目的:構(gòu)建適用于降解檢材的核小體保護(hù)遺傳標(biāo)記法醫(yī)學(xué)復(fù)合檢測體系。由于核小體核心DNA受到組蛋白八聚體的保護(hù),因此,在這區(qū)域內(nèi)的DNA不易被降解。本課題旨在篩選人體組織DNA中受到核小體組蛋白八聚體保護(hù)的遺傳標(biāo)記并建立基于二代測序技術(shù)的檢測復(fù)合體系,從而實(shí)現(xiàn)對降解檢材的檢測。方法:使用微球菌核酸酶對不同組織樣本DNA進(jìn)行消化,并對消化后的DNA片段進(jìn)行文庫制備和定量,使用Hi Seq測序平臺進(jìn)行測序。通過生物信息學(xué)的方法篩選出適用于法庭科學(xué)檢驗(yàn)的SNPs(single nucleotide polymorphisms,SNPs,單核苷酸多態(tài)性)位點(diǎn)。通過對引物,復(fù)合擴(kuò)增體系及其反應(yīng)條件等方面的優(yōu)化,建立基于二代測序技術(shù)的復(fù)合檢測體系,并對該體系對于法醫(yī)學(xué)樣本的進(jìn)行評估檢測。結(jié)果:在心肌等組織樣本核小體核心DNA測序中共找到11,897,115個(gè)SNP位點(diǎn),其中226,395個(gè)SNP位點(diǎn)符合多態(tài)性頻率接近0.5。最終建立了包含有40個(gè)SNP位點(diǎn)二代測序技術(shù)的復(fù)合檢測體系。該體系對1ng模板量的檢測準(zhǔn)確率為100%,DNA模板量為0.1ng時(shí),檢測準(zhǔn)確率可達(dá)到90%,對靜脈血游離細(xì)胞DNA檢...

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
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前言
第一部分 核小體核心DNA提取和高通量測序
    1 材料與方法
        1.1 樣本來源
        1.2 主要儀器
        1.3 主要試劑
        1.4 主要試劑配置
        1.5 核小體核心 DNA 提取
        1.6 核小體核心 DNA 測序
    2 結(jié)果
    3 討論
    4 結(jié)論
第二部分 復(fù)合體系構(gòu)建與優(yōu)化
    1 材料與方法
        1.1 樣本處理
        1.2 主要儀器
        1.3 主要試劑
        1.4 主要試劑配置
        1.5 特異性遺傳標(biāo)記篩選
        1.6 引物設(shè)計(jì)與評估
        1.7 復(fù)合體系的優(yōu)化
        1.8 復(fù)合體系高通量測序和數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果
    3 討論
    4 結(jié)論
第三部分 復(fù)合體系驗(yàn)證
    1 材料與方法
        1.1 樣本來源
        1.2 主要儀器
        1.3 主要試劑
        1.4 主要試劑配置
        1.5 全基因組DNA提取
        1.6 DNA純化濃縮
        1.7 游離DNA提取
        1.8 機(jī)械打斷
        1.9 核酸酶消化
        1.10 標(biāo)準(zhǔn)DNA稀釋
        1.11 復(fù)合體系驗(yàn)證
        1.12 降解檢材STR驗(yàn)證
    2 結(jié)果
    3 討論
    4 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)(References)
附錄
致謝
在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果
個(gè)人簡歷



本文編號：3794423