SOX4是胚胎發(fā)育過程中重要的轉(zhuǎn)錄因子,參與心臟、淋巴細(xì)胞、神經(jīng)系統(tǒng)等多種器官的發(fā)育。在小鼠胚胎發(fā)生過程中SOX4蛋白質(zhì)表達(dá)廣泛,但在成年小鼠體內(nèi)SOX4蛋白質(zhì)只表達(dá)在胸腺、骨髓和生殖腺中。現(xiàn)有研究表明抗腫瘤藥物,如etoposide、前列腺素等可以上調(diào)SOX4蛋白質(zhì)表達(dá)水平,干涉SOX4蛋白質(zhì)后將抑制抗腫瘤藥物誘發(fā)細(xì)胞凋亡的功能。Etoposide、DOX等化學(xué)藥物作用本質(zhì)是使腫瘤細(xì)胞發(fā)生DNA鏈斷裂,激活DNA損傷信號(hào)通路,使腫瘤細(xì)胞發(fā)生生長(zhǎng)阻滯或是凋亡。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖茄芯喀蒙渚�、DOX等DNA損傷誘變劑作用細(xì)胞后能否調(diào)控SOX4蛋白質(zhì)表達(dá)水平;DNA損傷引起的SOX4蛋白質(zhì)表達(dá)水平的變化是否具有生理意義。通過檢測(cè)γ射線等DNA損傷誘變劑刺激細(xì)胞后SOX4的蛋白質(zhì)水平,以及轉(zhuǎn)錄水平的變化,明確了DNA損傷誘發(fā)SOX4蛋白質(zhì)表達(dá)上調(diào)的現(xiàn)象,但這種變化不是發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平,提示有可能是蛋白質(zhì)翻譯后修飾的變化使SOX4發(fā)生累積。為了確定DNA損傷誘導(dǎo)SOX4上調(diào)是否依賴于p53,選用HCT116以及HCT116 1953-/-細(xì)胞,檢測(cè)了γ射線照射后SOX4的蛋白質(zhì)水平變化,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明DN... 

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 SOX4單克隆抗體制備
    材料與方法
        1.材料及來源
        2.實(shí)驗(yàn)方法
    結(jié)果與討論
        1.pGEX-KG-SOX4(130-344)aa表達(dá)載體菌液PCR鑒定
        2.pGEX-KG-SOX4(130-344)aa表達(dá)載體酶切鑒定
        3.pGEX-KG-SOX4(130-344)aa小量誘導(dǎo)
        4.pGEX-KG-SOX4(130-344)aa大量誘導(dǎo)
        5.GST-SOX4(130-344)aa蛋白質(zhì)定量
        6.BALB/c小鼠GST-SOX4(130-344)aa抗原免疫效果檢測(cè)
        7.雜交瘤細(xì)胞篩選、亞克隆及大量生產(chǎn)結(jié)果
        8.通過western blot對(duì)SOX4單克隆抗體進(jìn)行功能檢測(cè)
    小結(jié)
第二部分 DNA損傷誘導(dǎo)SOX4蛋白質(zhì)上調(diào)
    材料與方法
        1.材料及來源
        2.實(shí)驗(yàn)方法
    結(jié)果與討論
        1.各個(gè)細(xì)胞系中SOX4蛋白質(zhì)表達(dá)
        2.γ射線誘導(dǎo)H460、HCT116細(xì)胞中SOX4蛋白質(zhì)表達(dá)上調(diào)
        3.化學(xué)藥物引起HCT116、H460細(xì)胞中SOX4蛋白質(zhì)表達(dá)上調(diào)
        4.DNA損傷誘變劑并不引起SOX4轉(zhuǎn)錄水平變化
        5.DNA損傷所引起的SOX4蛋白質(zhì)水平變化不依賴于p53
    小結(jié)
第三部分 SOX4蛋白質(zhì)在細(xì)胞DNA損傷反應(yīng)中的功能初探
    材料與方法
        1.材料及來源
        2.實(shí)驗(yàn)方法
    結(jié)果與討論
        1.檢測(cè)H460細(xì)胞SOX4干涉效果
        2.SOX4促進(jìn)DNA損傷誘導(dǎo)的促凋亡因子BAX的表達(dá)
    小結(jié)
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄
發(fā)表文章
綜述
致謝



本文編號(hào)：3668610