)此作出鑒定。但VTE的發(fā)生常見于創(chuàng)傷、制動(dòng)等存在的前提下,法醫(yī)鑒定時(shí)需闡明創(chuàng)傷與肺栓塞之間是否存在因果關(guān)系,若涉及多項(xiàng)危險(xiǎn)因素并存,需闡明這些因素參與程度的大小即傷病參與度,血栓形成時(shí)間、及其與創(chuàng)傷存在時(shí)間上的先后、血栓來(lái)源等問題。目前關(guān)于血栓形成時(shí)間推斷尚缺乏系統(tǒng)研究,在法醫(yī)鑒定時(shí)也缺乏有效指標(biāo)和統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。而血栓形成時(shí)間推斷研究對(duì)解決上述法醫(yī)鑒定問題具有現(xiàn)實(shí)意義。本實(shí)驗(yàn)在建立大鼠下腔靜脈血栓形成模型的基礎(chǔ)上,結(jié)合該類案件法醫(yī)鑒定的組織標(biāo)本,采用HE染色、Von Kossa染色、Perl’s染色、Masson三色法染色及免疫組織化學(xué)染色方法,對(duì)血栓形成部位的組織病理學(xué)改變進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察,研究血小板膜糖蛋白-Ⅲa(CD61)、平滑肌動(dòng)蛋白(α-SMA)、CD34在血栓形成不同時(shí)間點(diǎn)的變化規(guī)律,以期為血栓形成時(shí)間推斷的法醫(yī)學(xué)鑒定提供科學(xué)依據(jù)。方法:1動(dòng)物實(shí)驗(yàn):大鼠下腔靜脈血栓HE染色、Von Kossa染色、Perl’s染色、Masson染色和免疫組織化學(xué)染色。實(shí)驗(yàn)分組:健康清潔級(jí)Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠80只,體重250g±10g,適應(yīng)環(huán)境飼養(yǎng)1周,按完全隨機(jī)分組方法隨機(jī)分為下腔靜脈狹窄術(shù)后0h、3h、6h、12h、1d、3d、1w、2w、3w和4w等10組,每組8只。建立下腔靜脈“狹窄法”動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?按上述分組時(shí)間點(diǎn)麻醉大鼠進(jìn)行下腔靜脈取材,取材后立即放入10%中性甲醛中固定,對(duì)血栓形成部位進(jìn)行he染色、vonkossa染色、perl’s染色及masson染色,應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色方法觀察血栓形成過(guò)程中各組cd61、α-sma、cd34表達(dá)的變化。2人組織標(biāo)本實(shí)驗(yàn):回顧性分析河北醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)鑒定中心肺栓塞死亡案例,對(duì)下肢深靜脈及肺動(dòng)脈血栓部位石蠟包埋組織塊切片后進(jìn)行he染色及cd61、α-sma、cd34免疫組織化學(xué)染色,觀察其組織病理學(xué)形態(tài)變化及上述蛋白的表達(dá)變化,分析血栓形成時(shí)間與創(chuàng)傷時(shí)間的關(guān)系。數(shù)據(jù)以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±sd)”表示,用spss21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,各組均數(shù)的比較行單因素方差分析(anova),用最小顯著差法(leastsignificantdifference,lsd)作兩兩比較,以p0.05為有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果:1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)1.1下腔靜脈血栓染色1.1.1下腔靜脈血栓he染色0h組血管內(nèi)淤血樣改變;3h組、6h組管腔內(nèi)部附壁白色血栓形成,并向血管腔延伸,其間可見少許纖維素樣成分析出,中性粒細(xì)胞開始增多;12h組血小板小梁大量形成并聚集成片狀,至1d組達(dá)其峰值,小梁間充滿紅白細(xì)胞;3d組血栓與管壁接觸面可見成纖維細(xì)胞;1w-3w組血栓收縮,內(nèi)部出現(xiàn)裂隙,裂隙表面可見內(nèi)皮細(xì)胞,新生血管形成,血栓增生樣改變,管壁緊密黏著的血栓開始機(jī)化,大量纖維成分由黏著部位向血栓內(nèi)部浸潤(rùn)生長(zhǎng),單核細(xì)胞胞核增大,含鐵血黃素滲出,巨噬細(xì)胞體積增大數(shù)量增多,鈣鹽形成,二次狹窄管腔可見少量新生白色血栓;4w組血管內(nèi)膜增生樣改變,血栓被機(jī)化組織取代,血管再通。1.1.2下腔靜脈血栓perl’s染色perl’s染色可將含鐵血黃素顆粒染成藍(lán)色。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)含鐵血黃素顆粒最早見于建模3d組,其散落于血栓內(nèi)部;1w-3w組含鐵血黃素含量迅速增多,且常位于與血管壁粘連的血栓邊緣部位,但血栓內(nèi)部亦可見,3組間比較無(wú)明顯差異;4w組機(jī)化的血栓組織中含鐵血黃素顆粒大量沉積,與各組間比較有明顯差異(p0.05)。1.1.3下腔靜脈血栓vonkossa染色vankossa氏銀染色法(vk染色)可將鈣鹽沉積染成黑色。1w-2w組鈣鹽沉積散在分布于機(jī)化的血栓組織的邊緣部位,兩組比較無(wú)明顯差異;隨著建模時(shí)間的延長(zhǎng),3w、4w組包含大量鈣鹽的異物巨噬細(xì)胞體積增大數(shù)量增多,未經(jīng)吸收的鈣鹽直接存在于血栓組織中,鈣化形成靜脈石。隨時(shí)間延長(zhǎng)各組鈣鹽沉積量呈增多趨勢(shì)。3w、4w組分別與各組比較有明顯差異(p0.05)。1.1.4下腔靜脈血栓masson染色masson染色可將膠原纖維、粘液染呈綠色,胞漿、肌肉、纖維素呈紅色、胞核呈清晰黑藍(lán)色。1-3d組血栓內(nèi)膠原沉積區(qū)域較少;隨建模時(shí)間延長(zhǎng),膠原沉積由血栓邊緣部逐漸向血栓內(nèi)部蔓延,至4w組可見大量膠原沉積,充滿整個(gè)管腔。3d、1w和2w各組間比較無(wú)明顯差異,3w、4w組與各組比較有明顯差異(p0.05)。1.2下腔靜脈血栓免疫組織化學(xué)染色1.2.1下腔靜脈血栓cd61免疫組織化學(xué)染色3h組血栓形成部位散在表達(dá);6h組靠近管壁的層狀血小板小梁內(nèi)表達(dá);至1d組達(dá)到表達(dá)峰值,3d、1w組cd61表達(dá)顯著下降;2-4w組僅在二次狹窄的管腔內(nèi)血栓再形成部位表達(dá)。1d組與各組比較差異明顯(p0.05);1.2.2下腔靜脈血栓α-sma免疫組織化學(xué)染色α-sma為平滑肌動(dòng)蛋白,在血栓機(jī)化過(guò)程中表達(dá)于成纖維細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)在3d組內(nèi)血栓的邊緣發(fā)現(xiàn)少許α-sma的陽(yáng)性表達(dá);1w組達(dá)到表達(dá)高峰,2-4w組僅在部分新生成的毛細(xì)血管壁內(nèi)表達(dá),1w組與各組比較有明顯差異(p0.05)。1.2.3下腔靜脈血栓cd34免疫組織化學(xué)染色cd34為血管內(nèi)皮特異性標(biāo)記物,本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)cd34最早于3d組靠近管壁部位的血栓內(nèi)散在表達(dá);1w組新生血管形成增加,cd34表達(dá)占原血管腔面積的7%;2-4w組新生血管密集融合,4w組cd34表達(dá)面積可達(dá)原血管腔面積的22.8%,其內(nèi)可見紅細(xì)胞成分。3d組與1w組比較無(wú)明顯差異,4w組與3d和1w組比較有明顯差異(p0.05),2w、3w、4w間相互比較無(wú)明顯差異。2人體組織實(shí)驗(yàn)2.1深靜脈血栓he染色早期血栓血小板黏附聚集于管壁裸露膠原,附壁血栓形成混合血栓頭部,纖維素滲出;隨后血小板大量聚集,進(jìn)而進(jìn)展形成大量血小板小梁,小梁網(wǎng)絡(luò)紅白細(xì)胞、纖維素形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),交替形成混合血栓。混合血栓逐漸增大阻塞管腔,紅細(xì)胞聚集形成血栓尾部。血栓形成晚期內(nèi)皮細(xì)胞、纖維母細(xì)胞向血栓內(nèi)部生長(zhǎng),血栓開始機(jī)化,較大血栓收縮內(nèi)部出現(xiàn)裂隙內(nèi)皮細(xì)胞附于表面,新鮮毛細(xì)血管形成,進(jìn)而融合成較大管腔血管,血管再通;血栓脫落可形成肺栓塞。2.2靜脈血栓免疫組織化學(xué)染色肺動(dòng)脈CD61片狀表達(dá)(創(chuàng)傷骨折23天死亡案例);乆靜脈血栓形成部位邊緣α-SMA陽(yáng)性表達(dá)(骨折31天死亡案例);乆靜脈形成血栓內(nèi)部CD34大量表達(dá)(骨折43天死亡案例)。結(jié)論:1大鼠模型靜脈血栓特殊染色(VK染色、Perl’s染色、Masson染色)和免疫組織化學(xué)染色(CD61、α-SMA、CD34)均發(fā)現(xiàn)血栓形成不同時(shí)間分期的變化特點(diǎn):CD61可用于血栓形成超早期及血栓再形成時(shí)期,Perl’s染色可用于血栓形成中期;而Masson染色和α-SMA則可用于血栓形成中晚期;VK染色及CD34可用于血栓轉(zhuǎn)歸過(guò)程晚期的時(shí)間推斷。以上血栓形成不同時(shí)間的推斷的特異性特點(diǎn)可為法醫(yī)血栓形成時(shí)間推斷提供參考依據(jù)。2人體組織部分實(shí)驗(yàn)表明上述指標(biāo)方法對(duì)于初步探索人體肺栓塞案例血栓形成時(shí)間推斷的研究有一定意義。
【關(guān)鍵詞】：法醫(yī)病理學(xué) 深靜脈血栓 肺栓塞 血栓形成時(shí)間 免疫組織化學(xué) 特殊染色
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：D919
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-14
• 英文縮寫14-15
• 前言15-16
• 材料與方法16-26
• 結(jié)果26-29
• 附圖29-48
• 附表48-51
• 討論51-58
• 結(jié)論58-59
• 參考文獻(xiàn)59-63
• 綜述 深靜脈血栓形成研究進(jìn)展63-72
• 參考文獻(xiàn)68-72
• 致謝72-73
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷73

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前9條

1 李曉強(qiáng);王深明;;深靜脈血栓形成的診斷和治療指南(第二版)[J];中國(guó)血管外科雜志(電子版);2013年01期

2 賽力克·馬高維亞;王護(hù)國(guó);羅軍;哈爾曼;艾則孜;江濤;;一種適合動(dòng)態(tài)研究的大鼠深靜脈血栓動(dòng)物模型[J];中國(guó)普外基礎(chǔ)與臨床雜志;2008年06期

3 高峰;胡建國(guó);關(guān)薇薇;;SD大鼠深靜脈血栓模型的建立及其靜脈壁形態(tài)學(xué)研究[J];江西醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2008年02期

4 張春強(qiáng);黃河;趙學(xué)凌;何飛;殷亮;趙智;唐錫章;周兆文;李世和;;兩種創(chuàng)傷性深靜脈血栓大鼠模型中炎癥相關(guān)基因的表達(dá)研究[J];生物醫(yī)學(xué)工程研究;2007年01期

5 張鵬;施海彬;劉圣;李麟蓀;;犬下肢深靜脈血栓模型的實(shí)驗(yàn)研究[J];介入放射學(xué)雜志;2006年05期

6 張智輝;林少芒;姚燕丹;張皓;張柏根;;大鼠后肢深靜脈血栓模型的制備與研究[J];現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)生物工程學(xué)雜志;2006年02期

7 趙學(xué)凌,吳雪梅,王兵,趙宏斌,周兆文,趙智;大鼠創(chuàng)傷性肢體深靜脈血栓形成新型動(dòng)物模型的建立[J];昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2005年01期

8 熊正文,王炳勝,朱光君,蘇紅,李春光,安趙栓;CD_(34)、CD_(31)與F_(Ⅷ)顯示非小細(xì)胞肺癌微血管密度的對(duì)比研究[J];中國(guó)醫(yī)師雜志;2003年04期

9 楊軍,屈立志,楊霄,奚九一;通塞脈片對(duì)深靜脈血栓形成纖溶功能的實(shí)驗(yàn)觀察[J];中藥新藥與臨床藥理;2003年01期

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本文編號(hào)：522560