目的:通過檢測(cè)大鼠損傷骨骼肌組織中衛(wèi)星細(xì)胞內(nèi)經(jīng)典Wnt通路下游基因MRFs以及Pax7的表達(dá)水平,分析是否呈現(xiàn)一定的時(shí)間規(guī)律,能否應(yīng)用于損傷時(shí)間的推斷。方法:1.制備成年大鼠骨骼肌挫傷模型:購買健康成年雄性SD大鼠(體重200±5 g)258只,隨機(jī)選取6只用作骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞分離提取的純度檢測(cè)實(shí)驗(yàn);其余動(dòng)物進(jìn)行隨機(jī)分組:實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組再依據(jù)不同損傷時(shí)間(0 h、4 h、8h、12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、3 d、4 d、5 d、6 d、7 d)分為13個(gè)亞組,共14組,每組18只。采用改良的自由落體法制備大鼠骨骼肌挫傷模型,依據(jù)設(shè)定的時(shí)間點(diǎn)腹腔注射2%戊巴比妥鈉(30.0 mg/100 g)麻醉過量處死大鼠,之后提取損傷區(qū)域的骨骼肌組織;對(duì)照組大鼠采用相同的方式處死并取材。2.大鼠挫傷肌組織的形態(tài)學(xué)觀察:將組織塊固定于4%多聚甲醛溶液48h后,制作成石蠟切片,進(jìn)行HE染色,觀察骨骼肌損傷區(qū)域的病理組織學(xué)特點(diǎn)。3.骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞提純檢測(cè)實(shí)驗(yàn):采用兩步酶消化法(Ⅱ型膠原酶和胰蛋白酶)并結(jié)合差速貼壁法從未損傷的大鼠右后肢骨骼肌中提取并純化出靜止期骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞群,...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
常用縮寫詞中英文對(duì)照表
前言
1 材料與方法
    1.1 主要試劑與儀器
    1.2 動(dòng)物模型制備
        1.2.1 動(dòng)物分組
        1.2.2 大鼠骨骼肌挫傷模型制備及檢材提取
    1.3 HE染色
    1.4 靜止衛(wèi)星細(xì)胞群的提純及鑒定
    1.5 實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組大鼠骨骼肌組織中衛(wèi)星細(xì)胞的提取
    1.6細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)
    1.7 PCR 實(shí)驗(yàn)
        1.7.1 總RNA提取
        1.7.2 總RNA濃度及純度檢測(cè)
        1.7.3 總RNA反轉(zhuǎn)錄
        1.7.4 引物設(shè)計(jì)
        1.7.5 內(nèi)參基因、目的基因的擴(kuò)增效率及引物特異性檢測(cè)
    1.8 實(shí)驗(yàn)結(jié)果處理
2 結(jié)果
    2.1 骨骼肌組織HE染色結(jié)果
    2.2 未損傷骨骼肌組織中提取靜止的骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞群
    2.3 挫傷骨骼肌組織中衛(wèi)星細(xì)胞的免疫熒光染色結(jié)果分析
    2.4 骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞中Pax7和MRFs mRNA的表達(dá)水平
3 討論及結(jié)論
    3.1 分離提取及純化肌衛(wèi)星細(xì)胞方法的選擇
    3.2 骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的鑒定及經(jīng)典Wnt信號(hào)通路中參與骨骼肌損傷后修復(fù)的蛋白表達(dá)研究
    3.3 經(jīng)典Wnt通路中參與骨骼肌損傷后修復(fù)的相關(guān)基因mRNA的表達(dá)研究
參考文獻(xiàn)
綜述
    1 骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的含量及分布
    2 骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的分離提取
    3 骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的純化
    4 骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的鑒定
    參考文獻(xiàn)
致謝
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