發(fā)布時間：2023-10-29 14:44

　　目的選取5種常見體液的10條特異性miRNAs基因,通過逆轉(zhuǎn)錄-終點法PCR技術(shù)構(gòu)建復(fù)合擴(kuò)增體系,并對體系的靈敏度進(jìn)行測試,之后使用該體系檢測靜脈血、精液、月經(jīng)血、唾液和陰道分泌液中miRNAs的表達(dá)情況。方法首先設(shè)計10條miRNAs標(biāo)記的逆轉(zhuǎn)錄引物和cDNA擴(kuò)增引物,構(gòu)建10個標(biāo)準(zhǔn)miRNAs標(biāo)記的熒光復(fù)合體系,并進(jìn)行靈敏度測試。然后使用miRNeasy Mini Kit(QIAGEN)提取體液樣本的RNA,運用熒光復(fù)合體系進(jìn)行檢測,并對檢測結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果本研究得到10個標(biāo)準(zhǔn)miRNAs標(biāo)記的分型結(jié)果,標(biāo)準(zhǔn)miRNAs標(biāo)記的熒光復(fù)合體系的檢測靈敏度為總miRNAs模板量≥1ng。靜脈血樣本10條miRNA檢測結(jié)果:miR-451、miR-144-3p、miR-144-5p,峰值在3 000～7 000 rfu之間;月經(jīng)血樣本分型結(jié)果:miR-214、miR-451、miR-144-3p、miR-205-5p、miR-203-3p,峰值在800～7 000 rfu之間;陰道分泌物樣本分型結(jié)果:miR-144-3p、miR-203-3p, miR-205-5p,峰值在600～3 0...

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 樣本
    1.2 標(biāo)準(zhǔn)體系模板制備
    1.3 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
    1.4 熒光復(fù)合PCR擴(kuò)增反應(yīng)
    1.5 擴(kuò)增反應(yīng)產(chǎn)物檢測及數(shù)據(jù)分析
    1.6 靈敏度測試
    1.7 實際樣本提取與檢測
2 結(jié)果
    2.1 10個合成標(biāo)準(zhǔn)miRNAs分型結(jié)果
    2.2 靈敏度測試
    2.3 實際樣本測試
        2.3.1 樣本中提取總RNA的量
        2.3.2 不同樣本miRNAs分型檢測結(jié)果
4 討論



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