一.紅景天苷對(duì)失重性肌萎縮形成的影響及機(jī)制研究 在航天飛行尤其是中長(zhǎng)期航天飛行中，微重力將導(dǎo)致失重性肌萎縮的發(fā)生，主要以抗重力肌如比目魚肌萎縮尤為嚴(yán)重，其特征性表現(xiàn)為肌肉重量丟失、肌纖維橫截面積下降，并伴隨慢肌纖維向快肌纖維類型轉(zhuǎn)變�，F(xiàn)有的物理對(duì)抗措施并不足以緩解失重性肌萎縮的發(fā)生，嚴(yán)重影響航天員在軌飛行任務(wù)的完成和返回地面后的健康恢復(fù)。面對(duì)我國(guó)空間站、載人登月等長(zhǎng)期空間飛行的巨大挑戰(zhàn)，亟需研發(fā)包括藥物在內(nèi)的新的有效防護(hù)對(duì)抗措施。 我們前期的研究結(jié)果表明，尾懸吊模擬失重誘導(dǎo)的比目魚肌萎縮中，對(duì)骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育發(fā)揮重要調(diào)控作用的TGF-β1因子及下游關(guān)鍵信號(hào)介導(dǎo)因子Smad3被選擇性激活；敲除Smad3可選擇性抑制尾懸吊誘導(dǎo)的比目魚肌肌肉重量丟失、肌纖維萎縮和慢肌纖維向快肌纖維類型的轉(zhuǎn)變。以上結(jié)果提示Smad3可作為失重性肌萎縮對(duì)抗藥物篩選的作用靶點(diǎn)。天然植物紅景天及其有效活性成分紅景天苷可以抑制肝腎臟組織中TGF-β1的表達(dá)，但未見(jiàn)紅景天/紅景天苷對(duì)骨骼肌中TGF-β1/Smad3通路表達(dá)影響的報(bào)道。 本研究以野生型C57BL/6小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，利用紅景天苷或同等劑量PBS灌胃28天后，...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

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中文摘要
ABSTRACT
第一部分 紅景天苷對(duì)失重性肌萎縮形成的影響及機(jī)制研究
    前言
        一. 骨骼肌的結(jié)構(gòu)和分類
        二. 失重對(duì)骨骼肌的影響及防護(hù)對(duì)抗
        三. 失重性肌萎縮的分子機(jī)制研究
        四. 紅景天/紅景天苷的藥理作用
    實(shí)驗(yàn)材料和方法
        一. 實(shí)驗(yàn)材料和試劑
            1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            2. 實(shí)驗(yàn)儀器與耗材
            3. 主要試劑
            4. 主要抗體
            5. 主要工具酶、載體及分子量
            6. 主要試劑盒
        二. 實(shí)驗(yàn)方法
            1. 動(dòng)物模型及樣品準(zhǔn)備
            2. real time PCR 檢測(cè)目的基因表
            3. 組織免疫熒光染色
            4. Western blot 檢測(cè)目的蛋白表達(dá)
            5. 載體構(gòu)建與突變
            6. 質(zhì)粒大提
            7. 體內(nèi)轉(zhuǎn)染
            8. 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            9. 雙熒光素酶檢測(cè)
            10. 組織染色質(zhì)免疫共沉淀
            11. 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        一. 紅景天苷對(duì)尾懸吊誘導(dǎo)的小鼠肌肉萎縮的影響
            1. 紅景天苷處理與未處理小鼠的表型特征
            2. 紅景天苷對(duì)尾懸吊誘導(dǎo)的小鼠體重及后肢背側(cè)肌肉重量的影響
            3. 紅景天苷對(duì)尾懸吊誘導(dǎo)比目魚肌肌纖維萎縮的影響
            4. 紅景天苷對(duì)尾懸吊誘導(dǎo)比目魚肌中萎縮相關(guān)因子表達(dá)的影響
        二. 紅景天苷對(duì)尾懸吊誘導(dǎo)的肌纖維類型轉(zhuǎn)變的影響
            1. 紅景天苷對(duì)尾懸吊誘導(dǎo)的比目魚肌中不同亞型肌纖維含量的影響
            2. 紅景天苷對(duì)尾懸吊誘導(dǎo)的比目魚肌中快慢肌相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
        三. p-Smad3 在紅景天苷對(duì)抗失重性肌萎縮形成中對(duì)蛋白質(zhì)代謝的調(diào)控作用
            1. 紅景天苷對(duì)尾懸吊誘導(dǎo)的 TGF-β1/Smad3 信號(hào)通路激活的影響
            2. pGL-3-Atrogin-1 及 pGL-3-MuRF1 熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒的構(gòu)建
            3. p-Smad3 對(duì) pGL-3-Atrogin-1 及 pGL-3-MuRF1 熒光素酶表達(dá)的影響
            4. p-Smad3 在 Atrogin-1 基因啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合位點(diǎn)的預(yù)測(cè)分析
            5. ChIP-re-ChIP 實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證 Smad3 與 Foxo3a 相互作用對(duì) Atrogin-1 的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用
            6. 紅景天苷對(duì) p-Smad3/FOXO 蛋白復(fù)合體在 Atrogin-1 啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合的影響
        四. p-Smad3 在紅景天苷對(duì)抗尾懸吊誘導(dǎo)的慢肌纖維向快肌纖維類型轉(zhuǎn)變中的調(diào)控作用
            1. 靶向敲除 Smad3 對(duì)尾懸吊誘導(dǎo)的肌纖維類型轉(zhuǎn)變的影響
            2. pGL-3-MHC-IIa 及 pGL-3-MHC-IIb 熒光素酶報(bào)告載體的構(gòu)建
            3. p-Smad3 對(duì) pGL-3-MHC-IIa 或 pGL-3-MHC-IIb 熒光素酶表達(dá)的影響
            4. p-Smad3 在 MHC-IIa 或 MHC-IIb 基因啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合位點(diǎn)的預(yù)測(cè)分析
            5. ChIP 實(shí)驗(yàn)檢測(cè) Smad3 對(duì) MHC-IIa 或 MHC-IIb 基因啟動(dòng)子區(qū)域的直接結(jié)合作用
            6. Smad3 結(jié)合位點(diǎn)突變載體（pGL-3-MHC-IIa mut 及 pGL-3-MHC-IIb mut）的構(gòu)建
            7. p-Smad3 對(duì) pGL-3-MHC-IIa mut 或 pGL-3-MHC-IIb mut 熒光素酶表達(dá)的影響
            8. 紅景天苷對(duì) p-Smad3 在 MHC-IIa 和 MHC-IIb 啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合的影響
    討論
        一. 紅景天苷對(duì)尾懸吊誘導(dǎo)的肌萎縮的對(duì)抗作用及機(jī)制
        二. 紅景天苷對(duì)尾懸吊誘導(dǎo)的慢肌纖維向快肌纖維類型轉(zhuǎn)變的抑制作用及機(jī)制
    結(jié)論
第二部分 紅景天苷對(duì)杜氏肌萎縮動(dòng)物模型的治療作用研究
    前言
    實(shí)驗(yàn)材料和方法
        一. 實(shí)驗(yàn)材料和試劑
            1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            2. 主要試劑盒
        二、實(shí)驗(yàn)方法
            1. 紅景天苷處理和未處理小鼠模型的制備
            2. real time PCR 檢測(cè)目的基因表達(dá)
            3. HE 染色檢測(cè)骨骼肌內(nèi)炎性反應(yīng)
            4. Masson 染色檢測(cè)骨骼肌纖維化
            5. 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        一. 紅景天苷對(duì) mdx 小鼠骨骼肌病理?yè)p傷的治療作用
            1. 紅景天苷對(duì) mdx 小鼠骨骼肌炎性反應(yīng)的影響
            2. 紅景天苷對(duì) mdx 小鼠骨骼肌中成肌分化因子表達(dá)的影響
            3. 紅景天苷對(duì) mdx 小鼠骨骼肌纖維化的影響
            4. 紅景天苷對(duì) mdx 小鼠骨骼肌快慢肌纖維表達(dá)的影響
            5. 紅景天苷對(duì) mdx 小鼠骨骼肌 TGF-β1/Smad3 信號(hào)通路表達(dá)的影響
        二. 尾懸吊對(duì) mdx 小鼠骨骼肌病理?yè)p傷的影響
            1. 尾懸吊對(duì) mdx 小鼠骨骼肌壞死肌纖維含量的影響
            2. 尾懸吊對(duì) mdx 小鼠骨骼肌炎性反應(yīng)及中心核含量的影響
            3. 尾懸吊對(duì) mdx 小鼠骨骼肌萎縮的影響
            4. 尾懸吊對(duì) mdx 小鼠骨骼肌中快慢肌纖維含量的影響
    討論
    結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄I. 攻讀博士學(xué)位論文期間論文發(fā)表及專利申請(qǐng)情況
附錄II. 綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄III. 已投論文
個(gè)人簡(jiǎn)歷
致謝



本文編號(hào)：3740211