目的復(fù)制20 m J/cm2的UVB誘導(dǎo)的Ha Ca T細(xì)胞凋亡模型,從溶酶體組織蛋白酶B(Cathepsin B,Cat B)/Bid/Bax/線粒體細(xì)胞色素c(Cytochrome c,Cyt c)的角度,研究扇貝多肽(Polypeptide from Chlamys farreri,PCF)抑制UVB輻射誘導(dǎo)的Ha Ca T細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制。方法建立20 m J/cm2的UVB誘導(dǎo)Ha Ca T細(xì)胞凋亡模型。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)組別:對照組、UVB模型組、UVB+1.42 mmol/L PCF組、UVB+2.84 mmol/L PCF組、UVB+5.69 mmol/L PCF組、UVB+5.68 mmol/L Vc陽性對照組、Control si RNA組、Bid-si RNA組、Bax-si RNA組和Cat B抑制劑CA-074Me(10mmol/L)組。以Hoechst 33258熒光染色法檢測UVB輻射后18h細(xì)胞凋亡率,RT-PCR檢測Cat B、Bid、Bax m RNA在UVB輻射后0、3、6、12、18、24h的經(jīng)時表達(dá)變化,RT-PCR和Western blot分別檢測P...

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
引言
第一章 實(shí)驗(yàn)材料
    1.1 主要試劑
    1.2 細(xì)胞株
    1.3 主要儀器設(shè)備
第二章 實(shí)驗(yàn)方法
    2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        2.1.1 人HaCaT角質(zhì)形成細(xì)胞的正常培養(yǎng)、凍存和復(fù)蘇
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)分組及UVB輻射
    2.2 實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目及檢測指標(biāo)
        2.2.1 Hoechst 33258 熒光染色法檢測細(xì)胞凋亡
        2.2.2 RT-PCR(Reverse Transcription PCR)反應(yīng)
        2.2.3 免疫印跡Western blot
        2.2.4 siRNA脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染
    2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 UVB輻射HaCaT細(xì)胞后凋亡率的檢測
    3.2 UVB輻射HaCaT細(xì)胞后Cat B、Bid、Bax m RNA表達(dá)經(jīng)時變化
    3.3 PCF對UVB輻射HaCaT細(xì)胞后Cat B、Bid、Bax mRNA表達(dá)的影響
    3.4 PCF對UVB輻射HaCaT細(xì)胞后Cat B、Bid、Bax蛋白表達(dá)影響
    3.5 PCF對UVB輻射HaCaT細(xì)胞后胞漿和線粒體內(nèi)細(xì)胞色素C表達(dá)的影響
    3.6 脂質(zhì)體瞬時轉(zhuǎn)染HaCaT細(xì)胞及轉(zhuǎn)染效率的檢測
    3.7 Bid-siRNA、Bax-siRNA瞬時轉(zhuǎn)染和抑制劑CA-074Me對UVB輻射HaCa T細(xì)胞后Cat B、Bid、Bax表達(dá)的影響
    3.8 Bid-siRNA、Bax-siRNA瞬時轉(zhuǎn)染和抑制劑CA-074Me對UVB輻射HaCa T細(xì)胞后胞漿和線粒體內(nèi)Cyt c表達(dá)的影響
第四章 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    摘要
    引言
    1. 溶酶體內(nèi)水解酶
    2. 溶酶體膜通透性改變的相關(guān)機(jī)制
        2.1 活性氧
        2.2 脂質(zhì)和其代謝物
        2.3 Bcl-2 家族的促凋亡成員
        2.4 p53
    3. 溶酶體與細(xì)胞凋亡通路
        3.1 溶酶體在腫瘤細(xì)胞中的相關(guān)凋亡通路
        3.2 溶酶體在非腫瘤細(xì)胞中的相關(guān)凋亡通路
    4. 溶酶體相關(guān)疾病
    5. 小節(jié)與展望
    綜述參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
致謝



本文編號：3862572