目的復(fù)制20 m J/cm2的UVB誘導(dǎo)的Ha Ca T細(xì)胞凋亡模型,從溶酶體組織蛋白酶B(Cathepsin B,Cat B)/Bid/Bax/線粒體細(xì)胞色素c(Cytochrome c,Cyt c)的角度,研究扇貝多肽(Polypeptide from Chlamys farreri,PCF)抑制UVB輻射誘導(dǎo)的Ha Ca T細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制。方法建立20 m J/cm2的UVB誘導(dǎo)Ha Ca T細(xì)胞凋亡模型。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)組別:對(duì)照組、UVB模型組、UVB+1.42 mmol/L PCF組、UVB+2.84 mmol/L PCF組、UVB+5.69 mmol/L PCF組、UVB+5.68 mmol/L Vc陽(yáng)性對(duì)照組、Control si RNA組、Bid-si RNA組、Bax-si RNA組和Cat B抑制劑CA-074Me(10mmol/L)組。以Hoechst 33258熒光染色法檢測(cè)UVB輻射后18h細(xì)胞凋亡率,RT-PCR檢測(cè)Cat B、Bid、Bax m RNA在UVB輻射后0、3、6、12、18、24h的經(jīng)時(shí)表達(dá)變化,RT-PCR和Western blot分別檢測(cè)P...

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
引言
第一章 實(shí)驗(yàn)材料
    1.1 主要試劑
    1.2 細(xì)胞株
    1.3 主要儀器設(shè)備
第二章 實(shí)驗(yàn)方法
    2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        2.1.1 人HaCaT角質(zhì)形成細(xì)胞的正常培養(yǎng)、凍存和復(fù)蘇
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)分組及UVB輻射
    2.2 實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目及檢測(cè)指標(biāo)
        2.2.1 Hoechst 33258 熒光染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        2.2.2 RT-PCR(Reverse Transcription PCR)反應(yīng)
        2.2.3 免疫印跡Western blot
        2.2.4 siRNA脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染
    2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 UVB輻射HaCaT細(xì)胞后凋亡率的檢測(cè)
    3.2 UVB輻射HaCaT細(xì)胞后Cat B、Bid、Bax m RNA表達(dá)經(jīng)時(shí)變化
    3.3 PCF對(duì)UVB輻射HaCaT細(xì)胞后Cat B、Bid、Bax mRNA表達(dá)的影響
    3.4 PCF對(duì)UVB輻射HaCaT細(xì)胞后Cat B、Bid、Bax蛋白表達(dá)影響
    3.5 PCF對(duì)UVB輻射HaCaT細(xì)胞后胞漿和線粒體內(nèi)細(xì)胞色素C表達(dá)的影響
    3.6 脂質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HaCaT細(xì)胞及轉(zhuǎn)染效率的檢測(cè)
    3.7 Bid-siRNA、Bax-siRNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和抑制劑CA-074Me對(duì)UVB輻射HaCa T細(xì)胞后Cat B、Bid、Bax表達(dá)的影響
    3.8 Bid-siRNA、Bax-siRNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和抑制劑CA-074Me對(duì)UVB輻射HaCa T細(xì)胞后胞漿和線粒體內(nèi)Cyt c表達(dá)的影響
第四章 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    摘要
    引言
    1. 溶酶體內(nèi)水解酶
    2. 溶酶體膜通透性改變的相關(guān)機(jī)制
        2.1 活性氧
        2.2 脂質(zhì)和其代謝物
        2.3 Bcl-2 家族的促凋亡成員
        2.4 p53
    3. 溶酶體與細(xì)胞凋亡通路
        3.1 溶酶體在腫瘤細(xì)胞中的相關(guān)凋亡通路
        3.2 溶酶體在非腫瘤細(xì)胞中的相關(guān)凋亡通路
    4. 溶酶體相關(guān)疾病
    5. 小節(jié)與展望
    綜述參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
致謝



本文編號(hào)：3862572