目的:線粒體形態(tài)分布的動態(tài)變化深刻地影響著線粒體功能、細胞能量代謝。線粒體移動的機制研究剛剛起步,對骨骼肌細胞中線粒體移動的變化及過氧化氫(H2O2)、Ca2+對骨骼肌細胞線粒體移動調(diào)控分子機制的認識尚不清楚。本研究擬以急性運動為模型,研究骨骼肌在能量需求急劇變化過程中,線粒體移動與融合分裂蛋白表達的動態(tài)改變、H2O2濃度及線粒體功能變化特征,初步探討線粒體移動、融合、分裂蛋白動態(tài)表達之間的可能關(guān)系及其生理意義。并試圖通過離體實驗進一步深入研究外源H2O2造成適度氧化應(yīng)激條件下,線粒體動力學變化特征及其調(diào)控機制。從線粒體形態(tài)、分布的動力學新視角探究H2O2、Ca2+參與調(diào)控線粒體移動分布的細胞信號轉(zhuǎn)導微細過程及其對線粒體融合分裂動態(tài)變化的影響。為進一步研究運動性疲勞,運動防治代謝性疾病、神經(jīng)退行性疾病和衰老提供新靶向和理論依據(jù)。 方法:以C57 BL/6小鼠一次中等強度負荷跑臺運動(0°,13m/min)為實驗?zāi)Ｐ?隨機分為5組:安靜對照組(R)、運動30min(E30)、60 min(E60)、90 min(E90)、120min(E120)組,分別應(yīng)用Oxytherm液相氧電極測定...

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學位級別】：博士

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中文摘要
Abstract
前言
第一部分 急性運動中骨骼肌線粒體移動與線粒體動力學的變化特征
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料與儀器
        1.2 實驗方法
        1.3 數(shù)據(jù)處理
    2 實驗結(jié)果
        2.1 急性運動中骨骼肌Miro1 基因表達和蛋白含量變化特征
        2.2 急性運動中骨骼肌融合分裂蛋白基因表達變化特征
        2.3 急性運動中骨骼肌Miro1蛋白分布特征
        2.4 急性運動中骨骼肌H₂O₂濃度變化
        2.5 急性運動中骨骼肌線粒體力能學分析
    3 小結(jié)
第二部分 外源H₂O₂對骨骼肌成肌細胞線粒體移動與融合分裂的影響
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料與儀器
        1.2 實驗方法
        1.3 數(shù)據(jù)處理
    2 實驗結(jié)果
        2.1 外源H₂O₂ 對C2C12 骨骼肌成肌細胞的影響
            2.1.1 不同濃度H₂O₂ 對C2C12 細胞的影響
            2.1.2 10μmol/L H₂O₂ 處理不同時間對 C2C12 細胞 Miro1 基因蛋白表達的影響
            2.1.3 H₂O₂ 對 C2C12 細胞 Miro1 基因及蛋白表達影響中 Ca²⁺的作用
        2.2 H₂O₂ 對C2C12 骨骼肌成肌細胞融合分裂蛋白表達的影響
            2.2.1 不同濃度 H₂O₂ 對 C2C12 細胞 Mfn2、Drp1 基因及蛋白表達的影響
            2.2.2 10μmol/L H₂O₂ 處理不同時間對 C2C12 細胞融合分裂基因蛋白表達的影響
    3 小結(jié)
第三部分 H₂O₂、Ca²⁺對骨骼肌成肌細胞線粒體移動的影響及其調(diào)控機制
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料與儀器
        1.2 實驗方法
        1.3 數(shù)據(jù)處理
    2 實驗結(jié)果
        2.1 Ca²⁺對C2C12 骨骼肌成肌細胞線粒體移動調(diào)控特征及其機制
            2.1.1 C2C12 細胞線粒體移動模式
            2.1.2 CaCl₂、EGTA 誘導C2C12 細胞線粒體移動特征
            2.1.3 CaCl₂、EGTA 誘導C2C12 細胞[H₂O₂]_i 動力學變化特征
            2.1.4 CaCl₂、EGTA 誘導C2C12 細胞[Ca²⁺]_i 及[Ca²⁺]_m 動力學變化特征
        2.2 H₂O₂ 調(diào)控C2C12 骨骼肌成肌細胞線粒體移動特征
            2.2.1 外源10μmol/L H₂O₂誘導C2C12 細胞[H₂O₂]_i動力學變化特征
            2.2.2 外源不同濃度H₂O₂ 誘導C2C12 細胞線粒體移動特征
        2.3 H₂O₂對骨骼肌成肌細胞線粒體移動的調(diào)控機制
            2.3.1 胞外Ca²⁺參與H₂O₂ 對C2C12 細胞線粒體移動的調(diào)控
            2.3.2 H₂O₂誘導骨骼肌細胞[Ca²⁺]_i 及[Ca²⁺]_m動力學變化特征
            2.3.3 肌漿網(wǎng)Ca²⁺參與H₂O₂調(diào)控的線粒體移動增加
    3 小結(jié)
第四部分 討論
    1 急性運動中骨骼肌線粒體移動與線粒體動力學的變化特征
    2 Ca²⁺對骨骼肌成肌細胞線粒體移動的調(diào)控
    3 H₂O₂對骨骼肌成肌細胞線粒體移動與融合分裂的影響
    4 H₂O₂對骨骼肌成肌細胞線粒體移動的調(diào)控機制
    5 研究意義與展望
第五部分 結(jié)論
參考文獻
文獻綜述
個人簡歷
致謝



本文編號：3896897